1365 B型慢性肝炎患者における血中HBs抗原量の推移大阪大学医学部附属病院臨床検査部出口松夫細坪秀夫山下 (平成7年9月1日順香浅利誠志受付) (平成7年9月20日受理) Key words: HBs antigen interferon, concentration, counting 要 B型慢性肝炎におけるHBs抗患者血清におけるHBs抗 chronic hepatitis B, immunoassay 旨原値の臨床的有用性について検討するために,5症原値をcounting immunoassay(CIA)に例のB型より定量測定した.CIAは慢性肝炎ラテックス凝集反応と粒子計数技術を組み合わせた新しい免疫測定法である. その結果, 1)活動性肝炎患者4症例におけるHBs抗原値の上昇はGPT値のそれよりも早く,HBVDNA-P活性とほぼ同様の推移を示した. 2)インターフェロン α あるいは β による治療を実施した4症 HBVDNA-p活 3)非例の患者におけるHBs抗原値は性と同様に低下した. 活動性肝炎患者1症例におけるHBs抗これらの結果より,HBs抗原値はHBV 原の定量測定はB型 DNA-p活性と同様の推移を示した . 慢性肝炎における増悪や予後の把握に有用であると思われた. 序生体がB型肝炎ウイルス(HBV)に種々のHBV関 HBV関 HBc抗連抗原としてはHBs抗抗原に対するHBs抗ある.ま感染すると連マーカーが血中で検出される. 原があり,HBV関た,こ HBV-DNA等いるのはHBs抗文原,HBe抗原, 連抗体としては上記3 体,HBe抗の他にもDNAポ体,HBc抗体がリメラーゼ, 様々なマーカーがあり,これらのマーカーは各々の病期,病態により異なった推移原,抗体の測定であり,主に感作赤血球凝集法(RPHA, munoassay(EIA)7), PHA)6), Enzyme 等の定性法により測定されている.HBs抗定はHBV感 im- Radioimmunoassay(RIA)8) 原の測染の有無を知る上で非常に重要であり,その血中濃度はHBV産生量にほぼ平行して増減すると言われている`).ところが,日常検査におけるHBs抗原の測定は大部分が定性法であるためにHBs抗原量の細かな推移は観察できず, を示すことから測定の意義は極めて大きい1)∼5). HBVのしかし,これら全てのマーカーをあらゆる施設での指標としてはそれほど大きな意義は持たない. 測定することは経済性,簡便性等を考慮すると困感染性,肝炎の活動性,治療効果の判定等しかし,近年,ラテックス凝集法等による定量法が開発され9)∼11),日常検査法として利用されてい難である. 現在,HBV関連マーカーの中で最も普及して別刷請求先:(〒565)吹今回,我々はB型田市山田丘2-15 出口慢性肝炎患者におけるHBs 抗原量の推移を観察することにより,定量測定の大阪大学医学部附属病院臨床検査部平成7年12月20日る. 松夫意義について検索し,興味ある知見を得たので報出口松夫他 1366 成告する. B型材料および方法 1.材料当院にてB型慢性肝炎と診断され経過観察が可能であった5例の患者を対象とした.材料はこれらの患者より採取された血清とした.な取・分離後の血清は-60℃ 2.試 B型原,HBs抗体の定量測定および他のHBVマカーの測定を実施し,そ active 薬慢性肝炎患者におけるHBVマーカーの推 1)HBs抗原,抗体測定法10) ランリームHBsAg(R),ラ (東亜医用電子(株))を用いた.本ポリクローナル抗体(抗原(抗原測定系)あ体測定系)を PAMIA-20をグラムに従った.本ギるいは精製定は免疫凝集用い,規定のプロ装置は従来より広く普及している比濁法あるいは比ろう法を原理とする測定装置とは異なり,反性活動性肝炎(CAH:Chronic 定開始時における肝機能検査ではGPT値156U/l,DNA-P活性55dprn, ,GPT値活性,HBs抗月遅れて上昇し,DNA-P 原量,HBe抗原値とは相反する動き性,HBs抗原量は346U/mlま性,HBs抗原量,HBe 原はHBe抗セロコンバージョンし,DNA-P活度DNA-P活原量,HBe 月後には最大値を示した. は約1カ抗原値はさらに低下し,HBe抗 HBs抗示した.測性,HBs抗抗原値は上昇し約1カ一方 HBs 原値126S/N,HBs抗体値20%INHをを示した.その後DNA-P活感作させたもので,ラテックス凝集反応を原理とする.測測定装置Sysmex 性,慢 hepatitis).測定開始直後よりDNA-P活試薬は粒子径の均一なポリスチレンラテックスに抗HBsヤー投与例(Fig.1) 体量0mU/ml,HBe抗ンリームHBsAb(R) についてHBs抗の推移を観察した. 抗原量2,177U/ml,HBe抗移を下記に示す測定法を用いて観察した. HBs抗および未治療1例 36歳,男にて凍結保存した. 療を施行した4例症例1:IFN-α お,採績慢性肝炎患者でIFN(interferon)治性は3dpm, で低下した.し原量,HBe抗体ヘかし,再原値は急上応液中の個々の凝集ラテックス Fig. をシースフロー中で検出解析するCIA(counting immunoassay)である.HBs抗原,抗体量の算出 1 after Change IFN-ƒ¿ in clinical data of case 1 before and treatment 方法は反応液中の未凝集ラテックス数(M:Monomer)と凝集ラテックス数(P:Polymer)を数し,P/T(T=P+M)を求め,あれた検量線よりHBs抗原,抗お,正常値はHBs抗 IMx 原,抗 HBeAgダらかじめ得ら体量を算出する.な原系では0.5U/ml未抗体系では10mU/ml未 2)HBe抗計満,HBs 満である. 体測定法12) イナパツク(R),IMx HBe イナパック(R)(ダイナボット(株))を用いた.本試薬はポリマー微粒子を固相とするEIAで測定はIMxアナライザーを用い,規ラムに従った.なお,正 2.1S/N未満,HBe抗 bition)未満である. 3)DNAポ Kaplanらあり, 定のプログ常値はHBe抗原系では体系では50%INH(%inhi- リメラーゼ活性測定法(DNA4P)13) の方法14)を改良したもので,測定結果の表示単位はdpm(disintegration とした.な Abダお,正常値は40dpm以 per minute) 下である. 感染症学雑誌第69巻第12号 B型慢性肝炎におけるHBs抗昇し始め,HBe抗体の消失さらにはGPT値 1カ月遅れてしだいに上昇した.そ値は約4カ月に渡り300U/l付も約の後のGPT IFN治療を開始した.そ HBs抗原量は投与直後より徐々に低下した.また,HBe抗原値も投与1カし,HBe抗一方性, 月後より急速に低下体へのセロコンバージョンを認めた. ,GPT値はセロコンバージョン前に一過性の上昇を認めたもののしだいに低下した.治療終了時における肝機能検査ではGPT値23U/l,DNAP活性4dpm,HBe抗 95%INHを示し,GPT値体値の正常化,DNA-P活原値の陰性化,HBe抗らにはHBs抗原量の大幅な減少を認め,肝性体の出現さ炎は鎮静化したものと思われる. 症例2:IFN-α 23歳,男抗原量は2,800U/mlま定開始時から約4カ月間性300dpm,HBs抗 2 after Change IFN-ƒ¿ in clinical 原値184∼190S/N treatment data of case 2 before 性は51dpm,HBs で低下した.一方,GPT値は投与後より約10週間にわたり150U/l前後の値を推移したが,その後急速に上昇しIFN投与終了時には810U/lをてはIFN投示した.また,HBe抗与期間中180S/N以まであった.治バージョンを認めたが,その上昇,次上を持続したまが認められe抗 INH付体へのセロコンの頃より再度s抗いでDNA-P活度DNA-P活原値にっい療終了後におけるGPT値,HBe 性,HBe抗性,HBs抗かし,そ原量,HBe抗目のHBe抗の後再原値は急速体へのセロコン在のHBe抗近を推移し,GPT値原量原値の上昇体は消失した.し量体値は90% も正常化したことよ抗原量が徐々に上昇しており,今 and 後どのような推移を示すのか興味が持たれる. 症例3:IFN-α2b投 Fig. よる治り,肝炎はほぼ鎮静化したものと思われるがHBs 原 13,400∼20,000U/ml,HBe抗体値の後IFNに療を開始したところ,DNA-P活バージョンを認めた .現における肝機能検査ではGPT値75∼134U/l, DNA-P活陰性を示した.そな低下を示し,2度投与例(Fig.2) 性,CAH.測体量0mU/ml,HBe抗抗原値は急速に低下し,HBe抗原値1.5S/N,HBe抗およびHBe抗 1367 と高値を示し,HBs抗 0%INHと近を推移したための結果,DNA-P活原量の推移 47歳,女与例(Fig.3) 性,CAH,肝硬変(LC:Liver cirrho- sis).測定開始時における肝機能検査ではGPT値 68U/l,DNA-P活 ml,HBe抗 ml,HBe抗りIFN治性35dpm,HBs抗原量133U/ 原値148S/N,HBs抗体値30%INHを体量11.7mU/ 示した.約1カ月後よ療を開始したところ,DNA-P活 dpm,HBs抗原量は9.1U/mlま体量は,33mU/mlま抗原値,HBe抗なかった.しで上昇したが,GPT値,HBe 体値はそれほど大きな変動を認めかし,治療終了後よりHBe抗緩やかな低下とHBe抗カ月後にはHBe抗原値の体値の上昇を認め,約2 原からHBe抗ンバージョンを認めた.現 50%INHと性は4 で低下し,HBs抗体へのセロコ在のHBe抗体値は低値陽性を示しているものの,HBe 抗原値,HBs抗原量は徐々に上昇しており,GPT 値も異常高値を示していることから,肝炎はまだ進行状態にあると推測される. 症例4:IFN-α2b投 42歳,男与例(Fig.4) 性,CAH.測検査ではGPT値74U/l,DNA-P活平成7年12月20日定開始時における肝機能性128dpm, 出口松夫他 1368 Fig. 3 after Change IFN - ƒ¿2b in clinical data of case 3 before and treatment HBs抗原量10,000U/ml,HBe抗 HBs抗体量2.8mU/ml,HBe抗示した.1カところ,投 HBs抗原値110S/N, 体値0%INHを月後よりIFNによる治療を開始した与直後よりGPT値,DNA-P活原量は大きく変動しながら徐々に低下し, 治療終了時におけるGPT値性は23dpmと mlま性, は24U/l,DNA-P活正常値を示し,HBs抗で低下した.し原量も308U/ かし,HBe抗原値は100S/N 付近を推移したまま大きな低下は認められなかった.治療終了後におけるGPT値,DNA-P活性, HBs抗原量は再度上昇し始め,DNA-P活 HBs抗原量は1カ月後,GPT値昇のピークを認めた.こ性, は2カ月後に上のことから2度治療を再開したところ,HBs抗目のIFN 原量はIFN投直後より急速に低下し,GPT値,DNA-P活一過性の上昇を認めた後急速に低下した .ま HBe抗原値もGPT値,DNA.P活低下し,HBe抗 Fig. 4 after Change IFN-ƒ¿2b in clinical treatment data of case 4 before and Fig. 5 Change た, 性と平行して体へのセロコンバージョンを認めた.治療終了時におけるGPT値原量207U/ml,HBe抗与性もは45U/l,HBs抗原値5.3S/N,HBe抗 in clinical data of case 体値 5 without treatment 感染症学雑誌第69巻第12号 B型慢性肝炎におけるHBs抗 94%INHを示した.そ抗原量,HBe抗 DNA-P活し,HBs抗の後,DNA-P活性,HBs わちGPT値原値はさらに低下し,現在では性3dpm,HBe抗原値1.4S/Nと原量は80U/m1,GPT値原量の推移陰性化は34U/lまで 1369 上昇の約1∼2カ月前より認められ,DNA-P活性と類似した動きを示した.このことからHBs抗原量の増加は肝細胞破壊により血中に遊出したものではなく,HBVの増殖状態を低下したことより,肝炎はほぼ鎮静化したものと反映しているものと推測される.次に,HBs抗推測される. 量の減少はDNA-P活症例5:自 31歳,女然経過例(Fig.5) 性,慢細胞の破壊によるHBV感定開始時における肝機能検査ではGPT値30U/l,HBs抗原量801U/m1,HBe 抗原値4.3S/N,HBs抗値95%INHを期に認められたことから,HBs抗性非活動性肝炎(CIH:Chronic inactivehepatitis).測体示した.その後,13カ月に渡り経過観察したところ,GPT値,HBe抗原値,HBe抗と考えられた.すとがHBs抗活性,HBs抗された. 一方 ,HBe抗 HBV-DNA,DNA-P活察性値は血中HBV量感染性,肝なわち,肝病変の進展した症例を炎の活動は減少しており,このこ原量の低下につながっていると推測原値は症例3お度目のIFN治反映することより,HBVのおけるHBs 原陽性症例に比して低濃度では肝細胞内のHBV量原量は共に測定開始後50週目をピー染細胞の減少に起因すを示しているのは,この患者が肝硬変であるため体値は殆ど変動せず安定した推移を示し,DNA.P クとした緩やかな推移を示した. 原の上昇原量の減少は肝るものと考えられた.また,症例3に抗原量が他のHBe抗体量21mU/m1,HBe抗考性と同様にGPT値よび4における1 2および4に療でもほとんど変化せず,症例1, おける2度目のIFN治療でも,その性,治療効果の判定の指標として用いられている. 低下時期はDNA-P活性やHBs抗原に比して1 ∼2カ月遅れであった .このようにHBe抗原値しかし,これらの測定法は操作が煩雑であることの推移がDNA-P活や試薬が高価であることより日常検査として実施て鈍かった原因は(1)測定法に起因する問題としするには不都合な点が多い.一方,血中HBs抗原のそれに比して,現行のHBe抗原測定法が定性法であったこ量もHBVの増殖状態を反映しやすいことから, とが上げられ,特に測定値が150S/Nを EIA,RIAによる定量測定が極少数の施設で行わ HBe抗れている.しかし,血中HBs抗原性やHBs抗原量は各々の患者によって大きく異なる(数U/ml∼ 数百万U/ml) 越える原高濃度領域での定量性はほとんどなく, 測定値は真の血中HBe抗 (2)血中でのHBe抗原量を反映しにくい. 原量の存在様式に起因する問うえに,現行法における定量可能な測定レンジが題として,HBe抗極めて狭いことから,濃度の算出には数回の検体が大きく関与していることがあげられる.すなわ希釈操作と再検査が必要となり,迅速性,簡便性, ち,HBe抗経済性に欠ける.最近,新複合体を形成することから検出されにくく,そのしく開発されたCIAを原の検出にはHBe抗原はHBe抗体の存在体の存在により抗原抗体原理とする免疫凝集測定装置PAMIAはHBs抗測定値は真の血中HBe抗原,抗体の定量測定が可能であり,その測定レンす.特ジは一般的に行われているEIAの10∼20倍バージョン期ではその傾向が強いと思われる .こを有原濃度よりも低値を示にセロコンバージョンやリバースセロコンする10).また,測定時間も約15分と短時間であり, れに対し,DNA-PやHBs抗従来の定量法に比し迅速簡便な測定が可能となっる抗体が産生されにくいことよりその測定値は真た.我々はPAMIAをの血中濃度を反映し易いためと思われる. 例におけるHBs抗用いB型慢性肝炎患者5症原の動態について観察し,定量測定の臨床的有用性について検討した. 5症例におけるHBs抗と,血中HBs抗平成7年12月20日原の推移をまとめる原量の増加は肝炎の増悪時すな原ではそれらに対す以上の結果をまとめると,HBs抗過時およびIFN治原量は自然経療時においてDNA-P活性とほぼ同様の推移を示したことから,HBs抗原量を経時的に観察することは肝炎増悪の予知,肝障害出口松夫他 1370 の指標,IFNに 8) 鈴木司郎: よる治療効果の判定等に利用可能と思われ,HBs抗原定量測定の臨床的意義は極め 9) 本研究の遂行に多大なる御指導と御校閲を頂きました当院第1内科林出口松夫, 井細坪秀夫, 潔: ます. 10) 献 1) 倉井清彦, 飯野四郎, 小池和彦, 遠藤康夫, 岡器・試薬, 11) ス (HBV) 18-24, 忠: B型肝炎ウイル構造と増殖のメカニズム. Mebio, 12) 12: 健: HBe抗原とHBe抗宮網野よる血中HBs 臨床検査機 1993. Immunoassay (LPIA) Latex による血中体測定基礎的検討と臨床応用. 臨床検査機 16: 593-599, 細坪秀夫, 出口松夫, IMxシ 1993. 大峰利成, 山下順香, 網野ステムを用いたマイクロパーティクルエンザイムイムノアッセイによる血中体. 医 HBe抗学のあゆみ, 151: 902-904, 1989. 5) 飯野四郎: ウイルス肝炎の臨床とそのマーカーの原, 抗体の迅速測定. 臨床検査機器・試薬, 16: 315-324, 13) 意義および型別診断. 臨床検査, 35: 9-14, 1991. 1993. 川口竜二,松林郁之介, 6) Vyas, G. N. & Shulman, N. R.: Hemagglutination assay for antigen and antibody associated with viral hepatitis. Science, 170: 332-333, 1970. 7) Engvall, E.: Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA), Quantitative assay of immunoglobulin G. Immunochem., 9: 871-874, 1971. 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B Surface Antigen in Serum from Patients with Chronic Hepatitis B Matsuo DEGUCHI, Hideo HOSOTSUBO, Naoko YAMASHITA & Seishi ASARI The Laboratory for Clinical Investigation, Osaka University Hospital To study the clinical significance hepatitis B, sera from five patients of hepatitis B surface with chronic hepatitis antigen (HBsAg) levels in chronic B HBsAg levels were measured quantitatively by counting immunoassay (CIA). CIA is an immunoassay that combines the latex agglutination method and particle counting technique. The results were as follow: 1) In four patients with chronic active hepatitis, the increases of HBsAg levels were earlier than that of alanine aminotranseferase levels, and HBsAg levels had approximately the same changes as hepatitis B virus associated DNA polymerase (HBV DNA-p) activities. 2) In four patients treated with interferon-at or i, HBsAg levels after treatment decreased in the same manner as HBV DNA-p activities. 3) In a patient with chronic inactivate hepatitis. HBsAg levels were the same changes as HBV DNA-p activities. These results suggested that quantitative analysis of HBsAg levels is useful to evaluate the prognosis and exacerbation for chronic hepatitis B. 感染症学雑誌第69巻第12号