抗酸菌染色（チール・ネルゼン） Ziehl-Neelsen method for acid fast bacteria グラム陽性菌青黒色グラム陰性菌赤色核濃赤色線維素赤色原形質桃色グラム染色グラム陽性グラム陰性球菌 coccus ブドウ球菌連鎖球菌淋菌桿菌 bacillus 乳酸菌枯草菌大腸菌サルモネラ菌（腸内細菌）目的組織内の抗酸菌および抗酸性物質の証明に用いられる。原理抗酸菌はミコール酸と呼ばれる脂質が大量に含まれている。そのためフクシンなどの塩基性色素の水溶液には染まりにくいが、石炭酸の存在下では強く染色される。このように染色したものは水、無機酸溶液、アルコールにより脱色されにくい（水、酸、アルコール耐性）抗酸菌染色は無機酸（塩酸、硫酸）による脱色・分別に抵抗する性質を利用したもの。結核菌結核菌（Mycobacterium tuberculosis）は、ヒトの結核の原因となる真正細菌。 1882年、細菌学者ロベルト・コッホにより発見された。ヒトの病原菌としては、コッホの原則に基づいて病原性が証明された最初のものである。グラム陽性桿菌である抗酸菌の一種であり、細胞構造や培養のための条件など多くの点で他の一般的な細菌と異なる。特に、ミコール酸と呼ばれる特有の脂質に富んだ細胞壁を持つため消毒薬や乾燥に対して高い抵抗性を有する。保菌者の咳やくしゃみなどの飛沫、あるいはそれが乾燥したものを含むほこりなどから空気感染し、肺結核をはじめとする各種の結核の原因となる。コッホの原則 • ある一定の病気には一定の微生物が見出されること桿菌 • その微生物を分離できること • 分離した微生物を感受性のある動物に感染させて同じ病気を起こせること • そしてその病巣部から同じ微生物が分離されること球菌試薬 • カルボール・フクシン液石炭酸結晶（溶解） 2.5ml 100%アルコール 5.0ml 塩基性フクシン 0.5g 蒸留水 50.0ml • 1%塩酸アルコール • Lofflerのメチレン青液原液メチレン青5ｇと純エタノール100mlを混ぜ、密閉して37℃孵卵器中に1週間ほど入れて溶解し、上清を濾過して使用する。塩基性フクシン (CH3) Cl H N＝ NH2 ＝C H NH2 (CH3) 塩基性フクシンの構造式は上記の通り。カルボール・フクシン液の作製は処方の順序に試薬ビンに入れ、石炭酸アルコール混合液の中に塩基性フクシンを入れ、十分に溶解させ、最後に蒸留水を加える。メチレン青 (methylene blue) N H３C N N＋ S CH3 Cl- CH3 CH3 メチレンブルーは金魚やメダカなどの魚の細菌トラブルの治療薬としても使われている。原生動物真菌白点病・白雲病・黒斑病・黒ソブ・ツリガネムシ病水カビ病染色方法脱パラ・水洗カルボール・フクシン液３０分流水水洗１％塩酸アルコール３０秒流水水洗メチレン青液２秒流水水洗脱水・封入注意 • 塩酸アルコールによる分別は、切片が薄い桃色くらいになれば十分である。この後流水中で水洗すると、切片の薄桃色はやや濃くなるようにみえる。 • メチレン青による染色は組織成分などの後染色を目的とするものであり、数秒間でよい。あまり濃くない方が感じのよい染め上がりとなる。濃い場合は60~70%アルコールで分別するとよい。染色結果結核菌等の抗酸菌明赤～濃い赤色セロイド等の抗酸性物質明赤～濃い赤色組織成分淡い青色