歯科材料・器械VoL26No．2 13！ P−29 化学発光法による活性酸素（スーパーオキシドアニオンラジカル）の測定に関する研究 O平雅之、荒木吉馬岩医大・歯・理工用いた。多形核白血球として8週齢雄性C3H／HeNマウスの腹腔にチオグリコレート溶液を注射し、12時間後、月翻空中に滲出した細胞を用いた。マウス多形核白血球も培養には10％牛胎児血清配合RPMIl640培地を用いた。フォルボールエステル誘導剤として200nMのPhorbol 12−myristate13−acetate（P甑）（只1585−10MG、Sigma Studies on active oxygen （super−oxide anlon radica！）bycねemicaHuminescence．社）を用いた。この試薬は活性酸素の産生を促進し、さらに単球のマクロファージヘの分化を誘導する。［結果及び考察］活性酸素は加齢や発癌に関係するため医学分野で多くの研究が行われている。活性酸素は歯科生体材料に起因する炎症反応にも深く関係しているが、関連研究（1）キサンチンオキシダーゼーヒポキサンチン系では活性酸素の産生が著しく早く、測定を混和後10秒間で終了する必要が認められた。活性酸素は発生後、極めて短時問で消失したためと考えられる。上述の配合比で活性酸素除去酵素（SOD）を添加すると、化学発光強度は10％にまで低下した。生体内でも酵素反応により活性酸素の分解が可能であることが示唆された。が極めて少ない。本研究では、（1）活性酸素（スーパー（2）図21こ、P酸A（一）THP∼1細月包とPMA（＋）THP−1細月包 M． TAIRA， Y ARAK工工wate Med． Univ．［緒言］オキシドアニオン：0のに特異的に反応する発光試薬を用いてキサンチンオキシダーゼーヒポキサンチン系で発生した活性酸素量を化学発光法により測定し、併せて、（2）生体防御で重要な役割を担う単球細胞と多形核白血球（主として好中球）にフォルボールエステル［材料および方法］（1）活性酸素（02）の測定にはチューブタイプの化学発光測定装置（ルミネッセンサーPSN、アトー社）（図（各1m1培地中に5xlO6個）を37℃に保温したL5m！エッペンチューブ中で培養した際の活注酸素産生による化学発光強度を経時的に示した。1測定（60秒）ごとに5万個（培地10鮭1）のTHP−1細胞を使用した。フォルボールエステル（P融）誘導の有無にかかわらず THP織細胞の活性酸素の産生量は40分程度でピークを示すことが判明した。P融誘導は有意に丁鯉一1細胞の活性酸素産生量を増加させることが確認された。 51臼4 由 1）と専用の発光試薬（MPEC、アトー社）を用いた。鷹 4冊1 PMA（＋）岩3冊」一、、ノ、ノ田、ノ X 田、 2101 ！田 × 田ロノ x 撚〔一田！ × 1田1 田 × × × X o O lO 20 3e 哨0 5§ 6巳図1化学発光測定装置 T l船〔min）図2 THH細胞からの活性酸素の産生チューブには疎水性ポリソーブタイプ（イムノチューブ475477、酬C社）を用いた。300蝉のMPEC試薬を 10μ1、キサンチンオキシダーゼ0．1U（100μg／m！）を60μ！、O．72灘ハイポキサンチン溶液を50μ1、そして凹2PO4Bufferを180μ1混和し、生成した活性酸素と発光試薬との反応による化学発光強度を測定した。計測時間を10秒から60秒まで変化させて活性酸素の発生のタイムコースに検討を加えた。別に、0．l U（100 μg／m1）の活陸酸素除去酵素（SOD）を10件1添加し、紐12PO4Bufferを170トし1に減らして化学発光強度を測定した。（2）単球細胞には10％牛胎児血清配合RPMI1640培地で培養したヒト単球様細胞丁｝P−1（理研細胞銀行）をマウス多形核白血球の活性酸素産生量は単球細胞の 10∼20倍以上であるこ．とが確認された。好中球が殺菌のため細胞膜にあるN佃PHオキシダーゼによって多量の活性酸素の産生を行うのに対して、単球は細胞内食食活動で少量の活性酸素を産生するためと考えられた。（3）その他：ZymosanA（Sigma社）をマウスの血清と反応させてオプソニン化ザイモザンを調製し、マウス多形核白血球に作用させたが、活性酸素の産生量に顕著な増加が観察されなかった。今後、タイムコース等の測定条件に検討を加える必要があると考えられた。（4）今後、金属イオンやモノマーが生体防御系細胞の活陛酸素産生に及ぽす影響を検討する予定である。