熊本大学学術リポジトリ Kumamoto University Repository System Title アクチビンは胚性幹細胞から造血性内皮細胞への分化を促進する Author(s) 廣田, 冴香 Citation Issue date 2016-03-25 Type Thesis or Dissertation URL http://hdl.handle.net/2298/34622 Right 廣田冴香氏の学位論文審査の要旨論文題目アクチビンは胚性幹細胞から造血性内皮細胞への分化を促進する (Activinfacilitateshemogenicendothelialcelldifferentiationfromembryonicstemcells) マウスの個体発生においては、成体型造血幹細胞は、胎生10 .5日目に.・.-gonad-mesonephros(AGM)領域の背側大動脈に存在する造血性内皮細胞から発生してくる。この造血性内皮細胞は、側板中胚葉細胞由来である。これらの血液細胞の発生経路は、マウス胚性幹(ES)細胞とOP9ストローマ細胞との共培養による分化誘導によって再現することができる。いくつかの増殖因子が側板中胚葉細胞の発生に関わることが知られている。その中の1つアクチビンAは中胚葉誘導や内胚葉誘導に使用されるが、造血発生に対する効果はこれまでの報告では、培養条件により異なる。本研究はOP9スチビンAがトローマ細胞とES細胞の共培養でアク血管内皮細胞の血液細胞分化能力に与える影響について解析した。アクチビンA存在下でES細胞をOP9ストローマ細胞上で分化誘導すると、CD41+内皮細胞の分化が促進された。CD41+内皮細胞は、CD41一内皮細胞に比べ著しく高い血液細胞分化能力を示した。アクチビンA は、Flk-1+PDGFRα+(F+P+)未分化中胚葉細胞とFlk-1+PDGFRα れらの中胚葉細胞からCD41+造血性内皮細胞が分化した。F+P+中胚葉細胞とF+P一中胚葉細胞を、それぞれ OP9ス一(F+P-)側板中胚葉細胞を増加させ、こトローマ細胞と凝集体を作製し培養した結果、F+P+中胚葉細胞は多くの血液前駆細胞に分化し、その動態は二峰性のパターンを示した。一方、F+P一中胚葉細胞からは、ごく少数の血液前駆細胞しか発生しなかった。アクチビンAを用いて誘導された中胚葉細胞は血液細胞に分化しないという報告があるが、本研究ではアクチビンAとOP9ストローマ細胞の組み合わせの場合、造血性内皮細胞が効率よく誘導できることが示された。また、アクチビンAによって誘導されるFlk-1+中胚葉細胞は、血液細胞系列を発生させる複数の独立した前駆細胞を含むことが示唆された。この研究で、アクチビンAはOP9ス的にFlk-1+中胚葉細胞の発生を促進し、高い血液分化能を示すCD41+内トローマ細胞依存皮細胞を増加させることが明らかとなり、ES細胞から造血性内皮細胞を効率よく分化誘導するのに有用であることが示されたと言える。審査でぽ1)Primitiveとdefinitiveのいて、3)アクチビンAの点にっいて、5)OP9をどちらの血球が出現するのカ＼2)移作用機序、標的分子について、4)ア使った理由について、6)凝アウトの解析結果でFACSパクチビンAの植実験のpositivecontrolにつ濃度によって作用が異なる集体を使った培養方法について、7)SCLのターンが正常と異なる点について、8)培の方法で誘導した血管内皮細胞との違いについて、10)今ノック養細胞の移植方法について、9)他後どのように研究を展開していくかのプランについて、等、多角的な視点から質問が出され、申請者からは概ね適切な説明がなされた。本研究によって、多能性幹細胞から血液産生能力のある血管内皮細胞を誘導するにあたりアクチビンA の役割が明らかとなった。今後、この知見を使っての多能性幹細胞から造血幹細胞を誘導する方法への応用を考えるとき、本研究成果は重要な知見となり得る。以上より、学位に値すると判断された。ぢ審査委員長幹糸麟鶉鞭,L釈須