2 実験消耗品製品番号 Fisher Scientific™ LC-MS グレード水 W/0112/17 Fisher Scientific LC/MS グレードメタノール M/4062/17 Fisher Scientific LC-MS グレードアセトニトリル A/0626/17 Fisher Scientific Analytical グレードギ酸 F/1900/PB08 Fisher Scientific 酢酸ナトリウム S/2120/50 Thermo Scientific National™ Mass Spec Certified 2 mL clear vial with blue bonded PTFE silicone cap MSCERT4000-34W サンプル前処理用器具 Thermo Scientific 96 well plate バキュームマニホールド 60103-351 Thermo Scientific Ultra vap CLS-229070 試料溶液調製手順標準試料原液および内部標準試料原液（paclitaxel、パクリタキセル）をアセトニトリルで溶解。血漿 200 µL に標準試料溶液 10 µL と内部標準試料溶液 10 µL を添加。ブランクにはアセトニトリルを 10 µL 添加。すべての試料溶液に標準試料溶液を添加した後に 30 秒間ボルテックスし、5000 rpm で 5 分間遠心。サンプル前処理手順製品番号化合物 Docetaxel、paclitaxel（IS）マトリックスヒト血漿固相 Thermo Scientific SOLA 10 mg/2 mL 60309-001 コンディショニング 0.5 mL メタノール、0.5 mL 水サンプルロード試料溶液を固相に添加洗浄水 / アセトニトリル（70：30, v/v）を 250 µL 添加溶出 1% アンモニア水含有アセトニトリル 250 µL を 2 回添加再溶解窒素雰囲気下で濃縮乾固。0.5% 20 µM 酢酸ナトリウムを含む水 / アセトニトリル（50：50, v/v）を 200 µL 添加して混合（酢酸ナトリウムは定量する際、ナトリウム付加物かつ低濃度であれば、MS に悪影響を与えることなく再現性のよい結果が得られます）。分析条件製品番号装置： Thermo Scientific Dionex™ UltiMate™ 3000 RSLC HPLC system カラム： Accucore RP-MS、2.6 µm、50 x 2.1 mm 17626-052130 移動相 A： 0.1% ギ酸水溶液移動相 B： 0.1% ギ酸含有メタノールグラジェント： %B 60%–70（2 分）流速： 0.6 mL/min カラム温度： 30 ℃ 注入量： 2.5 µL 洗浄溶媒 1：水 / アセトニトリル（80：20, v/v）洗浄溶媒 2： 2-プロパノール / アセトニトリル / アセトン（45：45：10, v/v/v） MS 測定条件装置： Thermo Scientific TSQ Vantage™ MS イオン化条件： HESI Polarity： Positive ： Spray voltage（V） 4000 ： Vaporizer temperature（℃） 450 ： 30 Sheath gas pressure（Arb）： Aux gas pressure（Arb） 20 ： Capillary temp（℃） 365 ： Collision pressure（mTorr） 1.5 ： Scan time（s） 0.02 ： Q1（FWHM） 0.7 ： Q3（FWHM） 0.7 Table 1: プレカーサーイオンおよびプロダクトイオン 3 Compound Paclitaxel（IS） Docetaxel Precursor（m/z） Products（m/z） Collision energy（V） S-lens（V） 876.25 308.25 25 141 830.26 549.24 23 121 データ解析ソフトウェア： Thermo Scientific LCquan™ 結果 Figure 2および Table 2で示すように、ヒト血漿中 Docetaxelの抽出を行い、0.25 – 10 ng/mLの範囲で検量線を描き、r2 =0.9974の直線性が得られました。Figure 3に、LLOQ 0.25 ng/mLのクロマトグラムを示します。 0.3、1.5、6 ng/mLの QCサンプルにおいて、6回の注入を行い、精度 ≤8 .8%が得られました。 Table 3にこの3つの濃度における CV値を示します。 0.75 ng/mLで回収率を算出し、 Table 4で示すように109 %となりました。 100 1.0 90 0.9 80 0.8 Relative Abundance Area Ratio 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 70 60 50 40 30 0.2 20 0.1 10 0.0 0 2 4 6 8 0 10 ng/mL 0 Table2 :検量線0 .25 - 10 ng/mLにおける真度 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S7 0.250 0.500 1.00 2.50 5.00 7.00 10.0 10.0 測定値（ng/mL） %Diff 0.261 0.525 0.959 2.39 4.59 7.48 10.5 9.60 4.52 5.06 -4.14 -4.59 -8.21 6.87 4.54 -4.04 Table3 :QCサンプル6回注入における Docetaxelの精度 QC サンプル QCL QCM QCH 濃度（ng/mL） 0.300 1.50 6.00 1.5 2.0 2.5 3.0 Figure 3：ヒト血漿中 Docetaxel の SRM（0 .25 ng/mL ）真度および精度濃度（ng/mL） 1.0 Time (min) Figure 2：Docetaxel の検量線（0 .25 - 10 ng/mL ）標準試料溶液 0.5 測定値（n=6 平均）精度（%CV） 0.313 1.53 6.02 4.5 8.8 5.9