CHEMOTHERAPY VOL17NO.2 123 新しいテトラサイクリン誘導体Doxycyclineに中沢昭関する細菌学的研究三東京大学医科学研究所細菌学教室小野尚子小林愼子小松初子京都薬科大学微生物学教室はじめに第1表 25 StaPhツlococcusaureecs209-P 東大岩田教授分与株S 25 皇 StaPdy・aesreusE46 より合成されたもので α一6-Deoxy- taPhy.albus 次の化学構造を示す。 25 oxytetracyclineで αα￡ OH N(CH3)2 19 CH3 09 StrePtococcushemolyticusS23 StrePt.wiridans 25 StrePt.faecalis 5 Sarcinalutea 12 皇 Diplococcuspmeecmoniae皿 Cerynebαcteriumdiphtheriae 56 Bacillusanthracis 56 と H2 BacillussubtilisPCI-219 09 OH O 19 O ￡ Nei∬eriagonorrhoeae OH Nei∬eriαmeningitidis ま 12 塩酸塩は黄色結晶性物質である。特徴としては黄色ブ P名o伽5vulgan's Escherichiacoli医科研 25 E。celiNIH ることが出来るといわれている。今回,私どもは細菌学 Salmonellaζ 的面より本物質の評価を行なつた結果,次のごとき成績 Salmonellaenteritidis ソPhiT-287 5 25 が得られたので報告する。 α皿α盗少量投与で効果を挙げ 25 吸収と半減期の延長で,1E1回 Aeroba`teraerogenes 25 強力に作用を示すことおよびほとんど完全な含 inwitroでり 25 Klebsiellapmeecmoniae ドウ球菌を含めたグラム陽性菌に対して他のTCよ 5 Shigelladysenteriαe 号 Shigellaboツdii 19 09 56 α L 対照として日本化学療 5 Shigellaflexneri2a 研究塞保存の標準菌種に対するDoxycycline(DOTC) の抗菌力をTetracycline(TC)を 5 Shigellasonnei 抗菌スペクトラム ClostridiZtmtetani Clostridiumwelchii 法学会感受性測定法に準じて実施した。なおレンサ球菌,肺炎球菌え・リン菌,ズジフテリア菌については10%血イ膜炎菌についてはGC培気性菌群の破傷風菌,ボツリヌス菌,ウ ID・TC 56 56 56 % ㈱。9 η E n 鴇 ⑱ 。9 p % 聡 5 56 η 56 5 % % % % 。9 ㈱鈴 L L L L α α a a a α α q α α a 2 r a r a ◎ α α α α α α 可 ← -← 12 ファイザー研究所においてOxytetracycline のhydrogenationに TC 種含菌新しいテトラサイクリン誘導体であるDoxycycline は1963年抗菌スペクトラム(mcg/ml) Clostridit`mうottelinum 液を加地を・まte .嫌ェルチー菌についてはチオグリコール酸塩培地を用いた液体稀釈法によ臨床分離ブドウ球菌に対する感受性 1967年度臨床各科領域に於いて分離された病原ブドウり測定した。その成績は第1表に示される如くである。球菌約100株すなわちTCとれと比較した。測定法は前記同様の日本化療学会標準法全く伺様にグラム陽性および陰性菌群に対する感受性(MICmcg/ml)をTCのと広い抗菌スペクトラムを示している。そして特徴としに依つた。その成績は第2表(そて,各種細菌群に対する抗菌力をTCのくである。すなわちTC感とDOTCが2∼4倍それと比較する強力になつていることがわかる。の1,2)にそ示される如受性株に対しては標準菌として置いたところのStaPhツloceccusaureus209-P株と CHEMOTHERAPY 124 第2表臨床分離病原ブドウ球菌のDOTC,TCに 5 81 . 5 茄 12 12 5 25 5 25 5 25 含 03 25 a 56 L 09 T ームー14←9研 1 -," Q』9α3907Bl.お3126.2512S2550100 _,_一,ノ TC MIC 00.390、781.563.126.2512.52550100 MIC胴￠%,二齢 78 02 e.19 1 ' 12 78 01 10 騨 56 00 皇 q α α 99 0.39 ノー㍉ 12 25 98 1.56 ・一、1＼ノ、!、 9 39 97 25 e.78 20 5 78 96 ま α 95 lOO 3.12 30 ・ 12 94 00↑C MIC 6,25 40 お 93 釦騨 12 ⑫ m の交叉耐性 125 DOTC -一一一TC 5 5 91 25 a の感受性分布ゆ 25 90 ・ a 5・。・。・￡。 1 1 磁← 88 。n㎝ 5 m m㎜m蜘臨床分離ブドウ球菌に対するDOTC,TC 12 78 87 12 聖慶 56 % m 5。蜘 m l m 第2図DOTC,TC間 50 第1図・ 5 ⑳ 86 ・孟 5・ q 。噌← 84 5 ◎ ﹁塒 5。蜘 m m 蜘 5。の如くなり,DOTCがTC に比し全体の山が左側の感受性の方向に片寄つており, 同様に100 らの現象は深く究明する必要が有ろうと思われる。次に 12 56 83 5 聯 25 ・感受性分布を調べると第1図かなり感受交叉耐性の認められる菌株も多い。今後これ 5 12 鷺 82 5 ● 56 曾 25 ● 25 ◎ 3 % 3 6 3 3 n a a a n 玖鳩蜘 % η m m n 5。 m ㎜ m 蜘皿・。己上 80 5 ・ 12 塵印)と ● に対しても同様に25∼50mcglml(○ 性化の傾向が認められる。しかし全くTCと ● 3 6 6 1 6 増強が耐性株のあるもの 79 程度の抗菌力(MICmcglml)の㎎ 52 26 100 3η mE蜘蜘蜘㎜m皿ηB m㎜m㎜蜘mm 蜘蜘㎞ m 蜘 π 51 % 12.5 卿り 0 9U O 1 50 % 100 ⑮ 76 12.5 50 12 ■ 12.5 6.25 ⑱ 74 100 6.25 @ η 100 100 70 100 認められる。次にTC100mcg/mlの mcg/m1の 3 6.25 100 69 1.56 100 68 23 6.25 100 ⑯ 碑 ⑫ 1.56 0.78 3.12 0.78 100 65 2 0 ⑳ 6.25 0.78 3.12 50 12.5 64 19 1.56 伺様に2∼4倍 63 18 1.56 62 17 0.78 61 100 60 50 ⑲ 100 12.5 6.25 0.78 48 50 ψ 100 46 100 100 45 100 100 幽 100 43 100 娼 100 100 16 100 41 15 100 59 如 14 12.5 100 100 58 13 6.25 39 100 25 38 100 100 12 100 100 駆 3.12 6.25 1、56 56 3.12 0.78 100 100 37 11 0.78 3.12 0.39 36 10 1.56 駒 9 3.12 0.39 100 100 34 8 0.78 33 7 3.12 32 6 0.78 3.12 0.78 100 55 31 5 100 100 54 12.5 50 3.12 0.78 100 30 ④ 3.12 29 3 100 28 2 6.25 100 D・Tcl':rc 27 1 1.56 番号蜘 TC Tcl翻D・TCITC 番号lD・TC 53 DOTC (mcglml) (その2) 対する感受性(その1)(mcg/m1) 番号 MAR。1969 CHEMOTHERAPY VOL.17NO.2 TCより明らかにDOTCのまた100mcg/mlの感受性の増強が認められる。所を見ても,その分布%はTCのれに比し少なく,左側の25∼50mcg/mlの 125 第4表 B・TC高そ (a)影感受性1こ傾度耐性ブドウ球菌の場合響を受けない場合(その1) DOTCStaPh.a"reitSNo.2 いている。次にDOTCとTC間の交叉耐性を調べると第2図の＼M正C Ce11/m1＼＼ ii。。15・i2SI・2・5i6・2513・・2i・・S6i・・78i・・b5 + 十 + 十十 + 十十 + 十十 + 十 +1+ +[+ +1+ 及ぼす接種菌量第5表の影響 A.感十感受性一一MICに十 + 第3表DOTC,TCの十十 + 十 ×104 + + + 十やや安定化している。十十十 + + ×105 ・2 11・・61・・781・・39 + 十十十 + + ×106 十十十 + + + ×107 と,TCに比しDOTCは10s∼107接種の感受性が皆同一一の1 .56mcg/mlとなり,接種に対する影響がTCより + 十 + + ×108 準株を用いる十 + + 1×109 示される如くで,すなわちStaPhylecoccecsaecreus209-P標 + の1,2)に + その成績は第3表(そ StaPh.aecreusNo.2 ・2・鋭6・2明3・孟璽畦。。!5・12・面受性ブドウ球菌の場合十十十 (その2) TC た。 A)感 ÷ 十十聞後の感受性の変動を調べ十十十十量を移殖して,37。C24時 + 十十十 + [エ1‡ 肉汁ブイヨンによる液体稀釈法に於いて種々の接種菌 + 十十 + ×104 十十十十 + ×105 種菌量の影響十 ÷ + 十十 1)接十 + 十十十 x106 抗菌作用に及ぽす諸因子の影響十 + 十十十 ×107 十十十十 x108 られる。十十十 1×109 耐性の認められる菌株と感受性化されている菌株が認め + 如き相関グラフが得られ,この成績からでも完全に交叉受性ブドウ球菌の場合(そ B.TC高の1) 度耐性ブドウ球菌の場合 (b)影 DOTCStaph.aecreus209-P 響を受ける場合(その1) DOTCStaph.aurettsNo.35 Cell/m1MICI…5・固・2・sl6・2513・・21・・56・・7Sl・・39 の2) (その2) TC StaPh.aurettSNo.35 MIC + + + + + + 十十示す株と, 十性菌に対して十かなり感受性化され25mcg/m1のMICを十全く同様に,100mcg/mlのMICを :H 十 ×103 度耐性ブドウ球菌の場合この場合には前記の如く100mcg/ml耐 ×104 + 一日 + 一 + 一 + 一 + 一 + 一十 ×104 ×10s 十十十一十一十一十一十一十一十 ×10s x106 十十十十一十十一 + 一一十一 ∼ 十一一十一一十一 ×106 +1+ +i+ 十 ×107 ×107 十十十十十一十一弓。。15・i251・2・5;6・2513・1211・・56i・・78i・・39 十一 1×108 + + 一 Cell/m1 + + 一 + ×10s + 十十十十十十十十十十十 DOTCが十受性ブドウ球菌の場合(そ十 B)TC高「丁=1 ×103 TCStaph.aureus2eg-P 2x109 x104 十一 + 一十一十一 + 一十一十一 ×10s + 十十十十十十一十一一十一一十一一一1 一一一一一 + 一十 ×106 十十十十よ工 + 一 x107 + A.感 ‡ 一十 1x108 + ×104 十・sl・2・56・251a・211・56i・・78i・・39 十 ×10s 十。。ls・十一 x106 一』+一偽ll/mlMIC}寺十一一十 m⋮ 一 ×107 一十十一 ×10s +1+ 十十十 i++1++ 十 2×109 示す株が存在するわけで,この両菌株について接種菌量の影響を調べた。 CHEMOTHERAPY 126 a)影響を受けない場合その成績は第4表(その1 第6表影響 50 25 3,121.56 6.25 12.5 0.78 α3glα ・9 α08 50 一一一一一一[L自 25 一一一一一一一一1+ 10 一一一一一一一一一一 5 一一一一一一一一一 0 一一一一一一一一一1十 100 50 25 3.12 1.56 0.78 50 一一一一』七を5 一一一一一一一一十れる)。響を受ける場合十十十十十十十・十十十の1,2)TC に示される如くでDOTCはTC MIC mcgこm1 に比し著明な抗菌力の増強が認は顕著である。例えば106接種の場合TCは100mcg/m1であは25mcg!mlとはTCは同じく100mcglmlであるがDOTC は6.25mcg/m亘となり,更接種菌量の少ない104で 1 625 12.5 % められ接種菌量によりその影響 0.39 0.19 0.08 十十十十十十十十十鱒一山 10 一一一 5 一一一一一一一十十十十 0 一一一一一一一十十十十第7表pHのにDOTC 影響はTC 5・mcglmlであるがD・TCで響迦1… 50 25 ・2・5i6・2-21・ 0.08 ・56i-39i…9 十十 + 十十 0.39 0,19 0.08 十十十十十十十十十十 + 十十一 6ヲ一 + } + 一 8 同様にStaphyloceccecs209P株を用いて人血清蛋白添加に十十 7 豆)血清蛋白の影響十十 6 感受性となる。十 25 十非常に良い 50 5 は3.12mcglmlとの % 104の場合感受性の増強が見らなり,また10sで 100 mcg/ml 各接種菌量で示した(わずかにるがDOTCで清韮 MIC とほとんど同様に100mcg/m1 ∼100mcg/m1以上のMICをその成績は第5表(そ血 DOTC ,2) に示される如くでDOTCはTC b)影 MAR.1969 よる抗菌力の変動を調べた。その成績は第6表でTCと礁に示される如くなMICの認められた。影響一一一一十 [ 一一十 [ 十十十十十十十十やや異なり, 十 +1 9 変化十 ( δ pH5∼7の一一 7 表に表される如くでpHの一 6 同様に抗菌力に及ぽすpHの影i響を調べた。その成績は第7 に対してはTCと E12 .56.253.121.560.78 十 pH MIC ＼、mcg/m1100 ＼.、 5 皿)pHの TC 変動が＼間では余りMICの変動が認められずO.39mcg/mlと同一の感受性を示した。 MICは何れも1.25mcg!m1と同一感受性でありDOTC の生体内効果の増強が認められた。マウス実験的感染症に対する治療効果 1)溶 1群10匹血レンサ球菌感染症に対する効果 1群10匹のdd系マウス(体重189±19)のにStrePtoceccushemolorticztsS23株し,2時 ∬)大腸菌感染症に対する効果間後に1回DOTCあ腹腔内を100LD5。るいはTCを接種各々2.5mg のdd系マウス(体重169±19)の EscherichiαcoliNIH株を2LDsoと3%Mucinを用して接種し,1時間後に1回DOTCあ々0。5mg経口投与し8日腹腔内に併るいはTCを各間観察を続けたところ,第4 経口投与し8日間その延命効果を観察した。その成績は図に示される如く両抗生物質の効果は全く同様に80%の第3図生存率を示した。なお本菌株に対するinvitroのMIC に示される如くでDOTCが60%のたのに対しTCでは40%で生存を示しあつた。なおinvitroのはDOTC3.12mcg/ml,TC6・25mcglmlであつた。 VOL. 17 NO. 2 第3図 CHEMOTHERAPY 実験的溶血レンサ球菌感染症に対する効果 1COLDs}i.p 2hrs後2.5ngマ 127 れる。残りの約80%は完全な交叉耐性が認められDOTC に対しても100mcg/mlをウスP.e. 示した。一方,TC感対してはやはり2∼4倍 loo 受性株にの感受性の増強が認められた。血清蛋白の添加による感受性の変動はTCとあつた。またpHの生存00τC 率50 同傾向で変化による影… 響ではDOTCのほうがやや安定であつた。マウス実験的感染症に対する治療効=果については,溶 ∬TC 血レンサ球菌感染症に対してはTC より優れた効果が認められたが,大腸菌感染症の治療効 cont; 果ではTCと 12345678 思う。観濃臼鉄第4図全く同一の効果しか得られなかつた。今後更に多くの菌種,菌株について検討する必要があろうと稿を終るに当り本研究に協力された教室の人見淳子} マウス実験的大腸菌感染症に対する効果藤野常子氏に厚く感謝する。 2しOpoLp. Ih・後 α5㎎マつ祁 α 参 lG◎_.一_一一"N NNNOO↑C髄TC 1) 考文 M. T. PEREZ-URENA & A. PORTOLES:"In vitro"' bacterial study with tance: Doxycycline. 生存50 Conf. 2) C◎nt. 」2345678 観祭B激まと 3) め新しいテトラサイクリン誘導体Doxycycline(DOTC) はTetracycline(TC)と同一の抗菌スペクトラムを有し,しかもその試験管内抗菌力は2∼4倍る。臨床分離ブドウ球菌約100株に面白い事実は,約60%に (MIC100mcg!ml)の mlのMICと Wien, subsIntern._ 1967 inst bacteria from clinical material. Intersci, Conf. Antimicrob. 6: 80-81, Oct. 26-28, 1966. A. R. ENGLISH & J. E. LYNCH: a-6-Deoxyoxytetracycline, II. Activity in studies in the mouse. Proc. chemotherapeutic Soc. Exp. Biol.. & Med. 1967 4)申 124: 586-691, 沢昭三,天野 Feb. 翠,池上田鶴子,和佐敏夫:新テトラサイクリン誘導体Tetracycline-6・methylenelysineに関する基礎的研究。Chemotherapy13 の感受性試験の結果特うち約20%の Chemoth. a. new antibiotic Proceedings V. HENRY D. ISENDERG & MARIE SIEGEL : In vitroactivity of a-6-deoxy-5-oxytetracycline aga- 増強されてい認められたTC高献 (3):146ノ>152,1965 度耐性株 5)山菌株は25∼50mcgl 本郁夫,中和子:新 cyclineになりやや感受性化の傾向が見られ,接種菌沢昭三,板垣守正,西野武志,宮しいテトラサイクリン誘導体Metha関する細菌学的研究。Chemotherapy 16(1):90∼92,1968 量の減少によつては更に著しい感受性化の傾向が認めら BACTERIOLOGICAL STUDY ON DOXYCYCLINE, A NEW TETRACYCLINE DERIVATIVE SHOZO NAKAZAWA The Institute of Medical Science, University of Tokyo HISAKO ONO, MAKIKO KOBAYASHI & HATSUKO KOMATSU Department The new the in vitro the results tetracycline derivative, antibacterial of the of Microbiology, sensitivity activity doxycycline, has 'the is 2 to 4 times studies on Kyoto College of Pharmacy more approximately same potent. 100 antibacterial spectrum Especially clinical isolates the as tetracycline interesting of thing staphylococci but about is that 川 128 CHEMOTHERAPY approximately 60% of the strains showed high resistance MAR. 1969 to tetracycline with MIC of 100 mcg/ml and approximately 20% of those showed a somewhat sensitive tendency to doxycycline with MIC of 25-50 mcg/ml, and this tendency of sensitivity increase became marked by decreasing the inoculum size. The remaining 80% of the strains showed complete cross resistance, the MIC against doxycycline being also 100 mcg/ml. On the other hand, doxycycline showed 2 to 4 times more activity against tetracycline sensitive ,strains. The same tendency for the change in sensitivity due to the addition of serum protein was seen as with 'tetracycline . Doxycycline was somewhat more stable in regard to the influence by the change of pH. In experimental infections in the mouse, therapeutic results with doxycycline in hemolytic streptococcal infections were superior to tetracycline but the results in E. coli infections were the same as tetracycline. There would be a need to conduct further studies on additional staphylococcal strains.