P2−42 デング熱回復者リンパ球を用いたヒトFabライブラリーの構築と抗デングウイルス3型中和モノクローナル抗体の分離 Molecular cloning ofhuman anti−dengue monoclonal Fab antibody丘omFab libraly constructed using lymphocytes of volunteers who ha（i once contracte〔i with severe dengue infbction 上地玄一郎1、山城 1 長崎大学国際連携研究戦略本部哲2 2 熱帯医学研究所デング熱は世界中で広く発生する感染症だが、ワクチンなどの有効な予防法および治療法は確立されておらず早期の効果的な治療法の確立が急務である。前回我々は有効なデングウイルス感染症予防および治療法開発の一環として、ファージパニング法を用いてチンパンジー検体よりデングウイルス4型（DEN4）を効率よく中和するFab抗体を分離し、それを元にヒト化完全型IgG1を作製した（J．Viro1．Vbl．78，2004）。今回は、デングウイルス3型（DEN 3）を効率よく中和するヒトFab抗体の分離を試みた。㎜年9月、サンラザロ病院（フィリピン、マニラ）デング感染病棟にて回復期にあり同意を得られた成人入院者のうち、デングウイルス特異的IgM抗体陽性の8人から2 週間後に末梢血を採取しリンパ球を分離しライブラリーを作製した。 ELISAプレートに固層化した精製DEN3 （H−87株）に対してパニング（生物学的濃縮）後、コロニーハイブリダイゼーション法およびELISA法により精製 DEN3を認識するFab発現大腸菌を選抜した。 DEN3に対する中和活性能を有するFabをFocus reduction法により選別した。その結果、構築したヒトFabライブラリーのサイズは約3．5×107chであった。 DEN3を効果的に中和するFab発現クローンが選択され、プラスミドの塩基配列およびそのコードするアミノ酸配列を決定した。パニングにより得られたFab（3G6）は4．68μg／m1の濃度で50％focusreductionを示した。ヒトFab抗体はチンパンジー由来のヒト化抗体と比較し、HACA（h㎜an anti−chimeric antibodies）出現などが少ない可能性があり、実用化に向けて、迅速な進展が予見される。＊本研究はサンラザロ病院倫理委員会の承認を得、Elizabeth EO．Telan医師、MA．Theresa Alera医師の協力の下に行われた。（UECHI GENICHIRO etal．Centeroflntemational CollaborativeResearch，Univ ofNa． gasaki．） P2−43 パラグアイにおけるデング3型ウイルスの分子疫学 Phylogenetic relationship ofdengue−3vimses f｝om Paraguay DiazAquinoJose、湯偉峰、石井竜一、牧野芳大大分大学医学部感染分子病態制御 Dengue vims type−3（DENV−3）was reintroduced into the American region in1994，causing a m句or epidemic of dengue fever （DF）／dengue hemorrhagic fever（DHF）in Nicaragua and a small outbreak associated with DF in Panama．DENV−3has since been o仕culating in Central America．It has been reported in Guatemala and El Salvador，and it has also spread southwards into Vene− zuela and Brazil，thus causing m句or outbreaks．In this studyl we determined the nucleotide sequence ofthe entire envelope gene on l l strains ofDENV−3isolated in Paraguay ffom2002to2004and the findings were then compared with the published DENV− 3sequences to detemline the lineage ofthese isolates．The results showed that the Paraguayan strains are clustered into subtype III −B and are most closely related to the Brazilian and Martinique strains，fo110wed by the Cuban，V6nezuelan，and Mexican strains． A phylogenetic analysis indicated geographical movement ofthe subtype III−B strains：The Paraguayan strains were transmitted 丘om Central America through the Caribbean islands，Brazi1，and finally to Paraguay over a period ofabout eightyears．This is the first genomic characterization of the DENV−3strains ffom Paraguay・（Diaz Aquino Jose et aL First Dept of Public Health，Oita Univ，Oita，Japan、MakinoYoshihiro O97−586−5739）一182一