Wako アニマルフリータイプヒトiPS細胞を高い細胞生存率で凍結保存可能動物由来成分不含緩慢凍結保存法により凍結保存可能フィーダーフリー培養した細胞に使用可能面倒な試薬の調製が不要 Oct3/4 DAPI Nanog DAPI BC2LCN DAPI プログラムフリーザー不要 StemSure®hPSC凍結保存溶液, AFは、アニマルフリータイプのヒトiPS細胞用凍結保存溶液です。本品は、DMSO を含んでいます。アニマルフリー StemSure® hPSC凍結保存溶液, AF ヒトiPS細胞凍結保存プロトコール 1. ヒトiPS細胞を培養中のディッシュより培養液を除去し、D-PBS(-)で洗浄後、Accutaseなどで細胞を剥がす 2. 10μmol/l Y-27632を含むヒトiPS細胞用培地（hPSC培地（+ROCKi））を加え、ピペッティングでシングルセルに分散する凍結 3. 分散した細胞懸濁液をチューブに移し、遠心（1,000rpm、3分、室温）後、上清を除去する 4. hPSC培地（+ROCKi）を加え、ピペッティングで懸濁する 5. 細胞数をカウントし、チューブを遠心（1,000rpm、3分、室温）後、上清を除去する 6. 2×106 cells/mlとなるように本品で懸濁し、500μl/バイアルで分注する 7. -80℃で凍結し、-150℃、あるいは-80℃で保存する（長期保存時は－150℃保存を推奨します。） 1. 凍結していたバイアルにhPSC培地（+ROCKi）を加え、凍結細胞を融解する融解（温浴を用いて凍結細胞を融解する場合、完全に融解させず氷が残っている状態に留めること） 2. 遠心（1,000rpm、3分、室温）後、上清を除去し、hPSC培地（+ROCKi）を加え、懸濁する 3. 細胞数をカウントし、2×105 cells/6cm dishで播種するヒトiPS細胞201B7株の凍結保存細胞生存率・細胞増殖率の確認培養中のヒトiPS細胞201B7株をシングルセルに分散した後、StemSure® hPSC凍結保存溶液, AFに懸濁し、－80℃で2～4日間凍結保存した。凍結融解後の細胞生存率と細胞増殖率を確認した。また、凍結融解を5回繰り返した後、細胞・コロニー形態と各種未分化マーカー（Oct3/4、Nanog、BC2LCN）の発現を確認した。細胞・コロニー形態の確認細胞生存率未分化マーカー発現の確認 Oct3/4 DAPI Nanog DAPI BC2LCN DAPI 細胞増殖率  StemSure® hPSC凍結保存溶液, AFを用いて凍結保存したヒトiPS細胞は高い細胞生存率と細胞増殖率を示した。また各種未分化マーカーの発現を確認した。製品価格コードNo. 197-17831 品名 StemSure® hPSC凍結保存溶液, AF 規格容量希望納入価格（円）細胞培養用 100ml 16,000 試験項目：外観、実用試験（ヒトiPS細胞201B7株）、無菌試験、エンドトキシン、マイコプラズマ試験 Freezing Medium 関連製品（凍結保存溶液シリーズ）低コスト StemSure® 凍結保存溶液マウスES細胞・ヒトiPS細胞の凍結保存に使用できる無血清の細胞凍結保存溶液です。プログラムフリーザーを用いず、緩慢凍結法で細胞を凍結保存できます。本品は、 DMSO および BSAを含んでいます。マウスES細胞凍結保存プロトコール凍結 1. 2. 3. 4. 融解細胞をチューブに収集する遠心し、上清を除去するチューブに本品を添加し、懸濁する懸濁液を保存用チューブに分注する保存用チューブを-80℃で一晩凍結させる -150℃、あるいは-80℃で保存する 1. 2. 3. 4. 5. 6. 凍結保存しておいたチューブを37℃の温浴槽で融解させる培養に使用する培養用培地に懸濁する遠心し、上清を除去後、培養用培地で懸濁する培養容器に播種する ※ヒトiPS細胞の凍結保存プロトコールはStemSure® hPSC凍結保存溶液, AFと同様です。ただし、解凍時に温浴は使用できません。マウスES細胞D3株の凍結保存細胞生存率・コロニー形成率の確認コロニー形成率 61 40 42 30 20 10 20 15 10 5 23 21 Cell Viability (%) 60 50 70 25 Colony Efficiency (%) Cell Viability (%) 70 0 0 60 A社同等品コロニー形成率細胞生存率 25 66 50 40 30 20 10 0 24 Colony Efficiency (%) 細胞生存率 StemSure®凍結保存溶液－80℃保存（24ヶ月間保存）－150℃保存（30ヶ月間保存） 20 21 22 15 ＜凍結保存＞ ① 1～2×106cells を本品1ml に懸濁し、保存用チューブに分注。 ② －80℃で1日間凍結保存後、－150℃で30ヶ月間あるいは－80℃で24ヶ月間凍結保存。＜融解＞ ③ 37℃の温浴槽で融解後、培養用培地で懸濁、遠心後、上清を除去。 ④ 培養用培地で懸濁後、培養容器に播種し、培養。＜細胞播種数＞ 500cells/well （コラーゲンコート6穴プレート）＜培養期間＞ 10日間 10 5 0 コロニー形態・未分化マーカーの確認本品を用いてマウスES細胞D3株の凍結融解を4回繰り返した後、細胞形態、ALP染色、各種未分化マーカーの発現を確認した。  StemSure®凍結保存溶液を用いて凍結したマウスES細胞は長期間高い細胞生存率を示した。また各種未分化マーカーの発現を確認した。製品価格コードNo. 195-16031 品名 StemSure® 凍結保存溶液規格容量希望納入価格（円) 細胞培養用 100ml 12,000 試験項目：外観、実用試験（マウスES細胞D3株）、無菌試験、エンドトキシン、マイコプラズマ試験 Wako 関連製品（凍結保存溶液シリーズ）汎用 CultureSure® 凍結保存溶液汎用動物細胞の凍結保存に適した無血清の細胞凍結保存溶液です。緩慢凍結法を用いて高い生存率で細胞を凍結保存できます。本品は、DMSO および BSAを含みます。汎用動物細胞凍結保存プロトコール凍結融解 1. 2. 3. 4. 5. 細胞をチューブに収集する遠心し、上清を除去するチューブに本品を添加し、懸濁後、保存用チューブに分注する保存用チューブを-80℃で一晩凍結させる -150℃、あるいは-80℃で保存する 1. 2. 3. 4. 凍結保存しておいたチューブを37℃の温浴槽で融解させる培養に使用する培養用培地で懸濁する遠心し、上清を除去後、培養用培地で懸濁する培養容器に播種する汎用動物細胞の凍結保存細胞生存率の確認－80℃保存（24ヶ月間保存）－150℃保存（30ヶ月間保存）製品価格コードNo. 品名 039-23511 CultureSure® 凍結保存溶液規格容量希望納入価格（円) 細胞培養用 100ml 8,000 試験項目：外観、無菌試験、エンドトキシン、マイコプラズマ試験･･･2～10℃保存特定･･･-20℃保存･･･-80℃保存表示がない場合は室温保存です。･･･特定毒物･･･毒物･･･劇物･･･毒薬･･･劇薬･･･危険物･･･向精神薬･･･特定麻薬向精神薬原料･･･化審法第一種特定化学物質･･･化審法第二種特定化学物質･･･化学兵器禁止法第一種指定物質･･･化学兵器禁止法第二種指定物質･･･カルタヘナ法・・・覚せい剤取締法・・・国民保護法・・・ダイオキシン類収載されている試薬は、試験・研究の目的のみに使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税などは含まれておりません。掲載内容は、2015年3月時点での情報です。上記以外の法律および最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。 15Y03開01J