大腸菌と溶血性連鎖球菌のＬ型菌における４５℃ での増殖能とＨＳＰ６０産生量についてこれまでの目的： Spirosomeのペリプラズム局在を調べる大腸菌スフェロプラストを1.75％ NaCl液に懸濁し、攪拌した前後の菌体と攪拌上清中の蛋白を調べた。 A １ kDa 9467- 4330- ２３ B kDa 94 A, ３１．撹拌前のスフェロプラスト菌体２．撹拌後のスフェロプラスト菌体３．上清成分。 67 Spirosome 43 60kDa蛋白 B, 攪拌後の上清成分（A,３）抗HSP60によるウエスタンブロッティング。抗HSP60抗体 Ab2(Clone LK2) #MS-263-P1ABX (LVC, USA) HSP60もペリプラズムに局在するのかペリプラズム局在ならL型菌ではどうなっているのか野生型と L型菌の全菌体成分の比較(35℃､8時間培養）１２ E.coli の安定型 L型菌（ＥｃＬ株） kDa 9467- １ E.coli B （全菌体）２ E.coli L型菌（全菌体）矢印 spirosome蛋白 43- 30- 矢印 60 kDa 蛋白 35℃ 培養のL型菌 EcL株には spirosome蛋白と60 kDaに相当するバンドがなかった 45℃培養のL型菌ではHSP60が増加するか 45℃培養におけるＬ型菌(ＥｃＬ株）のHSP60 A 1 2 3 B 1 2 3 A, SDS-PAGE １．野生型(E.coli B)全菌体 kDa 94 94 ２．安定型Ｌ型菌全菌体 67 67 ３．培養上清 43 43 B, 抗HSP60モノクローナル抗体によるウエスタンブロッティング。１．野生型 30 30 ２．安定型Ｌ型菌３．培養上清矢印 60kDa蛋白 45℃培養のＬ型菌にもHSP60のバンドは見られなかった。 (L型菌はHSP60を産生せずに45℃で増殖できた) 大腸菌L型菌 NC7 株の45℃増殖能とHSP60産生量 (45℃、40℃､培養）抗HSP60モノクローナル抗体によるウエスタンブロッティング１２３ kDa １ E.coli K-12 45℃培養（野生型） 67- ２ EcL株 45℃培養（ L型菌）３ NC7株 4０℃培養（ L型菌）矢印 HSP60蛋白 K-12 EcL NC7 大腸菌Ｌ型菌 NC7株は45℃では増殖できなかったが、40℃で増殖しＨＳＰ60を産生した化膿レンサ球菌Ｌ型菌１２４L株とL-C株の45℃増殖能とHSP60産生量 (45℃、40℃､培養）抗HSP60モノクローナル抗体によるウエスタンブロッティング１２２３ kDa １１２４ P 株（野生型） 40℃培養 67- ２１２４ L 株（ L型菌） 40℃培養３ L-C株（ L型菌） 124P 124L 124L L-C 45℃培養 L型菌１２４ L株は45℃で増殖せず、40℃で増殖した菌でもHSP60 の産生は極めて少なかった(野生型の親株は産生した）Ｌ型菌 L-C株は45℃で増殖できHSP60も産生したＬ型菌の45℃での増殖能とＨＳＰ60の産生 45℃での増殖ＨＳＰ60の産生ＥｃＬ株 + －（Escherichia coli) ＮＣ7株ー (40℃では+ ） + 化膿レンサ球菌Ｌ－Ｃ株 + + （Streptococcus １２４Ｌ株ー (40℃では+ ）大腸菌－ pyogenes ) (NC7､124LのHSP60は40℃での産生を示す） L型菌のHSP60産生量は45℃増殖能とは必ずしも相関しない（HSP60は熱ショックストレスに直接には関連していない）大腸菌L型菌ＥｃＬ株とＮＣ7株の形質の違いＥｃＬ株親株に復帰できない HSP60 －１０μm ＮＣ7株細胞壁を作り親株に復帰できる HSP60 + 親株に復帰できない安定型Ｌ型菌はHSP60を産生しない NATURE Vol 392 1998 まとめ１．大腸菌と化膿レンサ球菌のL型菌では菌株により45℃での増殖能に差がみられた。２．HSP60の産生量は45℃の増殖能と相関しなかった。３．安定型L型菌は40℃～45℃で増殖する場合でもHSP60の産生は極めて少なかった。４．L型菌におけるHSP60の働きは主に細胞壁合成に関与する可能性が示唆された。５．L型菌の感染ではHSP60産生と非産生の場合があることが示唆された。