28P-pm065 ヒト UDP- グルクロン酸転移酵素のリン酸化に関する検討 1 1 ◯阿部　佑子 1 ，中島　美紀 1 ，藤原　亮一 1 ，横井　毅（金沢大院薬）【目的】UDP-グルクロン酸転移酵素 (UGT) は多くの薬物や内因性化合物のグルクロン酸抱合を触媒している。これまでにプロテインキナーゼ C (PKC) 阻害薬の処置により UGT 酵素活性が低下することが報告されているが、その詳細なメカニズムは明らかになっていない。本研究では PKC 阻害薬が UGT 蛋白質に及ぼす影響を明らかにすることを目的とした。【方法】ヒト UGT1A1, UGT1A4, UGT1A6, UGT1A7, UGT1A9 安定発現 HEK293 細胞およびヒト結腸癌由来 LS180 細胞に PKC 阻害薬（クルクミンとカルフォスチン C）を 1 時間処置後、total cell homogenate を調製し Western blotting を行った。酵素活性は 4-メチルウンベリフェロン (4-MU) を基質とし、生成した代謝物を HPLC により測定した。【結果・考察】PKC 阻害剤を処置した後、TBS (Tris-buffered saline) で回収した細胞から調製した total cell homogenate において酵素活性の低下が認められ、いずれの UGT1A 分子種も蛋白質発現量が減少していることを Western blotting により明らかにした。UGT1A mRNA 発現量には変化が認められず、転写後の影響であることが示唆された。UGT1A 蛋白質の減少は、プロテアソーム阻害薬 MG-132、リソソーム阻害薬クロロキン、プロテアーゼ阻害薬の処置によって抑制されなかった。しかし、細胞を SDS 含有バッファーで回収すると蛋白質の減少は認められず、PKC 阻害薬による UGT 蛋白質の減少は、細胞回収後に時間依存的に起こっていることを明らかにした。また、細胞を回収せずに評価した培養下での UGT 酵素活性は PKC 阻害薬によりほとんど変動しなかったことより、UGT のリン酸化が UGT 酵素活性を制御している可能性は低いと考えられた。