研究機関近況分子腫瘍学センター活動報告! 成人Ｔ細胞白血病（ATL）の細胞療法の開発分子腫瘍学センター研究スタッフはじめに福岡大学病院・講師木村暢宏を検討し特異的 Vβ/Vα レパートリーを認識で HTLV−１ウイルスがＴ細胞に感染し腫瘍化した ATL 細胞は、これまでの化学療法では予きた（図１）。一部で Vβ/Vα の一方で ATL ク０−６。ローンを認識できた。MRD の感度は１０−４∼１後不良であり治癒を望めない。近年アロ造血幹細胞移植による寛解例の報告が散見される。ミ２．造血幹細胞移植後の微少残存病変（mini- ニ移植療法は一種の細胞療法である。この移植 mum residual disease, MRD）前後の症例を材料に HTLV−１をターゲットと MRD 解析結果は臨床状態（再発・CyA 減した免疫機構を解析すれば細胞療法の道を開発量・急性 GVHD）と相関し、MRD 追跡の最良することとなる。の方法と思われた。ミニ移植後の完全寛解で。 ATL クローンは１０−４以下であった（図２、図３）研究概要１．Ｔ細胞抗原受容体（T-cell receptor, TCR）３．ミニ移植療法が免疫療法であること移植後１４日にも数％レベルで腫瘍クローンは遺伝子からの ATL クローン認識我々の開発した簡略 TCR 解析法にて、症例存在しその後消失。移植後皮膚再発例で免疫抑図１．ATL 症例の TCR V レパートリー ―１３― 図２．ATL ミニ移植後の MRD 図３．症例１４の ATL クローン分子生物学的寛解制剤 CyA 減量・中止による再発腫瘍の消失。１１−１９ペプタイドが CTL のターゲットとなるこの事は、明らかにミニ移植療法が免疫療法で事が知られている。この CTL の TCR 解析を行あることを示す。い、CTL がオリゴクローンでいることが判明４．HTLV−１の tax１１−１９ペプタイド特異的し、特異的プライマーを作成した。RT−PCR HLA−A２拘束性 CTL（cytotoxic T lympho- による検討では HTLA−A２患者の急性型、慢 cyte）の TCR 解析性型、くすぶり型の殆どに、診断時、化学療法した。高頻度出現の TCR クローンを sequence TLA−A２患者では、HTLV−１のなかで tax 後にも CTL が存在した。 ―１４― 図４．HLA−A２症例における移植後末梢血中の tax１１−１９ペプタイド特異的 CTL クローンの出現５．ミニ移植例と HLA−A２拘束性 CTL positive acute myelogenous leukemia. Br J Hae- 急性 GVHD 発症後完全寛解（CR）となった matol 111 (2): 570-579, 2000. １例を経験した。この時期 tax 特異的 CTL ク Kimura N, et al. Effect of chemotherapy and stem ローンが増加していた。GVL（Graft versus Leu- cell transplantation in familial hemophagocytic kemia）効果として、tax 特異的 CTL クローン lymphohistiocytosis analyzed by T-cell repertoire. が働いている可能性が示唆された（図４）。MRD Br J Haematol 113 (3): 822-831, 2001. と CTL の分子生物学的検討は、ミニ移植や細 Okamura J, Utsunomiya A, Tanosaki R, Uike N, 胞療法などの免疫療法・ワクチン療法の効果判 Sonoda S, Kannagi M, Tomonaga M, Harada M, 定に重要なモニターとなる。 Kimura N, et al. Allogeneic stem cell transplantation with reduced conditioning intensity as a おわりに novel immunotherapy and antiviral therapy for ATL クローンの TCR からの MRD 追跡法は有用で、臨床状態と相関した。また、MRD と CTL の分子生物学的検討は、ミニ移植や tax ペプタイドパルス樹状細胞を用いたワクチン療法の効果判定に重要なモニターとなる。今後予定される合成ペプタイドと樹状細胞療法を臨床のどの時期、どの症例に行うか。このミニ移植の結果分析により、よりよい効果的な免疫療法の開発が期待される。今後の治療戦略に大いに役立つものと思われる。参考文献 Nagano M, Kimura N, et al. Clonal expansion of α β-T lymphocytes with inverted J β bias in familial hemophagocytic lymphohistiocytosis. Blood 94 (7): 2374-2382, 1999. Maeda M, Otsuka T, Kimura N, et al. Induction of MTG8 specific cytotoxic T-cell lines: MTG8 is probably a tumour antigen that is recognized by cytotoxic T cells in AML 1-MTG8-fused gene- ―１５― adult T-cell leukemia/lymphoma. Blood (in press) 研究機関近況分子腫瘍学センター活動報告! 成人Ｔ細胞白血病・リンパ腫（ATLL）の表現型遺伝子解析：ケモカイン受容体発現に基づく末梢性 T 細胞リンパ腫の再分類分子腫瘍学センター研究スタッフはじめに医学部助教授大島孝一れ選択的に発現していることが判明している。新 WHO 分類１）が提唱され、末梢性Ｂ細胞性以上のことを踏まえ、Th１と Th２に関するリンパ腫は、発生母体、分化段階を考慮して整ケモカイン、その受容体、その他の活性化因子理分類されているが、末梢性 T/NK 細胞性リンをパラフィン包埋材料で染色することで、特にパ腫は、Peripheral T-cell lymphoma, unspecified Peripheral T-cell lymphoma, unspecified（PTCL- （PTCL-U）の病型が示すように、まだ途上の U）が再分類できないか検討を行った。段階である。今回、ケモカイン受容体発現を検免疫染色の抗体として、Th１細胞関連のケ索することで、T/NK リンパ腫を再分類できるモカイン受容体 CXCR３，CCR５、Th２細胞関可能性があるので紹介する。連マーカー（ST２（Ｌ））および活性化Ｔ細胞マー３４）を使用し、予後との関連カー（OX４０／CD１研究概要を調べた。更に、比較のため、ATLL、ALCL、１）頻度、予後 AILD およびリンパ芽球性リンパ腫（LBL）に当教室の悪性リンパ腫の頻度予後を示す。９３３ついても同様のことを確認した。発現の傾向と例を分類するとＢ細胞性が５０％、T/NK 細胞性して、AILD では、OX４０陽性、CXCR３陽性、ST が４２％、ホジキンリンパ腫が４％で、予後は、２（Ｌ）陰性の傾向にあり、ALCL では、OX４０陰ホジキンリンパ腫がよく、Ｂ細胞性リンパ腫が性、CCR５陽性、ST２（Ｌ）陽性の傾向にあり、LBL 中間に位置し、T/NK 細胞性リンパ腫は不良ででは、すべてに陰性で、ATLL および PTCL-U ある。では、はっきりした傾向はみられなかった。予後との関係としては、PTCL-U を Group! ２）Th１，Th２関連マーカーに基づく末梢性（CXCR３（＋） and/or Ｔ細胞リンパ腫の再分類の可能性ケモカインの受容体は、これまでに１８種が同 CCR５（＋） and/or ST２（Ｌ）（＋））と Group"（CXCR３（−） and CCR５（−） and 定されており、リンパ球の再循環や生理的ホー ST２（Ｌ）（−））に分類すると Group!の方がミング、免疫応答におけるケモカインシステム Group"より有意に予後がよかった（Ｐ＜の重要性が明らかになっている。またＴ細胞の０．０００１）。系統、成熟段階、機能的分化などにしたがって３）ケモカイン、ケモカイン受容体、サイトカ多くのサブセットに分類されるが、それぞれのイン DNA マイクロアレイによる末梢性Ｔ細胞サブセットにおいて特定のケモカイン受容体が性リンパ腫の分類我々は、約７０種類のケモカイン、ケモカイン選択的に発現していることが明らかとなっている。たとえば、Th１細胞は CCR５、CXCR３を、受容体、サイトカインの乗った DNA マイクロ Th２細胞は CCR３、CCR４、CCR８などをそれぞアレイを使用し、末梢性Ｔ細胞、特に PTCL-U ―１６― を予後に関して再分類できないか、検索をしておわりにきた。一部であるが、再分類でき可能性があり、今後は、DNA マイクロアレイを使用し臨床ここで紹介したい。数例ずつではあるが、AILD, 状態、治療効果を含めた悪性リンパ腫の分類が ALCL, ATLL, NK リンパ腫、PTCL-U をこれら提唱されるものと思われる。のマイクロアレイに載せたところ、AILD, ALCL, ATLL, NK リンパ腫は集団化する傾向にあり、参考文献 PTCL-U は、ATLL, ALCL, AILD の中に数例ず１）Ohshima K Suzumiya J, and Kikuchi M.The つ紛れ込むことこが分かった。そのことより、 World Health Organization classification of ma- PTCL-U は ATLL,ALCL,AILD に近いケモカイ lignant lymphoma: incidence and clinical progno- ン及びその受容体の発現をもつ可能性を考え、 sis in HTLV-1-endenmic area of Fukuoka. Pathol 遺伝子の絞込み、および免疫染色に的した抗体 Int 52:1-12 (2002) を検索したところ、ATLL は CCR４に、ALCL ２）Tsuchiya T, Ohshima K, Karube K, Yamaguchi は CCR３に、NK リンパ腫は MIG に、AILD は T, Suefuji H, Hamasaki M, Kawasaki C, Suzu- CXCR３もしくは BLC によく染色されることが miya J, Tomonaga M, Kikuchi M. Th 1, Th 2 and 分かった。また、PTCL-U１３４例を免疫染色した activated T-cell marker, and clinical prognosis in ところ、CCR４陽性群（ATLL 型）、CCR３陽性 peripheral T-cell lymphoma, unspecified. Com- 群（ALCL 型）、CXCR４／BLC 陽性群（AILD 型） parison with AILD, ALCL, lymphoblastic lym- の３群に分けら、それらの３群は、ATLL, ALCL, phoma and ATLL.. Blood 103, 236-241 (2004) AILD と相関する予後曲線をとることが分かっ３）Ohshima K, Karube K, Kawano R Tsuchiya T, てきた。（図１） Suefuji H, Yamaguchi T, Suzumiya J, Kikuchi M. Classification of distinct subtypes of peripheral Tcell lymphoma unspecified, identified by chemokine and chemokine receptor expression. Analysis of prognosis. Int J Oncol 25: 605-613 (2004) 図１、ケモカイン，受容体 DNA マイクロアレイによる末梢性Ｔ細胞（PTCL-U）の分類。非特異的末梢性 T 細胞性リンパ腫（PTCL-U）は、CCR ４陽性群（ATLL 型）、CCR３陽性群（ALCL 型）、 CXCR４／BLC 陽性群（AILD 型）の３群に分かれ、それらの３群は、ATLL, ALCL, AILD と相関する予後曲線をとる。 ―１７― 研究機関近況資源循環・環境制御システム研究所制御型低強度材料としての焼却灰の適用に関する研究資源循環・環境制御システム研究所工学部助教授１．はじめに添田政司検討した。一般廃棄物を焼却処理に伴い発生する焼却灰は、年々増加傾向にあり、焼却灰中には重金属２．実験概要が含まれているため、その処理・処分に規制が２．１使用材料かけられている。また、廃棄物の埋立処分に対結合材として普通ポルトランドセメント（密する環境保全の面から埋立地の建設や確保が非度：３．１６&／$、略号：Ｃ）、混和材として高常に困難な状況になっている。このため、埋立炉スラグ微粉末（密度：２．９１&／$、比表面積地の延命化対策と廃棄物の有効利用の観点から、３９５０#／&、略号：BS）、細骨材として海砂お埋立廃棄物の中で大きな割合を占めている焼却よび焼却灰Ａ、Ｂ（略号：Ｓ）を使用した。焼灰の再利用化を図る必要がある。却灰Ａ、Ｂはそれぞれ加工を全くしない未加工そこで本研究では、米国の ACI２２９委員会でのもの（以下：未加工Ａ、未加工Ｂ）と粉砕加「材齢２８日の圧縮強度が８．３N／"以下になる工したもの（以下：粉砕Ａ、粉砕Ｂ）の２種類ように制御されたセメント系スラリー材料」とを用いた。なお、粉砕加工は、風力式粉砕装置定義されている制御型低強度材料（CLSM）にを用いた。混和剤として高性能 AE 減水剤（ポ着目した。この材料の主な特徴は流動性およびリカルボン酸系、略号：SP）および起泡剤（略自己充てん性を有しており打設が容易で施工の号：FF）を使用した。また、細骨材の代替材省力化が可能である。また、自己硬化性を持ち、として、JIS!種フライアッシュ（細粉、略号：施工後の沈下が少ない等が挙げられる。この材 FA）および JIS 規格外のフライアッシュ（原粉、料の特性を生かし、焼却灰の有効利用を目的と略号 NFA）を使用した。して、制御型低強度材料として焼却灰を利用し、石炭灰を代替材として用いた場合のフレッシュ２．２性状および圧縮強度などの基礎的性状について表−１種類石炭灰基本（海砂）無混和海砂細粉（ＦＡ）未加工Ａ細粉（ＦＡ）焼未加工Ｂ細粉（ＦＡ）却灰粉砕Ａ細粉（ＦＡ）粉砕Ｂ細粉（ＦＡ）表−１に配合の一例を示す。水結合材比は全配合の一例 BS 置換率 W/B 空気量 FA 置換率（％）（％）（％）（％）０９０９０９０９０９０７０３０±２７０７０７０３０±２７０７０配合 − ５０５０５０５０５０ ―１８― 単位量（'／%） SP FF B W S FA （Ｂ×％）（Ｂ×％） C BS ２１２３０３０１０１６ − １．５０．７５１９７３０２５１５２７４９１１．２０．７５１９７３０２５１３６８４９１１．５０．７５１９７３０２５１３６２４９１１．５０．７５１９７３０２５１４４６４９１１．５０．７５１９７３０２５１４３２４９１１．２０．７５図−２図−１ BS 置換率の流動性（海砂）配合選定のフロー配合とも７０％とした。目標空気量は、流動性が増加し、材料分離や圧縮強度の増加を抑制させ図−３ FA 置換率検討の流動性（未加工Ａ）るため、目標空気量を起泡剤を使用して、３０± ２％に設定した。配合選定のフローを図−１にて行った。塩化物イオン量測定は、JCI−SC４示す。の「硬化コンクリート中に含まれる塩分の分析方法」の硝酸銀滴定法により行った。２．３練混ぜ方法練混ぜは方法は、練り鉢に普通セメント、高炉スラグ微粉末、フライアッシュを投入し、低３．実験結果および考察３．１速で空練り３０秒間行い、所定の水と混和剤を３０結合材の検討図−２に混和剤一定、細骨材に海砂を使用し秒間で投入し、高速で３分間練混ぜる。その後、た場合の BS 置換率の流動性を示す。高炉スラ細骨材を３０秒間で投入し所定の空気量が得られグ微粉末の置換率が増加すると、流動性も増加るまで高速で練混ぜを行った。する傾向にある。この要因として、高炉スラグ微粉末を用いると、セメントよりも密度が小さ２．４試験方法いため、粉体としての容積が増加すること、セスランプフロー試験は、JIS R５２０１で規定さメントよりも比表面積が大きいことが考えられれているフローコーンに試料を詰め、引き上げる。この結果から、最も流動性が得られた、置後打撃を与えない状態でモルタル試料の直径を換率９０％を本実験での結合材に設定した。測定した。また、同時に停止時間を測定した。空気量試験は、JIS A１１１６に準じて重量法により行った。圧縮強度試験は、JIS ３．２ A１１０８に準じ ―１９― 細骨材の検討図−３に未加工Ａを使用した場合の細骨材に対する FA 置換率検討の流動性を示す。フライ類にわらずいずれも SP 添加率が増加するとスアッシュを細骨材の代替材として使用すると、ランプフロー値は大きくなるが、スランプフフライアッシュの置換率が５０％までは流動性はロー値３００!以上になると材料分離が生じた。増加するが、置換率８０％では大きく流動性が低この材料分離は、焼却灰の種類に関わらず SP 下した。この要因として、結合材としての高炉添加率２％を超えると生じた。このことから、スラグ微粉末の置換率が９０％、細骨材の代替材本実験での目標スランプフロー値の上限値をとしてのフライアッシュの置換率が８０％と粉体３００!とし、下限値については流動性が得られ量が著しく多いため、流動性の低下を示したもる範囲が２５０!以上必要となるため、その平均のと思われる。この結果から、本実験での細骨的な値として２８０±２０!に設定した。材の代替材としてのフライアッシュ置換率は流動性が得られた５０％を設定値とした。図−５に各種焼却灰を用いた場合の流動性を示す。焼却灰の種類に関わらずいずれもスランプフロー値の増加に伴い、流動停止時間も増加３．３目標スランプフロー、流動停止時間のした。スランプフロー値が３００!以上では材料設定分離が確認されているため、流動停止時間はば図−４に各種焼却灰を用いた場合の SP 添加らつきがが見られる。そのため、本実験での目率とスランプフロー値の関係を示す。なお、黒標流動停止時間を２６∼５５秒の範囲に設定した。塗りは材料分離が生じたもの示す。焼却灰の種３．４最適制御型低強度材料の検討図−６に最適制御型低強度材料の圧縮強度を示す。焼却灰の種類に関わらずいずれも材齢の経過と共に強度は増加した。また、目標最大圧縮強度８．３N／"を満足する結果が得られた。海砂と比較すると、いずれの場合も圧縮強度は低下した。この要因として、焼却灰は高い吸水率を有しており、粒度分布が悪いことや粒子が不均一であることから強度が低下したと考えら図−４各種焼却灰を用いた場合の SP 添加率とスランプフロー値の関係図−５各種焼却灰を用いた場合の流動性図−６ ―２０― 最適 CLSM の圧縮強度表−２塩化物イオン量 Cl−量※ モルタル中の Cl−量（％）（"／!）規格値コンクリート示方書０．０４０．３０焼却灰Ａ０．３１ − 焼却灰焼却灰Ｂ０．０７ − 海砂 − ０．０９未加工Ａ − ０．６８ − ０．６６モルタル焼粉砕Ａ却未加工Ｂ − ０．１７灰粉砕Ｂ − ０．２０種類 ※NaCl 換算値れる。また、焼却灰ＡとＢを比較すると、若干水洗処理を施した焼却灰Ｂの強度増加が見られた。未加工と粉砕を比較すると、粉砕した焼却灰が粒度分布が良く、細粒分が多いため、モルタルが緻密化し強度が増加した。細粉と原粉を比較すると、両者に顕著な差は確認できなかった。表−２に塩化物イオン量の測定結果を示す。焼却灰Ａおよび水洗処理を施した焼却灰Ｂ共に、細骨材中の塩化物イオン許容量を満足できなかった。また、焼却灰Ａ、Ｂを混入したモルタルにおいては、水洗処理を施した焼却灰Ｂについては、塩化物イオン量の規定値を満足した。４．まとめ埋立地の延命化対策と廃棄物の有効利用の観点から、埋立廃棄物の中で大きな割合を占めている焼却灰は制御型低強度材料として有効利用が期待できる。 ―２１― 研究機関近況高機能物質研究所界面活性剤と水がつくる中間相高機能物質研究所理学部教授井上亨界面活性剤は両親媒性化合物であり、ひとつビック相は薬物運搬体としての利用が期待されの分子の中に親水性の部分と疎水性（親油性）ている。図１に示すような相図上の中間相領域の部分の両方を併せもっている。親水性の部分は第三の物質を添加することによっても影響をは水に対する親和性が強く、水分子と接触しよ受ける。言い換えれば、添加物は中間相の存在うとする傾向が強い。一方、疎水性の部分は炭領域をコントロールすることができ、これは中化水素のような油に対する親和性が強く、水分間相の実用的応用にとって好都合な点である。子との接触を嫌う。このような分子が水中にお本研究では両親媒性物質と水の混合系の中間相かれると、親水性部分と疎水性部分の相反する領域に及ぼす添加物効果を種々のタイプの添加要請の両方を満たすために疎水部は水から離れ、物を用いて系統的に調べ、一定の規則性を知るかつ、親水部は水に接するような形に分子が集とともにその効果のメカニズムを探ることを目る。こうして界面活性剤と水の混合系では界面的とした。活性剤分子が自発的に集ってある規則的な構造両親媒性物質としては非イオン性界面活性剤をもった分子集合体が形成される、すなわち、 C１２E７を用いた。添加物は親水性添加物と疎水界面活性剤分子の自己組織化が起こる。性添加物の２つのグループに大別され、前者とこの分子集合体の形、言い換えれば分子の集して無機塩類２、３）、糖類などのポリオール、おより方は界面活性剤分子の幾何学的な形のみならず混合系の組成（すなわち、界面活性剤の濃度）や温度に強く依存し、多様な形態の分子集合体が出現することになる。たとえば、代表的な非イオン性界面活性剤のヘプタエチレングリコールドデシルエーテル（C１２E７）と水の混合系では、図１の相図に示したようにラメラ相（Lα 相）、キュービック相（V１相）、ヘキサゴナル相（H１相）の３つの中間相が出現し１）、それぞれの相で界面活性剤分子は図２に示したような集合形態をとっている。なお、これらの相は固相と液相の中間的な性格をもつことから中間相と総称される。両親媒性物質と水の混合系に出現するこのような中間相の実用的な応用としては、たとえばヘキサゴナル相は多孔性無機材質を調製するための鋳型として利用されており、またキュー ―２２― 図１ C１２E７と水の混合系の相図層と介在する水溶液層からできているとみなし、液相は界面活性剤、水、添加物の３成分混合系とみなす。また、混合系はすべて正則溶液として取り扱う。以上の仮定に基づき、２つの相の自由エネルギーを組成の関数として表す。極大温度のところでは同じ組成の中間相と液相が平図２３つの中間相で形成される分子集合体の模式図衡に共存するので、これらの自由エネルギーはび尿素を、また後者として長鎖アルコールを使等しく、この関係より極大温度に対する表式が用し、これらの添加物が C１２E７／H２O 混合系の Lα 得られる。図３の曲線はこの表式に従って計算相領域および H１相領域に及ぼす影響についてしたもので、実測値をよく再現している。中間検討した。ここではポリオールと尿素について相領域に対する添加物効果は、添加物のタイプ得られた結果を紹介する。に依存して多様な現れ方をする。この振る舞い図１の相図からわかるように、Lα 相領域とは、上記の熱力学モデルによれば界面活性剤と H１相領域には azeotropic point に相当する極大温水、界面活性剤と添加物、および水と添加物の度が存在する。ポリオールや尿素の添加によっ３種の分子間相互作用と界面活性剤分子のパッて、これらの中間相領域には温度軸に沿った変キングパラメータに対する添加物効果の点から化が現れるが、極大温度に対応する組成はあま理解される。り変化しない。そこで、この極大温度に着目し、添加物濃度と各相の極大温度の関係を調べたと参考文献ころ、図３に示す結果が得られた。ポリオール１）T. Inoue, M. Matsuda, Y. Nibu, Y. Misono, M. の添加により Lα 相および H１相の極大温度は低下する、すなわち、ポリオールはこれらの中間 Suzuki, Langmuir, 17 (2001) 1833-1840. ２）L. Q. Zheng, H. Minamikawa, K. Harada, T. 相領域を低温側に縮小させる効果をもつ。一方、 Inoue, G. G. Chernik, Langmuir, 19 (2003) 10487 尿素はポリオールとは逆に H１相領域を高温側 -10494. に拡大する効果をもつが、Lα 相に対する効果３）T. Inoue, Y. Yokoyama, L. Q. Zheng, J. Colloid は小さい。 Interface Sci., 274 (2004) 349-353. 添加物の存在下における相転移温度のこのような振る舞いを次のようなモデルにより解釈した。すなわち、中間相は界面活性剤の分子集合図３中間相の極大温度に対する親水性添加物の影響 ―２３―