プロテインエンジニアリング室コラーゲンゲル細胞培養キット Tri・D 細胞培養に最適なコラーゲンゲルを調製するための試薬キットです。サンプルをご提供致します。ご希望の方は各代理店までお申し込みください。ゲル上培養 1. 作製したいゲル濃度の1.5倍の濃度に、コラーゲン試薬をコラーゲン希釈用水で希釈する。（＊1.2.3） 1. コラーゲン溶液 2. 1の1/2量の3倍濃縮培地を加える。（＊2.3） 1、2の操作は氷冷下で行う。氷冷 3倍濃縮培地 2. 3. 分注細胞の懸濁液/培養液 2：1 3. 培養器に入れ、37℃のＣＯ2インキュベーターで 1時間静置し、ゲルを作製する。（＊4） 37℃ 3. 4. コラーゲンゲルゲル化培養 4. 細胞培養用培地に懸濁させた細胞を慎重に加え、培養を行う。（＊5）ゲル包埋培養 1. ゲル上培養と同じ手順で、培養器にゲルを作製する。（＊6） 2. 必要量の細胞を遠心分離により回収する。 3. 氷冷コラーゲン溶液 3. コラーゲン試薬をコラーゲン希釈用水で、作製したいゲル濃度の1.5倍の濃度に希釈する。 3倍濃縮培地 6. 4. 37℃ コラーゲンゲル分注 3. 2：1 4. 3に1/2量の3倍濃縮培地を加える。（＊2.3） 3、4の操作は氷冷下で行う。 3. ゲル化培養液 ⑥ ⑦ 7. 培養 2. 5. 5. 2で得た細胞塊に氷冷下で4を加え、すばやく懸濁させる。細胞（＊7） 6. 1のゲル上に5を加え、37℃のＣO2インキュベーターで1時間静置して、重層したゲルを作製する。 7. ゲルの2倍量以上の細胞培養用培地を上から静かに加え、培養を行う。（＊5）＊1 推奨するコラーゲンの最終濃度は0.5∼ 1ｍｇ/ｍL。（濃度が高いほどゲルの強度が上がるが、線維を形成する時間が短く作業しにくくなる。）＊2 泡を除くのが難しいので、なるべく泡立てないよう混合する。＊3 コラーゲン溶液は粘度が高くチップ内に残るため、十分にピペッティングを行う。コラーゲンウシ真皮由来タイプⅠ（ペプシン処理）ブタ真皮由来タイプⅠ（ペプシン処理）＊4 2ｍｍ程度の深さになるように液量を調整する。（24well plateなら350μＬ程度）＊5 衝撃により壁面との間に隙間が出来ると、後にゲルが収縮する場合があるために、慎重に操作する。＊6 細胞が培養器の底面に接しないように、深さは1ｍｍ程度で良い。＊7 作製したゲルと培養液の界面に気泡が入らないように注意する。テラピア真皮由来タイプⅠ（ペプシン処理）ウシ真皮由来タイプⅠ（酸処理）培地製品コード標準価格（税別） D-MEM 891503 ￥9,600 RPM1640 891504 ￥9,600 その他 891505 ￥9,600 D-MEM 891511 ￥9,600 RPM1640 891512 ￥9,600 その他 891513 ￥9,600 D-MEM 891519 ￥9,600 RPM1640 891520 ￥9,600 その他 891521 ￥12,000 D-MEM 891500 ￥12,000 RPM1640 891501 ￥12,000 その他 891502 ￥12,000