Technical News 株式会社住化分析センター ● バイオ医薬品の品質規格試験（ペプチドマッピング） TN360 Specifications Test for Biologics (Peptide Mapping) [概要] バイオ医薬品は、非常に複雑な構造を有する為、その品質規格試験では多角的な評価が求められます。それぞれの評価項目に対し、ICH ガイドラインが公表されており、国内においてもバイオ後続品に関する指針が出されたため、今後バイオ医薬品の創出が加速されることが予想されます。当社では、バイオ医薬品の様々な品質規格試験サービスを行っております。 [試験項目] 原薬と製剤の規格及び試験方法の項目項目装置・方法 1. 確認試験 1）ペプチドマッピング HPLC, LC/MS 2）糖鎖マッピング HPLC, LC/MS 3）構成アミノ酸アミノ酸分析装置 4）SDS-PAGE SDS-PAGE 用電気泳動 5）キャピラリー電気泳動キャピラリー電気泳動装置 2. 純度試験 1）類縁物質 HPLC, LC/MS, 電気泳動 2）高分子タンパク質 HPLC, LC/MS, 電気泳動 3. エンドトキシン試験エンドトキシン測定装置 4. 不溶性微粒子試験微粒子測定装置 5. 微生物限度試験無菌施設 6. 力価（生物活性試験）バイオアッセイ法, SPR 7. 定量 HPLC, ELISA, ECL [実施例] 上記規格試験項目のうち、ペプチドマッピングを示します。ペプチドマッピングは、米国薬局方、ヨーロッパ薬局方、日本薬局方間で国際調和がなされたテーマのひとつであり、バイオ医薬品を構成するアミノ酸一個の相違を識別することが出来る試験法です。原薬又は製剤 ↓←酵素消化ペプチド断片 ↓←LC-UV 標準品と試料品のチャートを比較＜実験例１＞エリスロポエチンを用いたペプチドマッピングのチャート（図 1）を示します。本試料の組換えエリスロポエチンは標準品と同一のチャートを示すことが確認されました。 1000 ＜実験例２＞ 800 違によるピークの保持時間のずれ（フラグメントⅠ及 600 びⅢ）が確認されている（図２）ことから、アミノ酸 mAU インスリンではヒトとウシにおけるアミノ酸の相 A Ⅰ Ⅲ Ⅱ 400 Ⅳ 200 配列の相同性を確認できます。種差でアミノ酸配列が異なるペプチド断片は、ⅠとⅢである。 0 600 0 上：標準品下：試料品 10 20 30 1000 50 60 mAU mAU 600 200 Ⅰ Ⅲ Ⅱ 400 Ⅳ 200 0 70 B 800 400 0 40 min 0 10 20 30 min 40 50 60 0 70 図１トリプシン酵素消化後の EPO（遺伝子組換え）のクロマトグラム 10 20 30 40 50 60 70 min 図２インスリンの種差比較（A：ヒト、B：ウシ）ペプチドマッピングは、たん白質を酵素的に処理してペプチド断片とし、その断片を再現性よく分離する確認試験であり、精度のよい分離再現性が要求されます。ペプチドマッピングの分析方法の妥当性検証にあたって、分析法バリデーションを実施しました。ペプチドマッピングの分析能パラメーターとしての特異性、併行精度及び室内再現精度は良好であり（表 1）、信頼性の高い分析法であることが検証できました。表 1 分析バリデーションの結果項目特異性併行精度室内再現精度結果標準物質及び試料の酵素消化物を分析した結果、ブランクでは認められない明確なピークについて、保持時間、ピーク数、ピーク強度などで同等の結果が確認された。相対標準偏差は 0.1～0.3％と良好であった（n=3）。相対標準偏差は 2.7～5.5％と良好であった（n=3）。分析条件の検討、分析バリデーションを実施致します。ご相談下さい。作成：バイオ (KN0911)3-N0-(23) 分析・測定・調査の総合分析会社株式会社住化分析センターこれ以外にも技術資料をご用意しています：http://www.scas.co.jp/analysis/ 当社ホームページはこちらから：http://www.scas.co.jp/