29pmA342 ミシマサ イ コにお け るサ イ コサ ポニ ン生合成機構 の解 明 ○野路 征昭 1,星野 佑弥 1,木岡 優里子 J,兼 目 裕充 1,岡田 岳人2 ,高橋 宏暢 1 関田 節子 2 ,豊 田 正夫 ,浅川 義範 l 徳島文理大生薬研 , 2 徳 島文理大香川薬 ) 1 1 ( 【目的】 ミシマサイ コ ( Bu pl e u r u mf al c at u mL. )の根 は､生薬 ｢ 柴胡｣ として､小 柴胡湯な どの漢方方剤 に配合 され てい る｡今 回､ ミシマサイ コの主要薬用成分で あるサイ コサポニ ンの生合成 に関与す る酵素群 の遺伝子 の単離､解析 を行 うこと で､サイ コサポニン生合成 の分子機構 の全容解 明を試みた｡ 【 方法 ･結果 】サイ コサポニンはオキシ ドスクア レンの環化 によ り生 じた β-ア ミ リンが､シ トクロム P450によ り酸化､水酸化 された後､糖転移酵素 によ り配糖体 化 され る とい う経路 によ り生合成 され ると考 え られ る｡今回､次世代 シー クエ ン サー を用いて ミシマサイ コの根 ､茎 ､葉 で発現 してい る遺伝子 について ESTデー タベースをそれぞれ作成 し､これ らの ESTデー タベースに対 して BLAST解析 を行 い､サイ コサポニ ン生合成 に関与す る と予想 され る酵素の候補遺伝子の探索 を行 った｡その結果 ､6種類 のオキシ ドスクア レン環化酵素 ( Bf OSC1 -6)の c DNA の 単離 に成功 した｡ これ ら 6種の酵素遺伝子 を酵母で発現 させ､機能解析 を行 った OSC2,5の 2つのオキシ ドスクア レン環化酵素がサイ コサポニ ン生合成 の 結果 ､Bf 前駆体である β-ア ミリンを生合成す ることを明 らかに した｡次に､ESTの解析 に 09種類 のシ トクロム P45 0遺伝子が発現 してい るこ よ り､ミシマサイ コの根では 1 とが示 されたが､その中か らサイ コサポニン生合成 に関与す るシ トクロム P450を n 探索 した｡ 次世代 シー クエ ンサー の解析 に よ り得 られ た リー ド配列 を用 いた i s i l i c o発現解析 よ り､各 シ トクロム P450遺伝子の根 ､茎､葉 での発現量 を比較 し､ 部位別 での発現パ ター ンが､主要な βア ミリン合成酵素である Bf OSC2 と同様 で あるシ トクロム P450を選別 し､酵母 を用いた機能解析 を行 った結果 ､その中の 1 種が βア ミリンの水酸化 に関与 していることが示 された｡
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