14 フナコシニュース 2008 年 8 月 15 日号 ● http://www.funakoshi.co.jp/ New New キナーゼ阻害スクリーニング細胞情報伝達タンパク質／酵素 PI 3-Kinase Assay Kit ヒト活性型キナーゼ PI 3 キナーゼの活性測定や，阻害物質のスクリーニングを行う際に有用なキットです。PI 3 キナーゼの阻害活性は， Lipid substrate へ取り込まれた [ γ 32P]-ATP 量を測定することにより決定します。 ※比活性はロットにより変動します。ご使用前に，製品添付のデータシートをご確認下さい。品名メーカー商品コード包装 / 価格（￥） Akt1, Active, Human, Recombinant〈PKB α〉 KDA PK-001-01 −80℃ M 操作法概略 20μg / 43,000 N 末端に His タグを含む。M.W.：59,055，純度：＞ 95％（SDS-PAGE）前処理 1. [ γ 32P]-ATP mix ＊ 1 と Lipid substrate vesicle を調製する。 CK2 α 1, δ C Subunit, Active, Human, Recombinant −80℃ KDA PK-010 10μg / 24,000 産生：E. coli ，M.W.：39,891，純度：＞ 95％（SDS-PAGE），Crystallization grade キナーゼアッセイ 2. Kinase assay mix ＊ 2 を調製し，室温で 5 分間インキュベーションする。 CK2 β , Human, Recombinant〈CSNK2B〉 KDA PK-011-01 −80℃ 10μg / 24,000 10μg / 43,000 産生：E. coli ，M.W.：24,900，純度：＞ 95％（SDS-PAGE） Erk1, Active, Human, Recombinant〈MAPK3〉 KDA PK-013-01 −80℃ 3. 2. に [ γ 32P]-ATP mix ＊ 1 を加え，反応を開始する。 4. 37℃で 15 分間インキュベーションする。 N 末端に His タグを含む。M.W.：44,508，純度：＞ 95％（SDS-PAGE） 5. 塩酸を加え，反応を停止する。 Erk2, Active, Human, Recombinant〈MAPK1〉 KDA PK-015-01 −80℃ Lipid substrate の抽出 5μg / 43,000 N 末端に His タグを含む。M.W.：44,556，純度：＞ 90％（SDS-PAGE） 6. 5. にクロロホルム／メタノール溶液を加える。 MKK6, Active, Human, Recombinant〈MAP2K6〉 KDA PK-019-01 −80℃ 7. 撹拌した後，遠心して二層に分離し，水層（上層）を捨てる。 8. 有機層（下層）を塩酸で洗浄し，水層（上層）を捨てる。 20μg / 43,000 GST タグを含む。M.W.：63,636，純度：＞ 90％（SDS-PAGE）定量＊ 3 9. 8. の有機層を TLC プレートで分離（展開溶媒／酢酸：イソプロパノー p38 α , Active, Human, Recombinant〈MAPK14, Isoform 2〉〈SAPK2A〉 KDA PK-020-01 −80℃ 20μg / 43,000 N 末端に His タグを含む。M.W.：42,690，純度：＞ 95％（SDS-PAGE）ル＝ 1：2）する。 10. プレート上の PI 3-Kinase のスポットを可視化させて定量する。＊ 1 キットに [ γ 32P]-ATP は含まれていません。 p53, Active, Human, Recombinant −80℃ KDA P-001 10μg / 60,000 N 末端に His タグを含む。産生：E. coli ，M.W.：46,420，純度：＞ 80％（SDS-PAGE）＊ 2 Reaction buﬀer ＋ Lipid substrate vesicle ＋ PI 3-Kinase お問い合わせ先 sample PI3 Kinase (p110 α /p85 α ) KDA LK-001-01 −80℃ 20μg / 46,000 p110 α と p85 α の複合体。p110 α の N 末端に His タグを含む。M.W.：128,372 ＊ 3 有機層を液体シンチレーションカウンターで測定することも可能（p110 α），83,598（p85 α），純度：＞ 90％（SDS-PAGE）です。試薬ＴＥＬ０３ Protein Kinase Assay Service キット内容 ● Reaction buﬀer ラジオアイソトープを用いたプロテインキナーゼ活性測定受託サービスです。お客様よりご提供いただいたプロテインキナーゼ／基質を ● ATP ● Lipid substrate ５ - ６８４１ - ６２０ - ６８４１ - ７７５ＦＡＸ０３５ ● Control PI 3-Kinase 品名メーカー商品コード PI 3-Kinase Assay Kit (8 × 12 assays) JBS PR-943 080815s_P14-16_k_n_i.indd 14 包装 / 価格（￥） 1 kit / 79,000 用いた活性測定，KinaseDetect 社が保有またはご提供いただいたプロテインキナーゼに対する供試物質の阻害効果や IC50 の測定を承ります。 ※アッセイ系は KinaseDetect 社が用意していますが，標準物質の変更や ATP 濃度などを指定することもできます。 ※価格，ご注文方法などの詳細については，当社受託・特注品業務担当（Tel.：03-5684-1645/Fax：03-5684-6539）までお問い合わせ下さい。プロテインキナーゼリスト AKT1 AKT2 AKT3 CamKII CDK1/cyclin B CDK2/cyclin A CDK5/p25 CHK2 CK1 CK2 α 1 CK2 α 2 CK2 holoenzyme ERK1 ERK2 GSK3 β JNK2 α 2/SAPK1a MEK1 MKK6 MLK1 p38 α /SAPK2a PKA, catalytic α PKC α Src ― 2008/07/29 16:08:04