Wakopak® ハチミツ中の残留抗菌性薬剤の HPLC 分析近年、食品中の残留薬剤、特に輸入食品への残存が社会的な問題となっており、ハチミツ、ローヤルゼリー、プロポリス等も輸入時に残留薬剤の検査が実施されています。今回は､ﾃﾄﾗｻｲｸﾘﾝ系抗菌剤 (ﾃﾄﾗｻｲｸﾘﾝ:TC、ｵｷｼﾃﾄﾗｻｲｸﾘﾝ:OTC、ｸﾛﾙﾃﾄﾗｻｲｸﾘﾝ:CTC)とｸﾛﾗﾑﾌｪﾆｺｰﾙ:CPを同時に前処理し、HPLCにて測定する方法をご紹介します。＜TC,OTC,CTC 及び CP を含むハチミツの分析例＞ハチミツ試料 10g を使用、固相抽出カラムは､Presep-RPP(200mg)､SPE-COOH(500mg)、分析カラムは Wakopak Navi C18-5、4.6×150mm を使用し､ハチミツ中濃度 0.05ppm の検出が可能となった。 Table.1 ハチミツへの標準添加回収率 mAU 2 <Std. 0.1μg/mL> 12 0 3 0 UV370nm 2 4 6 8 10 12 Time (min) 回収率(%) 平均回収率(n=4) 添加量 0.05μg/g 0.5μg/g Oxytetracycline 85.6 90.1 Tetracycline 90.7 90.0 Chlortetracycline 94.7 96.4 添加量 0.25μg/g 0.5μg/g Chloramphenicol 77.9 80.5 <ハチミツ <ハチミツ> mAU 2 Std.添加 0.05μg/g> 1 2 0 3 0 UV370nm コードNo. 001-00030 290-36951 567-20162 2 UV370nm 品名 Wakopak Navi C18-5 Presep-RPP BAKERBOND spe(ｶﾙﾎﾞﾝ酸) サイズ 4.6×150mm 200mg/6mL 500mg/3mL 4 6 8 10 12 Time (min) 容量 1本 10個×5 50個入希望納入価格 45,000円 32,500円 29,900円 03Ⅴ02-017 <Std. <HPLC conditions> 0.5μg/mL> : Wakopak Navi C18-5, 4.6x150mm Eluent : CH3 CN/10mM Oxalic acid=20/80(v/v) Flow rate : 1.0mL/min. at 35℃ 1 2 mAU 10 Column Detection : Tetracyclines 4 UV 370nm Chloramphenicol 3 UV 280nm 0 Injection vol.:100uL Sample : 10 Time (min) 1.Oxytetracycline 2.Tetracycline 3.Chlortetracycline 4.Chloramphenicol <ハチミツ Std.添加 CP:0.098μg/g 相当 0.25μg/g> 4 0 0 4 13.866 <ハチミツ> 13.896 mAU 10 UV280nm 20 mAU 10 0 0 2 4 UV280nm 6 8 10 12 14 16 18 Time (min) 0 UV280nm 2 4 6 8 10 12 14 16 18 Time (min) ＜固相抽出条件＞ Presep-RPP は ODS と同様に逆 Presep-RPP(200mg) 相的な保持挙動を示す親水性コンデｨショニング①CH3 OH 10mL ②H2O 5mL ③0.1M EDTA･2Na 10mL ハチミツ検体：*1) 洗浄：①H2 O 20mL ②CH3COOC 2H5 0.4mL 乾燥：5 分間空気を吸引溶出：CH3OH / CH 3COOC2 H5= 10/ 90(v/v) 8mL ポリマーを充填したカラムで、高極性不純物を選択的に分離除去する効果が高く、シリカ系 ODS カラムと比べ少量の溶出液 SPE-COOH(500mg) 回収液(A)+(B) カラム通過液→回収液(A) 洗浄：①CH 3OH/CH 3COOC2 H5=10/90(v/v)1mL 10mL にメスアップ →回収液(B)→回収液(A)と合わせる 1mL 採取洗浄：②CH 3OH 5mL Ｎ2 気流下乾固再溶解 CH3 CN/10mM ｼｭｳ酸乾燥：5 分間空気を吸引 =10/90(v/v) 1mL 溶出：CH3CN/10mM ｼｭｳ酸=10/90(v/v) 5mL HPLC 100μL：TC,OTC,CTC の分析 HPLC 100μL：CP の分析 *1)ハチミツ10g/20mL(0.2Mｸｴﾝ酸、ﾘﾝ酸ｶﾘｳﾑ緩衝液 (pH4.0)、 0.1M EDTA･2Na添加に溶解) 量で TC 類および CP を溶出可能であった。さらに SPE-COOH カラム処理は、TC、OTC、CTC を保持し、CP を素通りさせる効果があり、両者の分割と不純物の除去に有効に作用していた。参考文献：H.Oka, Y.Ikai, N. Kawamura, K.Uno, M.Yamada, J.Chromatography,400(1987)253 -261 03Ⅴ02-017