Page 1 Page 2 【200】ムいしかわけんじ氏名石川健治学位 (専攻

KURENAI : Kyoto University Research Information Repository
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Competitive interaction of Seven in absentia homolog-1A and
Ca^{2+};/Calmodulin with the cytoplasmic tail of group 1
metabotropic glutamate receptors( Abstract_要旨 )
Ishikawa, Kenji
Kyoto University (京都大学)
1999-07-23
http://hdl.handle.net/2433/181242
Right
Type
Textversion
Thesis or Dissertation
none
Kyoto University
氏
名
いし
かわ
けん
じ
石
川
健
治
(
医
学)
学位(
専攻分野)
博
士
学位記番号
医
博
学位授与の日付
1年 7 月 2
3日
平成 1
学位授与の要件
学位規則第 4 条第 1項該当
研究科･専攻
医学研究科生理系専攻
学位論文題目
Compet
i
t
i
ve i
nt
er
act
i
on of Seven i
n abs
ent
i
a homol
og-1A and
第 2
1
5
4号
Ca2十/
cal
modul
i
nwi
t
ht
hecyt
opl
as
mi
ct
ai
lofgr
oup 1met
abot
r
opi
cgl
ut
amat
er
ecept
or
s
(グループ
1代謝型グルタミン酸受容体 C末細胞内領域への,Seveni
nabs
ent
i
a
homol
og-1A と CaZ+/
Cal
modul
i
nの競合的結合に関する研究)
論文調査委員
芽㌔ )
影山龍一郎
論
教授成宮
文
内
容
の
周
要
教授中西重患
旨
グルタミン酸は,噂乳類の中枢神経系の代表的な興奮性神経伝達物質の一つである｡グルタミン酸受容体はイオンチャネ
ル型と代謝型に分類され,代謝型 (
mGl
uR)は G蛋白質と共役する 7回膜貫通型受容体に属し, 8つの異なるサブタイプか
らなり, 3つのゲル-プに分けられる｡mGl
uRlと mGl
uR5は gr
ouplmGl
uRに属し,I
P3/Ca2+細胞内情報伝達系と共
役する｡gr
oup1mGl
uRは,記憶と学習の基礎と考えられている長期のシナプスの可塑性に重要な役割を果たすことが示
uRlあるいは
されてきた｡すなわち,標的遺伝子破壊,薬理学的解析,及びブロッキング抗体による実験により,mGl
mGl
uR5の機能欠落は,小脳での LTD (
l
ongt
e
r
m de
pr
e
s
s
i
on)あるいは海馬での LTP (
l
ongt
e
r
m pot
e
nt
i
at
i
on)を阻
uRl/mGl
uR5の I
P3/
Ca2+
害し,空間学習,運動学習を障害することが示されてきた｡しかし,これらの結果が,単に mGl
情報伝達系の欠落に起因するか否かは疑問のあるところである｡申請者らは mGl
uR1/
mGl
uR5の機能を解明する鍵が,隻
容体の制御と細胞内情報伝達系にかかわる蛋白質相互作用にあると考えて ye
a
s
tt
wo
-hybr
i
ds
c
r
e
e
ni
ngをおこない,
gr
oup1mGl
uRの C末細胞内領域が Si
a
h-1A (
s
e
ve
ni
nabs
e
nt
i
ahomol
og-1A)と特異的結合を示すことを明らかにし
た｡
Si
a
hは, ショウジョウバエの s
i
na(
s
e
ve
ni
nabs
e
nt
i
a
)に対応する噛乳輪のホモログとして同定された.s
i
naは,Ra
s
/
Raf
/MAPKによって誘導される phyl(
Phyl
l
oPod)と共に Ras
/Raf
/MAPK情報伝達系の下流に位置する0-万,t
t
k(
t
r
amt
r
a
c
k)とよばれる転写抑制因子は,視細胞分化を抑制することが知られているo s
i
na
,phylは,t
t
kと複合体を形成し,
ubi
qui
t
i
n/pr
ot
e
a
s
ome機構を介して t
t
kを分解する｡その結果,t
t
kによる分化抑制が解除され,視細胞分化へつながるo
また,Si
ahは,噂乳動物細胞においてネトリン受容体と複合体を形成し,ubi
qui
t
i
n/Pr
ot
e
a
s
ome機構により,本受容体の
i
naと Si
a
hは,ともに ubi
qui
t
i
n/pr
ot
e
a
s
ome機構を介した蛋白質分解機能をもっこと
蛋白質分解を促進するOすなわち,s
が知られている｡
申請者らは,ye
a
s
tt
wo
-hybri
da
s
s
ayと GST融合蛋白質を用いた変異実験をおこない,gr
oup1mGl
uRC末細胞内領
7ないし 2
8アミノ酸残基が,Si
a
h-1Aの C末端側 2/3と結合することを示した｡さらに,myct
agを
域の相同性の高い 2
付加した Si
ah-トA と,f
l
a
gt
agを付加した mGl
uRIC末細胞内領域を COS-7細胞に共発現させ,免疫沈降法により Si
ah-
1A と mGl
uRIC末細胞内領域が細胞内で結合していることを示した｡r
nGl
uRl
/mGl
uR5における Si
ah-1A との結合
部位は,Ca喜 +
/
C
al
modul
i
nとの結合部位と一致するが,Si
a
h-1A との結合は,C
al
modul
i
nによって,Ca2十に依存した競
合的な阻害をうけることも,i
nvi
t
r
oの実験により明らかにした｡
以上のような gr
oup1mGl
uR と Si
ah-1Aの特異的結合を示した結果は,gr
oup1mGl
uRの新しい調節機構を示唆し,
-4
9
9-
神経系における gr
ouplmGl
uRの多様な機能を理解するための新しい手がかりになるものと考えられるO
論文審査の結果の要旨
gr
oup1mGl
uR(
me
t
a
bot
r
opi
cgl
ut
ama
t
er
e
c
e
pt
or
)
)の C末細胞内
本研究は,グループ 1代謝型グルタミン酸受容体 (
a
h-1A (
Save
ni
nabs
e
nt
i
ahomol
og
-1A)の特異的結合を示したものである.
領域への Si
申請者は,ye
a
s
tt
wo-hybr
i
ds
c
r
e
e
ni
ngによって,S呈
a
h-1Aが gr
oup1r
nGl
uRの mGl
uRlと mGl
uR5の両者の C末
as
tt
wo
-hybr
i
das
s
a
yと GST融合蛋白質を用いた実験によって,
細胞内領域と特異的に結合する事を兄いだし, さらに ye
gr
ouplmGl
uR C末細胞内領域の相同性の高い約 3
0アミノ酸残基が, Si
a
h-1Aの C末端側 2/3め部分と結合すること
を示した｡又,gr
ouplmGl
uRにおける Si
a
h-1A との結合部位と,Ca2+/
C
a
l
modul
i
nとの結合部位がほぼ一致し,Si
a
h-
al
modul
i
nによって Ca2十依存性の競合的な阻害をうけることを,GST融合蛋白質を用いた実験により
1A との結合は, C
-Si
ah-1A と,f
l
agt
a
gを付加した mGl
uR1C末細胞内領域を共発現させた COS-7細胞抽出液
明らかにした｡また,myc
の免疫沈降によって,myc
-Si
ah-1A と mGl
uRIC末細胞内領域が細胞内でも結合していることを明らかにした.
以上の研究結果は,Si
ar
rlA と Ca2十
/C
al
modul
i
nによる gr
oup1mGl
uRの新しい調節機構を示し,神経系の研究に貢
献する所が大きいと考えられる｡
したがって,本論文は博士 (
医学)の学位論文として価値あるものと認める｡
1年 6月 2
2日実施の論文内容とそれに関連した試問を受け,合格と認められたもので
なお,本学位授与申請者は,平成 1
ある｡
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