次世代シーケンサを活用した HIV ゲノム薬剤耐性関連遺伝子マイナーアリルの検出 Detection of minor genotypes in the genes associated with drug-resistance in HIV genomes by next-generation sequencer. 島袋末美 1、渡嘉敷良乃 1、宮城郁乃 1、石原美紀 1、名護珠美 1、建山正男 2、比嘉真紀 3 、仲宗根勇 1、要匡 1,3 1 琉球大学医学部附属病院検査部、2 琉球大学附属病院第一内科、3 琉球大学医学研究科先進ゲノム検査医学講座 HIV 感染において、予め血中ウイルスの薬剤耐性の有無を知ることは効果的な治療を行う上で重要である。現在は、血漿中のウイルスゲノムを nested RT-PCR 法により増幅、コピー数のモニタリングを行うとともに、キャピラリーシーケンサにて遺伝子塩基配列を決定し、その配列変異から薬剤耐性の有無を推定する方法が主流である。現行の配列解析法は、全ウイルス中の耐性株の割合が高い場合には有効である。しかしながら、キャピラリーシーケンサ解析は、30%以下の一部のみ混在している配列を検出することが困難なため、治療中に出現する薬剤耐性株の検出や、治療中の患者より感染したウイルス中のマイナーアリルの検出において、見逃す可能性や、正確な判定を行えない可能性も少なくないと考えられる。そこで、我々は、塩基配列のデジタル解析を行える次世代シーケンサを活用し、ウイルスゲノム中のマイナー集団の検出の可能性について検討した。現行の方法にて確認済みの HIV ウイルスの protease 遺伝子、reverse transcriptase 遺伝子部分 12 検体について、 RT-PCR 後の産物を次世代シーケンサ（GS Junior/Roche）にて冗長度 1,000x 以上の高深度シーケンスを行い、変異配列の有無とその割合を検討した。結果、キャピラリーシーケンサ解析では、判定不能であった数％のマイナー変異も十分検出できた。次世代シーケンサを活用した、HIV ゲノムマイナーアリルの検出は、ウイルス変異を非常に高感度で検出することが可能であり、コスト面を除けば、治療のモニタリングや潜在的薬剤耐性株の検出、診断に有効であると考えられた。