免疫化学フナコシニュース 2014 年 8 月 1 日号（No.570） funakoshi news 100 細胞毒性二次抗体標的細胞に選択的な細胞死を誘導しますセカンドイムノトキシン生存率（％）免疫化学 75 EC50＝53.5 nM EC50＝1.34 nM 50 ■ コントロール用サポリン ▲ 抗 EGR レセプター抗体＋ Goat-ZAP （100 ng/10μl） 25 0 ［製品ページ番号：5113］ ※ターゲットトキシンについては，フナコシホームページ（製品ページ番号： 5046）をご覧下さい。 ※サポリン毒素を用いたターゲットトキシンについては，フナコシホームページ（製品ページ番号：894）をご覧下さい。 Memo ターゲットトキシン（イムノトキシン）とは Saponaria ofﬁcinalis の種子に含まれるタンパク質性毒素で，サポリンは，直接リボソームを不活性化し，極めて低濃度で細胞死を引き起こします。抗体またはリガンドとサポリンが結合したターゲットトキシン（イムノトキシン）は，標的細胞膜上の抗原またはレセプターを介して細胞内に取り込まれ，サポリンの作用によりリボソームを不活性化します。これによりタンパク質合成阻害が起こり，その結果，標的細胞のみに細胞死を誘導します。イムノトキシンは標的細胞のみに特異的な毒性を示すため，細胞の機能解析を行う上で，優れたツールとして使用できます。 −12 −11 −10 −9 −8 Log 濃度（M） −7 −6 Goat-ZAP（#IT-36）による細胞毒性効果 3T3 細胞を 96 ウェルプレートに播種（1,000 cells/90 μl/well）し，一晩インキュベートした。コントロール用サポリン（#PR-01）または抗 EGF レセプター抗体＋ Goat-ZAP を各ウェルにそれぞれ 10 μl ずつ添加し，72 時間インキュベートした後，MTS / PMS（テトラゾリウム塩／電子輸送試薬）で細胞毒性効果を検証した。 140 ■ コントロール ■ 10 nM mu p75-SAP （ターゲットトキシン） ■ 10 nM 抗 NGF レセプター（p75）抗体＋10 nM Rab-ZAP ■ 200 ng Rab-ZAP （コントロール） ■ 10 nM 抗 NGF レセプター（p75）抗体（コントロール） 120 生存率（％）二次抗体にサポリンを標識したセカンドイムノトキシンです。お手持ちの一次抗体と結合することでターゲットトキシンに変換し，標的細胞に選択的な細胞死を誘導できます。目的のターゲットトキシンが無い場合などに有用です。 100 80 60 40 20 0 31 Rab-ZAP（#IT-05）による細胞毒性効果サポリン標識抗 NGF レセプター（p75）抗体： mu p75-SAP（#AB-N01），または抗 NGF レセプター（p75）抗体（#AB-N01AP）＋ Rab-ZAP を用いて，細胞毒性効果を調べた。いずれも同程度の細胞毒性効果を発揮することが確認できた。［メーカー：ATS］一次抗体品名（商品コード）サポリン標識抗 IgG サポリン標識抗 IgG サポリン標識抗 IgG / 抗体（Fab フラグ抗体（Fab フラグ IgM / IgY 抗体メント Fc 領域）メント） chicken IgY Chick-ZAP (IT-62) goat IgG Goat-ZAP (IT-36) − − − − guinea pig gPIG-ZAP (IT-64) IgG − − human IgG Hum-ZAP (IT-22) Fab-ZAP human (IT-51) human IgM Hug-M-ZAP (IT-43) リボソーム細胞死 mouse IgG Mab-ZAP (IT-04) − エンドソーム内でターゲットトキシンが分解され，サポリンが遊離する。サポリンがリボソームを不活性化し，細胞死を引き起こす。特長 ● セカンドイムノトキシンは，各種二次抗体にサポリンを結合させた rabbit IgG Rab-ZAP (IT-05) rat IgG Rat-ZAP (IT-26) made with bivalent antibodies that recognize the whole IgG Bivalent Recognizes whole IgG − Fab-ZAP mouse (IT-48) mouse IgM Anti-M-ZAP (IT-30) エンドソームを形成することにより，ターゲットトキシンが細胞内に完全に取り込まれる。 FabFc-ZAP human (IT-65) − − − Fab-ZAP rabbit (IT-57) Fab-ZAP rat (IT-55) made with monovalent (Fab) antibodies that recognize the whole IgG, without bivalent capping Monovalent Recognizes whole IgG ：ターゲットトキシンが細胞内に取り込まれる。この時，レセプターを発現していない細胞は影響を受けない。 − − made with monovalent (Fab) antibodies that recognize Fc region only Monovalent Recognizes ONLY FC region 製品です。一次抗体に結合することで，一次抗体をターゲットトキシンへ変換させます。 ● ● 抗ニワトリ，ヤギ，モルモット，ヒト，マウス，ウサギ，ラット抗体の製品があります。お手持ちの一次抗体に適した製品をご選択下さい。包装 / 価格（￥）100 μg / 123,000 100 μg / 147,000 100 μg / 147,000 セカンドイムノトキシンは一次抗体と結合した後，細胞内へ取り込サポリン標識ストレプトアビジンおよびサポリン標識抗タグ抗体についまれます。その後，遊離したサポリンが細胞内リボソームを不活性てはフナコシホームページ（製品ページ番号：5113）をご覧下さい。化します。これにより特定の細胞のみに細胞死を引き起こすことができます。 ● 一次抗体にサポリンを直接標識する必要がないため，手軽に利用で本紙に掲載されている製品はすべて研究用です細胞表面レセプターに特異的なターゲットトキシンが結合する。お問い合わせ先試薬 - ６８４１ - ６２０ - ６８４１ - ７７５ＴＥＬ０３５ＦＡＸ０３５ターゲットトキシン（サポリン標識抗体）きます。 140801s_p31_k_i.indd 31 2014/07/17 16:47:37