さまざまな自己免疫疾患における自己抗体検出キットの開発大阪大学微生物病研究所免疫化学分野教授荒瀬尚 1 自己免疫疾患と自己抗体 • ほとんどの自己免疫疾患では、自己抗原に対する特定の自己抗体が産生される。 • 自己抗体は病態に密接に関与している。 • 自己抗体の抗体価の測定は、自己免疫疾患の診断に必須である。 2 従来技術とその問題点 • 自己免疫疾患における自己抗体の検出には、精製タンパク質やリコンビナントタンパク質が用いられてきたが、感度が十分でなかったり、特異性が低い場合がある。 • 自己抗体に対する真の標的抗原を用いれば、感度、特異性が改善されるはずである。 3 新技術の特徴・従来技術との比較 • 自己免疫疾患の自己抗体の標的分子が、 MHCクラスII分子と会合したミスフォールドタンパク質であることを発見。 – Proc. Natl. Acad. Sci. USA in press • MHCクラスII分子と会合したミスフォールドタンパク質に対する自己抗体を調べると、従来の測定方法と比べて、感度や特異性が非常に高い。 4 ミスフォールド蛋白質／MHCクラスII分子複合体が自己抗体の標的分子である自己抗体 Y 炎症・感染自己応答性 B細胞自己抗体 IFN-γ α Proc. Natl. Acad. Sci. USA in press β MHCクラスII α β MHCクラスII ミスフォールド蛋白質 ERAD タンパク分解 5 ミスフォールド蛋白質／MHCクラスII分子複合体に対する自己抗体の検出方法自己抗原 + MHCクラスII + GFP 遺伝子導入 293T細胞患者血清 + 蛍光標識抗ヒトIg抗体フローサイトメトリーによる自己抗体の結合解析 6 関節リウマチ • 関節に対する自己免疫疾患 • 日本人の約１％が罹患 • 患者の約８割でリウマチ因子や抗CCP抗体が陽性になる。 • リウマチ因子は変性したIgGに対する自己抗体であるが、生理的に変性したIgGがどのように作られるかが不明である。 • RF陽性の健常人は、RF陰性の健常人と比べて、関節リウマチになる可能性が26倍高い (Nielsen et al. BMJ 2012)。 7 関節リウマチ患者の自己抗体は IgG／MHCクラスII複合体を認識する without MHCクラスII with MHCクラスII IgM RF sIgG sIgG H HLA-DR IgM RF mIgG H+L + Ig αβ mIgG MHCクラスII IgG 自己抗体 • IgGが重鎖が軽鎖を伴わずHLA-DRに提示される。 • リウマチ因子はHLA-DRに提示されたIgGは認識するが膜型IgGは認識しない。 Igαβ X IgG／MHCクラスII複合体は関節リウマチの自己抗体の特異的標的抗原である全身性エリテマトーデス抗リン脂質抗体症候群健常人リウマチ因子 (抗IgG Fc抗体) 関節リウマチ抗IgG/MHCクラスII分子複合体抗体価 • • • 従来用いられてきたリウマチ因子は関節リウマチに特異的でない。抗CCP抗体価もRAの診断に用いられているが、病状はリウマチ因子の方が良い指標である。抗IgG/MHCクラスII分子複合体は関節リウマチの診断に有用である。 9 特定のMHCクラスIIのアリル（型)は多くの自己免疫疾患の感受性に最も強く関与している HLA-Class II 関節リウマチ 10 卵白リゾチーム/HLA-DR 複合体 IgG/HLA-DR複合体に対する自己抗体の結合性 IgG／MHCクラスII複合体に対する自己抗体が関節リウマチの感受性に関与している関節リウマチ感受性関節リウマチ感受性 • IgG/HLA-DR複合体が関節リウマチの原因分子である可能性が考えられる想定される用途 • 今まで検出困難だった自己抗体の検査キットの開発 • 今までより特異性の高い自己抗体の検査キットの開発 • 本検出方法を用いた新たな自己免疫疾患治療薬のスクリーニング 12 実用化に向けた課題 • 現在、自己抗原とMHCクラスII分子との複合体は、自己抗原とMHCクラスIIを発現させた細胞でしか合成できないため、現状では自己抗体の検出には、細胞を用いる必要がある。 • 実用化に向けて、自己抗原／MHCクラスII分子複合体をプレートやビーズに固相化したのものを用いて自己抗体を検出するシステムの作製が必要である。 13 企業への期待 • 臨床検査薬の開発技術を持つ企業との共同研究が望ましい。 • 自己免疫疾患の標的分子であるミスフォールド蛋白質／MHCクラスII複合体を標的にした新たな治療薬の開発に興味のある企業には、本技術の導入が有効と思われる。 14 本技術に関する知的財産権 • 発明の名称：自己抗体の検出方法、自己免疫疾患の罹患の可能性を試験する方法、自己抗体の検出試薬および自己免疫疾患用の試験試薬 • 出願番号 • 出願人 • 発明者：ＰＣＴ／ＪＰ２０１４／０５０７９６：大阪大学：荒瀬尚、荒瀬規子、谷村憲司、金暉 15 お問い合わせ先大阪大学免疫学フロンティア研究センター免疫化学研究室教授荒瀬尚ＴＥＬ：06-6879-8291 ＦＡＸ：06-6879-8290 e-mail：[email protected] 大阪大学産学連携本部知的財産部産学連携教授小此木研二ＴＥＬ：06-6879-4859 ＦＡＸ：06-6879-4205 e-mail：[email protected] 16