2 実験消耗品製品番号 Fisher Scientific™ LC-MS グレードメタノール M/4062/17 Fisher Scientific LC-MS グレード水 W/0112/17 Fisher Scientific LC-MS グレード酢酸アンモニウム A/3440/50 リキッドハンドリング eVol Dispensing System Thermo Scientific vials and closures Mass Spec Certified Vials Kit 66002-020 MSCERT4000-34W サンプル前処理。大腸菌抽出液と、イースト菌抽出液に移動相 A を添加（濃度 1 µg/mL）分離条件製品番号装置 Thermo Scientific Accela™ 1000 HPLC カラム Accucore RP-MS 2.1 x 100 mm, 2.6 µm 移動相 A （30:70, v/v） 25 mM 酢酸アンモニウム水溶液 / メタノール移動相 B メタノールグラジェント時間 / 分 %A %B 0 70 30 2 70 30 7 30 70 26 0 100 31 0 100 32 70 30 45 70 30 流速 0.15 mL/min カラム温度 25°C 注入量 4 µL 洗浄溶媒 2-プロパノール MS 測定条件装置 Thermo Scientific LCQ™ Deca XP MS Polarity Negative Scan ranges 500 – 850 m/z データ処理ソフトウェア Thermo Scientific Xcalibur™ 2.0 17626-102130 結果大腸菌中のリン脂質 90 生体試料中にはさまざまなリン脂質が含まれています。大腸菌 80 中の脂質は大きく分けて2つのタイプのリン脂質があります。（PE）とphosphatidylglycerol （PG） phosphatidylethanolamine 70 Relative Abundance です。 Figure 2のクロマトグラムは、Accucore RP-MS HPLCカラムを使用して大腸菌抽出物を測定した場合のもので、分類を大きくしても、異なる長さのアルキル鎖や二重結合した脂質が多数あることが確認できます。このクロマトグラムでは非常にピークがシャープで、カラムの効率の高いことを示しています。フラグメン 60 50 40 30 テーションを明確に解析できることから、大抵の場合、脂質の同定 20 には MSが適しています。これらの実験で、 intact massesと溶出順序および文献2から脂質を同定しました。ピークが未分離であ 10 れば、チャージの分布やイオン化効率に影響を与えるので、理想的 0 0 な検出と正確な定量には分離が欠かせません。 10 15 20 25 30 Figure 2 : Accucore RP-MSを使用した大腸菌由来のリン脂は、 PGと PEに相当するクロマトグラムです。明らかに、PGは PE 質のクロマトグラムこの分析方法は、ペプチドがグラジェント初期に溶出するようにデザインしていますよりも速く溶出します。これら2種類の脂質が、クロマトグラムの主成分です。 100 5 Time (min) リン脂質の末端構造は、分析で注意するべき要素です。 Figure 3 PG lipids 90 R 80 O O O R 70 Relative Abundance 3 100 O P 60 O O O O 50 PE lipids 40 R OH OH O O 30 O R O 20 P - + NH3 O O O 10 O 0 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 Time (min) Figure 3 : 大腸菌由来リン脂質の重ね書きクロマトグラム phosphatidylglycerol（PG、青） phosphatidylethanolamine（PE、赤） 28 30 32