ワールド欄サン・代表取締役馬場園将人様御中研究報告書ラジウムラドン( ネルケア) における関節炎、リュウマチ、鎮痛、消炎効果に関した研究鈴鹿医療科学大学保健衛生学部鈴鹿医療科学大学大学院保健衛生学研究科漢医師健康科学博士・教授・具然和平成 20年 4月 25日ラジウムラドン(ネルケア)における関節炎、リュウマチ、鎮痛、消費効果に関した研究 1.研究概要慢性関節リュウマチは、多関節炎を主徴とした全身性炎症疾患である。関節炎病変局所では、血管新生、CD41T―cdlを主体としたリンパ球浸潤、滑膜細胞の異常増殖、骨破壊などが見られ、様々な作用により病体が形成されている。この作用にはサイトカインが関与していることが上げられており、リュウマチ(Rheumatism(RAb)病変には、 lL-6、 lL-12また抗炎症性およ炎症性および Thl型サイトカインであるTNF―α、lL-1、び丁h2型サイトカインなど様々なサイトカイン、ケモカインが見つかつており複雑な環境であることがわかる。ヘルバーT Ch)細胞はそのサイトカイン生産性により、lL-2、 lFN―γを産生し細胞 lL-5を産生し、液性免疫や IgE媒介性アレル性免疫に関与した Thl型細胞と IL-4、ギー反応に関与した Th2型細胞に分類される。多くの免疫疾患病態はこの Th1/Th2 型サイトカインのパランス異常が見られる。ことに自己免疫疾患であるインスリン依存型糖尿病、橋本甲状腺炎など臓器特異的自己免疫疾患においては Thl型へ、全身性エリマトーデスなどの全身性自己免疲疾患の一部では Th2型への偏りが見られる。 lL-6、 RAの複雑なサイトカインカスケードの中でも TNF―α、lL-1、 GM―CSFなどが JiJ7Jyc“ ガ a愚百tis:CIA) 病態形成には重要である。コラーゲン誘発性関節炎(aO//ager― は、これらサイトカインの投与により増強し、中和抗体により抑制される。さらに丁NF― αトランジェニックマウス °や IL-1の作用が過剰に発現した IL-1受容体アンタゴニスト欠損マウスでは RA様の関節炎が発症し、新しい関節炎モデルとなつていることも、これらサイトカインの過剰な機能が関節炎の発症に関与していることを示している。 CLAでは、lL-4や IL-10の投与でThl型細胞機能抑制を介した。治療効果があり、逆に抗 IL-10抗体や抗 TGF―β抗体の投与は、関節炎を増悪させることから内因性に産生される IL-10や TGF―βが疾患防御的に作用していると考えられる。このような、さまざまなアプローチにもかかわらず原因ならびにその根本的治療に関しては現在まで原因不明である。慢性関節リュウマチの治療には狭い意味での抗リュウマチ薬、非ステロイド性抗炎症剤、副腎皮質ステロイド剤、免疫調整剤などが用いられているが、それらの薬剤はさまざまな副作用を伴い、難治性の患者が少なくない。した。がつて、有効性が高く副作用のない抗リュウマチ治療機器の登場が期待されている。本研究では副作用のないラジウムラドン(ネルケア)による放射線ホルミシスにより関節炎、リュウマチ効果の解析を目的とした 2.研究試料および方法 1.Carageenan足浮腫試験 2。 Wister系ラット雄 4週齢 1群 6匹を用い、22±3℃ 、湿度 60-70%の状況下で、飼料 2群 (ラジウムラドン(ネル及び水は自由摂取とし1週間の予備飼育後、1群 (controD、ケア))を毎日暴露した. 投与開始 14日後に起炎物質 1.5%Caraga爾氏No.039-09691,Wako)生理食塩水 0。 l mlを左後肢足蹴皮下に注入し、接種 lhr後より浮腫測定装置(UGO BASILEビーエム機器製】こより測定した。その後 1時間ごとの足容積(m:)を4時間まで計測し、12、 24、36、48、60、72時間後までの足容積(mDおょび浮腫率① を求め、contrd群に対して 5%以下の危険率で有意になった場合を有効とした。浮腫率は、以下の式より求める。 Vo)/Vo>100 浮腫率(%)=((Vt― Vt:起炎物質接種後一定時間経過時の足容積(ml) Vo:起炎物質接種直後の足容積(ml) 2.2.働牲3/aマウスの血液による ToLIIgE,IgG,IgM,TN卜 α "IL-4の測定 1.実験方法ならびに実験群 2.2。働牲g/aマウス♂5週齢 1群 10匹を用い、22±3℃、湿度 60-70%の状況下で、飼 2群 (ラジウムラドン(ネ料及び水は自由摂取とし1週間の予備飼育後、1群 (oontro:)、 lgG、 IgM、TNF―α、lL-4の測定を行ルケア))を毎日暴露した。経過時間的に総 IgE、 KaJ‖aren 75mm/75μ :を用いてう。BALB/Cマウスの眼底採血は 100 Haematokrit― 行う。採集した。血液は遠心分離(Kubota 10min,1000rpm)にかけ血清分離後、測定に用いた。∞ntrO:群に対して 5%以下の危険率で有意になつた場合を有効とした。 2.2.2.TNF― α測定法 PIERCE ENDOGEN l吐 O Mouse TNF… α EuSA Kit EMTENFA(code RPN2718)を α microtitre phteに用いて測定を行う。キットを室温に平衡し(m)TNF― 、希釈した。 (m)TNF― α standardおよび Samdeを定めた wd!に 50μ:加え、その後 BiotinJated AnJbody Reagentを 50μ:加える。Cover phteにてカバーし、室温にて 2時間インキバイオテック株式会社)を用いて5回洗浄した。洗浄後、ュベート後、Auto mi面 washeく dn― HRP Sdutionをてカ作成した。Strepta宙各 wd!に 100μ!づつ加え、Oover Jateにバーし、室温にて 30分インキュベート後、5回洗浄した。TMB Substrate Sduぜ o nを 100μ:加え室温暗所にて30分インキュベートし、発色確認後 Stop Sdutionを 100μ! 加え MICRO PLATE READER MPR‥ A4(TOYOSODA)を用い ■にer450nmにて測定した。 2 . 2 . 3 . I L - 4定測法 Amersham Biosciences tL0 1L-4,Mouse,Biotrak EttSA System(00do RPN2712) を用いて測定を行う。キットを室温に平衡し(m):L-4 mbrotitre Jaれに Phte regentを 50μ:加え、希釈した。(m):L-4 standard、 Standard dhentおよび SamJeを定めた wdlに 50μ:づつ加える。その後 Cover dateにてカバーし、37℃±2℃で 2時間インキュベート後、Washe burerにて 5回洗浄し、Cottugateを100μl加え Oover date lこてカバーし、37℃±2℃で 1時間インキュベーとした。Washe buttrにて 5回洗浄し、 Pre― m:xed TMB substrate sdutionを 100μl加え室温暗所にて30分インキュベーションし Stop so:utionを 100μ !加え MICRO PLATE READERを用い偶Ler450nmにて測定した。 2.2。 4.総ば測定法 BЮ TRAK社の IgE,Mouse.Assay(code RPN2704)を用いて測定を行う。キットを室温に平衡し(m)IgE mbrotitre Jateに、希釈した。(m)lgE standardおよび SamJeを 100μ :加え、Cover dateにてカバーし、室温 (20… 25℃ )にて 30分インキュベート後 Wash bu■brにて3回洗浄した。。その後、作成した。antibody― HRP cottugateを各 we‖ に 100μlづつ加え、Oover p:ateにてカバーし、室温にて 30分インキュベート後、3回 100μ !加え室温にて 15分インキュベートし、洗浄した。.TMB Substrate SduJonを発色確認後 Stop Sdutionを 100μ :加え MICRO PLATE READERを用い偶ter450nm にて測定した。 2.2.5.Ir,IgM測定法ベッチル社の Mouse lgG EttSA Quanltation Kた(cataiog No.E90-131)、 Mouse lgM EttSA Quandta■ on Kた (cata!og No.E90-101)ならびに EttSA Starter Accessory g No.E101)を Package(cata:。用いて測定を行う。96wd:plateに ng So!utionを、Ooaぜ 100μ:加え、室温(20-25℃ 】こて60分インキュベート後、Wash buttrにて2回洗浄し、 Postcoat Sduぜ onを 200μ:加え 30分インキュベートし、2回洗浄した.希釈した。 (m)lgE standardおよび Sam口oを 100μ!加え、室温にて 60分インキュベート後、4回 Mouse lgG agM)―Fc―HRP So:uL:onを100μ:加え 60 洗浄した。希釈した。Goat anti― 分インキュベート後、4回洗浄した。作成した。TMB Sdutionを 1∞ μ:加え室温にて 10分インキュベートし、発色確認後 Stop Sdttonを READERを用い 1:ter450nmにて測定した。 100μl加え MICRO PLATE 2.3.ルミノールおよび SODによる抗酸化測定試験 2.3.1.実験動物および投与法胎た″系ラット雄 4週齢 1群 10匹を用い、22±3℃ 、湿度 60… 70%の状況下で、飼料及び水は自由摂取とし1週間の予備飼育後、1群 (oontroD、 2 群 (ラジウムラドン(ネルケア))を毎日暴露した。30日後に、ネンブタールにより麻酔した。ラットを心臓採血し、採血した。血液は FUJI HEPARIN TUBEに入れ、遠心分離(10000rpm 10mh】こかけ血清を分離した。 2.3.2.ルミノール測定法こて 100倍に希釈し、AAPH試薬を加えたものをサンプルと血清を 0.lM PBS(pH7】した。ルミネッセンスリーダー(BLR-201,ALOKA】こサンプルを挿入し 37℃に十分加温された時点でルミノール試薬を注入し、発光量を測定した。contrd群に対して 5%以下の危険率で有意になつた場合を有効とした。 2.3.3.SOD測定法 Wako SODテストキット(Code No.435-70601)を用い測定した。血清 10μ!を 96wdl プレート:こ入れ Bhnkには蒸留水を用い、発光試薬 100μ!を入れプレートミキサーにて 1分攪拌した。後、酵素液ならびにブランク液 100μlを加え、プレートミキサーにて 1分授拌後、37℃で 28分間加温した。加温後、反応停止液 20μlを加えプレートミキサーにて 5分攪拌した。後、MICRO PLATE READER(MPR― A4,TOYOSODA)、 Fiher 560nmにて吸光度を測定し、吸光度よりSOD活性値を求める。∞ntro!群に対して 5% 以下の危険率で有意になつた場合を有効とした。 3.研究結果 3.1.Camr翻 ″ 足浮腫試験 1.足容積(mD 3.1。各群とも、carage翻″ 接種 1時間後に第 1のビークがみられ 12時間後に第 2のピークが認められた。 ′群″ ジウムラル r7sルァァ、群メま、1群 (oontrd群】こ対し接種 24、36時間に有 0.05)、 6 0、72時間後にも有意な低下が認められた意な足体積低下が認められ (p〈 (p<0.01、 pく 0.05)。また、12、48時間後には統計学的優位差は認められなかったもの 5 の、contrd群に対し低値を示した。 (Hgure.1参照)。 3.1.2.浮腫率α) 2群 (ラジウスラドン存ルタ刀群メま、1群 (contrd群】こ対し接種 24、36、60および pく 72時間後に有意な低下が認められた(p<0.05、 0,01)。また、48時間後には統計学 gure.2 的優位差は認められなかつたものの、1群 (control群】こ対し低値を示した。 (日参照 ) 。 ‐‐ ‐1(oontr口 l〕ネルケア一 ● pく0■5‐ c『oup iCcontrO口〕 ●●pく0■ 1‐ =『 oup lCoontrol〕 1 ■ ↑ 口 ●■『 r●暮cenan inittctョ On 3 4 ■4 1■ 86 4■ 50 7■ ctOn 6r〕 Tttme■ ■er in]● Fig.1丁 his is the image of rat foodpat volum(ml).Signi・ ncant difFerences were detected between group l(contrOl)and the three treatrnent groups on 24 and 72 hours(**pく 0.01,*pく0.05). 6 ７。 ‐十日1〔 mntro:} ｍ ■キルケア ― ５。 ●ntr●￨〕４。３。 ” 一Ｒ︶﹁●﹄一● ＯＬ卜● ● 一中暉﹄ ” 崎曇 ● 上﹁ ‖●●■■SE n=5 ● pく 0』疇 "BrOup lC● ●● pく0■ 11膚 G『●up １。。 0 1 ■ 3 4 t Tine ane■ ●●rr●じ●enan lh卜 ●t10m ■4 1■ hhdb● 30 40 ●0 7■ o● Fig.2 Thb is the image ofrat dropsy raぜ o offood pat(%).Sign面 cant dittrences were detected between group l(oontrOI)and the three treatment groups on 24 hours (**p<0。01,*p<0。05). 3 . 2 . 働牲 J / C マウスの血液による T o L : 1 「 , l g G . I E M , T N F …α, I L - 4 の測定 3.2.1. TNF― α l群 (oontrol群】こ対し、′群(ラジ %ラル ″ ルマ )臓は統計学的優位差は見 gure.3参られなかつたものの、低値を示した。 (日照)。 3.2.2. lL-4 1群 (contro:群】こ対し、′ 瀞ジウスラル体ルタZ澪期こは、統計学的優位差は見られなかつたものの、高値を示した(日gure.4参照)。 3.2.3. IEE l群 (oontro:群】こ対し、′瀞ジウムラドン ″ ルケア)群λこは統計学的優位差は見られないものの低値を示した(日gure.5参照)。 3.2.4. IgM l群 (oontro:群】こ対し ′J議ケジウスラル存ルメリま、統計学的優位差は見 "ゝられなかつたものの、低値を示した (日gure.6参照)。 3.2.5. IgG l群 (oontrd群】こ対し、′瀞ジウスラル r/sルタzノ群)=ミま統計学的優位差は見られなかつたものの、高値を示した(日gure.7参照)。 ■1〔 contrOリ ■2ネルケア 40m 38側雪Ｅゝ腎Ｊ ●■Ｌ〓ト 86m 3410 32m 30m 2030 16Ⅲ 24即 22m 2●m G roups Fig.3.Blood:evels of TNF―α in ma!e mice.(pg/mD.丁here was signttcant di■ brence in b!ood!eve:s of TNF― cv between group l(oontrOl)and group 2(nerucare). 8 ■ 1〔contrOl〕 ■ 2〔ネ Jレケフリ 40_000 35_000 り〓ヽＪ守︲︻島曇一 30_000 25_000 201000 15_000 10_000 5_Om O_4000 O mups Fig.4.B:ood!eve:s ofIL-4in ma:e mice.(pg/mD.There was no difFerence sign:何 cant in blood leveis of Tota:IgE between group l(contrOI)and the three treatment groups. ■1〔 ∞ntml ■2(ネルケ71 ■ｏト曇Ｅヽビ︺Ш劇一 2 Gmu陣 Fig. 5 Blood leve:s of Total lgE in maie micen(ng/mD. 丁here was no signttcant difFerence in blood levels of ttotallgE between group l(contrO:)and the three treatment groups. 目1〔 contrO申 ■2〔ネルケ7D 曇Ｅヽこ〓Ｊ GmupG 降rence:n Fig.6 Blood!eve:s ofigM in ma!e mice.(ng/m!).There was no sign:ncant di憫 blood levels of TotallgE between group l(contrOI)and the three treatment groups. 10 ■1〔 cOntrtol〕 ■2〔ネルケ71 雪ＥヽｍＥ︺咀響 150■ lm■ G roups Fig.7 BloOd levels of lgG in ma!e mice.(ng/ml)。丁here was signiflcant difFerence in blood levels of lgCi between group l(control)and grOup 2(nerucare). 3.3.ルミノールおよび SODによる抗酸化測定試験 (%) 3.3.1.SOD Activitソ 1群 (contrd群)に対して ′わジウスラル存ルフアゝメリこ有意な増加が認めら (日gure.8参照)。れた(p<0.05)。 3.3.2.ルミネッセンスリーダールミノール試薬による測定において、1群 (contrd群)に対して ′わジウスラル存ルケzノメリこ有意な発光抑制が認められた(p<0.ol)。 (日gure.9参照)。 ■1〔 CIDntrOI ■2〔ネルケ71 45』 40■ ︹撃︺ゝ〓・事りく ● ０帥 35』 30■ ■5■ ■0』 15■ 10■ 5■ 0■ Gmups ant difFerences were F i g . 8 . B : o o d l e v e l s o f S O D a c t i v i t y i n m a l.eS irgantisf,l(cり erycareJ(*p〈 0 .05). detected between group l(contrOI)and group 2(″ 12 0500 口Ｅ”一口Ｅ●ギＥ日一︹ギＥコ●Ｕ〓︺ゝギ︼ ∽ ■ 1(contrtoll 0450 ネルケ71 ■2〔 0400 035● 8300 0■50 02● 0 0■5ロ 0■00 口■50 0■00 Groups Fig.9.B:ood leve!6 of Lurninescence count in ma!e rats.Signittcant difFerences were detected between group l(oontrO:)and the three treatment groups(**p<0.01). 13 第 4章考察 4.1.3薇鰺開η 足浮腫試験環境の変化や食生活の変化からアレルギーに関した関心が高まっている。アレルギーには様々なタイプが存在したが、その根本は免疫異常による炎症によるものが多い。また、慢性関節リュウマチは慢性の多関節炎であり、進行性に関節破壊が進展し関節変形をきたす自己免疫疾患であるが、原因ならびにその根本的治療に関してはさまざまなアプローチにもかかわらず現在まで原因不明である。慢性関節リュウマチの治療には狭い意味での抗リュウマチ薬、非ステロイド性抗炎症剤、副腎皮質ステロイド剤、免疫調整剤などが用いられているが、それらの薬剤はさまざまな副作用を伴い、難治性の患者が少なくない。したがって、有効性が高く副作用の少ない抗リュウマチ薬、抗炎症薬の登場が期待されている。本研究では、消炎効果の検討によく用いられる aarageer7ar7足浮腫試験においてラジウスラドン ″ ルケ刀の消炎効果の検討を行つた。ラジウスラル存ルタ刀は、hormeds効果があり、次のような消炎効果も考えられるつ。本研究の Carraga翻″ 足浮腫試験において、1群 (oontrd群】こ対し′〃″ ジウスラだン存ルケZ屠期こ有意な足体積低下が認められた。これは、先ほど紹介したラジウスラだン″ ルタ刀に温熱効果と免疫を介した抗炎症作用によるものであると考えられる。 4.2.働弘ルCマウスの血液による Totai lgE PIgG,lgM,TNF― α ,IL-4の測定種々の免疫、アレルギー反応は、アレルギー性炎症反応が主座として捉えられて '° いるの。これに関与した炎症性細胞には好酸球、好中球、肥満細胞、リンパ球、マクロファージさらに血小板など種々の細胞がある。これら炎症性細胞の働きには様々なサイトカインが関係している。 Mosmannとの伽 anらのグループは産生したサイトカインの分泌パターンによって下ヘルバー細胞を丁hl型と丁h2型の 2つに分類した。マウスの CD4+T細胞クローンを樹立し検索した結果、Thl細胞では lFN―γ と IL-2を産生分泌し、Th2細胞ではこれらの Th細胞から産生さ lL-4,IL-5,IL… 6,IL-10を産生分泌したことが示された 0'0。れるサイトカインのプロファイルからThl型細胞は細胞性免疫に、丁h2型細胞は B細胞を中心とした液性免疫に関与している。近年この免疫現象を Thlと Th2のパランス変化で理解しようとした流れがある°。また、これらThlと Th2のバランス、およびサイトカインに着日した抗サイトカイン療法が考えられている。RAでは、すでに lL-1、 TNF…α、lL-6を標的とした抗サイトカイン療法が臨床に導入され、その理論が実証さ lL-1濃度および可溶性 E―セレクチン、れているつ。抗 TNF―α 抗体治療は、血中 IL-6、 1)。また、治療中には滑膜病変部の血管の可溶性 ICAM-1レベルの低下をもたらす E―セレクチン、VCAM… 1、ICAM-1の発現低下も観察される 1ヽすなわち抗 TNF―α 抗 14 体療法は局所での炎症性サイトカインカスケードを制御し、さらに血管新生や血管内皮細胞に対した自血球の接着も制御して、病変局所への浸潤細胞を減少させる。さらに、cA2は細胞が分泌した TNF―α を中和しただけでなく、膜型 TNF―α 発現細胞これらの作用が相いまっに対しても細胞障害性に作用し、炎症細胞を減少させる 1)。て治療効果が増幅されていると考えられる。また、Sarめに=… chacar7″ らは、cat's dawが酸化ストレスに対して細胞を守り、そして NFカーパ B(NF― kappaB)の起動を否定したと報告しているの。本研究においてTNF―α は、1群 (∞ntrd群 )に比較し,′J敏管ジウスラル存ルタ刀 ″ ガこは統計学的優位差は見られなかつたものの、低下が認められた。ネルタア α 生成を抑制し、RAや自己免疫疾患による炎症を抑制できると考えられ ″s TNF― る。 IgE生産量は Th細胞(Thl、 Th2)からの IL-4や、IFN…γを中心としたサイトカインなどによりB細胞外部からの調節を受けると同時に、B細胞内部での機構によっても調節されている。。lL-4によるヒトの IgE生産誘導には、抗原および IL-4に加えて何らかのシグナルが必要である。T細胞とB細胞との接触、CD40リガンド、抗 CD40抗体 (CD40の架橋)、 Epstdn― Barrウイルスの感染、グルココルチコイドなどである。これらのシグナルが IL-4と協同して B細胞に IgEクラススイッチを誘導した。 Settbaβらは、胸腺内の CD4+CD8…細胞や抹消の CD4+CD45RC―細胞が調節性 T 細胞として働き、lL-4やTGF―βを分泌したことにより自己免疫性糖尿病を抑えること 30。このことから、lL-4や丁GF―β などの免疫抑制性サイトカインは自を報告している己反応性 T細胞の活性化を直接抑えることで自己免疫抑制作用を発揮している可能性がある。マウスにおいては IgE抗体生産能が IL-4遺伝子発現能により規定されている可能 11)。また、DAB/2マウスおよび SJLマウスに 150Rの X線照射を性が強いと結論した行い、その sdeen Cd!をOon Aで刺激して :L-4の遺伝子発現を検討した結果、150R の X線照射によりIL-4の遺伝子発現は増加し、lgE抗体生産能と IL-4遺伝子の発 lD。現能の相関を確認している本研究において lL-4は、1群 (∞ntrd群】こ比較し ′わジウスラル存ルケ刀励こは統計学的優位差は見られなかつたものの、増加傾向が認められた。IL-4を増加させ T細胞の活性化を直接抑え、自己免疫を抑制したと考えられ、RAにおいての消炎効果が期待できるものと思われる。しかし、′ わジウスラル存ルアアヽメリま IL-4の増加傾向が示されたが、lgE生産は逆に低下傾向を示している。この結果は、 lgE抗体生産能と IL-4遺伝子の発現能の相関に反した.しかし、lgE生産誘導には、抗原および IL-4に加えて何らかのシグナルが必要であることから、ラジウスラル (学ルア7)にはこのシグナルを抑制した働きがあるものと考えられる。 lgM、 IgG生産は B細胞が関与している。免疫の流れは以下のようになつている。好 15 中球、Mφ による非特異的な一次防御が行われ、B細胞が抗原を取り込み、dassII MHCを介して丁h2に抗原提示した。丁h2細胞が抗原提示を受け、IL-4、 13等のサイトカインを放出、とくに IL-4は未分化の丁hOを丁h2へ分化・増殖した。それによりB細胞がさらに増殖・分化し、形質細胞がその抗原に特異的な IgGを産生し、lgGがオプソニン化した。したと、好中球貪食能の飛躍的な増強が起こり、好中球やその死骸、殺菌物質による菌や組織の残骸が膿となる。lgMからIgGへのサブクラススイッチに関し 4がクて IL-4ノックアウトマウスでは血中の IgGl,IgE濃度が減少されることを示しIL… ラススイッチに重要なサイトカインであることを示している。また IFN― γは IgG2aアイソ lgGl、 lgG2bおよび IgE生産を抑制したこと、逆に IL-4 タイプの生産を誘導し、lgG3、 lgG2a、 lgG2b生産を抑制したことが知られている。は lgGlとIgE生産を誘導し、lgG3、これらの点から、Thl細胞の活性化は IFN― γを介した IgG2a生産を、丁h2細胞の活性化は IL-4を介した IgE産生を誘導したことになり、即時型アレルギー誘導には Th2 細胞の活性が、その抑制には丁hl細胞の活性化によって起こると考えられている。本研究において lgMは、1群 (∞ntrd群 )に比較し ′茄σ ジウスラル存ルタ刀 ″ ガこは統計学的優位差は見られなかつたものの、低下傾向が見られた。この結果は IL-4測定の結果より考えることができる。IL-4は、1群 (∞ntrd群】こ比較し′わジウスラ峰ィ学ルタZノメリこは統計学的優位差は見られなかつたものの、増加傾向が認められた。先ほど述べたように IL-4はlgGlとIgE生産を誘導し、lgMからIgGへのサブクラススイッチに関与した。このことから、4群 (OomЫnaJOn群)はIL-4産生により IgMから IgGに移行させ IgMの減少とIgGの優位な増加を示したと考えられる。以上の結果からラジウスラだン存ルケ刀は丁細胞を丁hl型に傾け細胞性免疫に対し効果を発揮し、丁細胞を Th2型に傾け液性免疫に対し効果を発揮したものと考えられる。 4.3.ルミノールおよび SODによる抗酸化測定試験の抗酸化測定をルミノール法および NttB還元法による SOD 本研究では Iv Vivoで活性度測定に行つた。抗酸化効果は生体内でのフリーラジカルの発生を抑えること、つまリラジカルスカベンジャー効果で確認できる。今回用いたルミノール法は血清中のラジカルスカベンジヤー能力が大きいほどその発光量が抑えられる。また NttB還 B(ニトロブルーテトラブリウム)を用い、02 発生反応の検出剤として N02 丁元法は、02… とSODによる不均化反応とを共役させ、02 による還元低下の程度を阻害率(SOD AcJ宙ty)として求めた。 )に対して ′わジウスラだン(学、1群 (control群本研究の結果、SOD AcJvity(%)はルケZ帰りこ有意な増加が認められた。 5.参考文献 16 1。 FelttmmLM.et al.:Rolo of cytokines in rhematoid mhritis.Amu Rev lmmШ Юl。 1996;14:397‐ 440。 2.FeldnIIⅡ L M . e t a l . : R h e l m a t o i d d h r i t i s . 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