* 研究テーマ内分泌攪乱物質による生殖系への影響が様々な角度から研究されています。さらに、甲状腺系、免疫系、神経系への影響も危惧されていますが、未だ報告は多くありません。そこで、この数年間は化学物質等による甲状腺ホルモン系への影響を調べるために下記の3テーマについて研究を行っています。１．（抗）甲状腺ホルモン様作用を評価するバイオアッセイ系の確立２．各種化学物質による（抗）甲状腺ホルモン様作用の検討３．甲状腺ホルモン受容体を介したシグナル伝達機構の解析 * 甲状腺ホルモン受容体を介した転写調節機構甲状腺ホルモンはエストロゲンやアンドロゲンのようなホルモンと同じように、甲状腺ホルモン特異的な受容体（ＴＲ）に結合し、甲状腺ホルモン応答因子（ＴＲＥ）を介して転写因子として作用することにより、ホルモン作用を発揮します。 Cytoplasm Corepressors RXR TR TRE General TFs No TF TATA 甲状腺ホルモン Coactivators Nucleus RXR TR General TFs TRE TATA mRNA Transcription protein 化学物質甲状腺ホルモン系へ影響を及ぼす化学物質の作用点としては様々な部位が考えられます。 * 甲状腺ホルモン受容体高発現細胞株作成はじめに、（抗）甲状腺ホルモン様作用を検出するために、甲状腺ホルモンのシグナルを伝達可能で、取り扱いが容易な甲状腺ホルモン受容体高発現細胞株（ＨｅＬａＴＲ）を作成しました。 HeLa CMV-P HsTRa1 cDNA HeLaTR Reporter TRE SV40-P Luciferase cDNA TRE DR4: AGGTCANNNNAGGTCA DR0: AGGTCAAGGTCA T3 TR TRE Luciferase Luciferase activity (fold induction) 5 DR4 4 3 2 DR0 1 T3 - + - + この細胞に甲状腺ホルモン（Ｔ３）を添加すると、甲状腺ホルモン応答因子（ＤＲ４）を介した転写活性化を検出することができました(上図参照）。さらにＤＮＡマイクロアレー法を用いて、甲状腺ホルモンを添加することにより発現が制御されている遺伝子を明らかにしました。 * 内分泌攪乱物質の影響ビスフェノールＡ（ＢＰＡ）、フタル酸（ＤＥＨＰ）、ダイオキシン（ＴＣＤＤ）、水酸化ＰＣＢ（ＰＣＢ－ＯＨ）を単独あるいは甲状腺ホルモンと同時に添加し、レポーター活性を測定した結果、甲状腺ホルモンによる作用をさらに増強する化学物質、減弱する化学物質を見出しました。 HeLaTR with DR4-SV40-Luc T3 +/- endocrine disrupting chemicals Luciferase activity また、甲状腺ホルモン添加によるレポーター活性を上昇させた内分泌攪乱物質は、ＤＮＡマイクロアレーの結果、甲状腺ホルモンにより発現調節されている遺伝子の発現に対して正に作用し、レポーター活性を減少させた内分泌攪乱物質は遺伝子の発現に対して負に作用しました。 * （抗）甲状腺ホルモン様作用を評するバイオアッセイ系の確立このように、ＨｅＬａＴＲ細胞を用いて、（抗）甲状腺ホルモン様作用を評価することが可能であることを明らかにしました。現在、Ｄｒｓ．堺＆鹿島を中心に、種々の化学物質のスクリーニングを行っています。 * 甲状腺ホルモン受容体を介したシグナル伝達機構の解析 DNAマイクロアレーの結果から、甲状腺ホルモンにより発現上昇が顕著な４－１ＢＢに着目し検討した結果、４－１ＢＢの発現に伴いカスパーゼ活性が上昇し、アポトーシスに導くことを明らかにしました。 Coactivators T3 RXR TR TRE General TFs mRNA Transcription TATA 甲状腺ホルモン添加により発現が増加する因子甲状腺ホルモン添加により発現が変化しない因子 4-1BB TRAF1 Caspase Activity Apoptosis TRAF2 * 発表論文ここで紹介させていただいた内容は下記の論文に掲載されております。 Yamada-Okabe, T., Satoh, Y. and Yamada-Okabe, H. (2003) Thyroid hormone induces the expression of 4-1BB and activation of caspases in a thyroid hormone receptor dependent manner. Eur. J. Biochem. 270: 3064-3073. Yamada-Okabe, T., Aono, T., Sakai, H., Kashima, Y. and Yamada-Okabe, H. (2004) 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin augments the modulation of gene expression mediated by the thyroid hormone receptor. Toxicol. Appl. Pharmacol. 194:201-210. * 検討課題現在は、特に１．スクリーニングの結果、（抗）甲状腺ホルモン様作用が疑われる化学物質についての更なる検討と２．甲状腺ホルモンにより発現調節されている遺伝子の機能と甲状腺ホルモンの生物作用の関連を培養細胞を用いて検討しています。 Home What's New Introduction Research Staff Contact Publications Link