30Z-pm17 細胞分裂期における ATF-2 のリン酸化の誘導 中山 祐治 1 ,福本 泰典 1 , ◯長谷川 仁美 1 ,石橋 賢一 1 ,松井 優紀 1 , 1 1 千葉大院薬・分子細胞生物学,2 高雄醫學大學) 横山 和尚 2 ,山口 直人( 【目的】Activating transcription factor-2 (ATF-2) は PKC、JNK、p38、ERK などの様々 なキナーゼにより活性化される転写因子である。cAMP – response element binding protein ファミリーの一つで、二量体となり DNA に結合し転写活性を示すことで、 増殖、分化、アポトーシスに関与することが知られている。ATF-2 のリン酸化部位 は複数存在し、それぞれ違うシグナル経路でリン酸化される。細胞の間期におけ る転写因子としての機能は解明されていることが多いが、分裂期での機能は知ら れていない為、今回、分裂期における ATF-2 のリン酸化に着目して研究を行なっ た。 【方法・結果】免疫染色を行ない共焦点レーザー顕微鏡で観察したところ、ヒ ト子宮頸癌由来細胞である HeLa S3 細胞の分裂期において、ATF-2 のリン酸化が上 昇していることがわかった。また、チミジンで細胞を S 期に同調し、薬剤を抜い てから 11 時間後に回収したものを分裂期の細胞として、非同調の細胞とで電気泳 動度を比べると、分裂期の細胞でバンドシフトが起こった。さらに、顕微鏡下で ATF-2 のリン酸化レベルを詳しく調べてみると、分裂前期からリン酸化が上昇し分 裂後期で下がるという事がわかった。CDK1 阻害剤 RO-3306 を処理すると、分裂 期における ATF-2 のリン酸化が消失した。 【考察】分裂期でのリン酸化の上昇と、 RO-3306 処理によるリン酸化の消失という、 リン酸化の変化が起きている事から、 ATF-2 が CDK1 の下流に存在しリン酸化を受けている可能性があると考えている。 今後、ATF-2 のリン酸化部位を特定し、分裂期での役割を解明していきたい。
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