【学会発表】 演題名 スフィンゴ脂質の食品機能性について 発表者 木下幹朗 1、間 和彦 1,2、小野治三郎 2、菅原達也 3、小田有二4、櫛 泰典 1、宮澤陽 夫5、大西正男 1 (帯広畜大・生資科 1、日本製粉・中研 2、国立健康・栄養研 3、 農研機構・北農研4、東北大院・農5) 学会名 日本農芸化学会2003(口頭発表) 発表日 2003年3月 【発表内容】 目的 動物起源のスフィンゴ脂質は抗発癌作用や各種細胞へのアポトーシスを誘導することが知られて 1、2) いる。我々は植物スフィンゴ脂質の機能性について検討してきたが 、今回は植物セレブロシド からスフィンゴイド塩基およびセラミドを調製し、植物スフィンゴ脂質の構造とアポトーシス誘導活 性との関連についてヒト結腸がん細胞株を用いて検討した。 方法 各種の植物や真菌からセレブロシドを分離精製し、常法によってスフィンゴイド塩基画分を調製 し、逆相 HPLC によって各種スフィンゴイド塩基の単一分子種を得た。アポトーシス誘導活性は、5 X104cell/cm2 の Caco-2 細胞を24時間 10%牛胎児血清添加 DMEM 培地で培養した後、血清未 添加の DMEM 培地に切り替え、これに 0〜50M のスフィンゴ脂質誘導物を添加した。アポトーシ スに陥った細胞は、細胞核を 0.05% 4',6-diamidino-2-phenyliodole (DAPI)で染色して蛍光顕微鏡 下で計測された。また、スフィンゴ脂質との連関が示唆されている、β—カテニンの動態はウェスタ ンブロット法で解析した。 結果 20µMのスフィンゴイド塩基分子種(d18:24t,8t、d18:24t,8c、および 9-Me d18:24t,8t)を添加すると、動物 由来の trans-4-Sphingenine(d18:14t)や 4-Hydroxysphinganine(t18:0)と同様に 10%のアポトーシ ス細胞が認められ、特に、d18:24t,8c、および 9-Me d18:24t,8t が他の分子種と比較して高い傾向が 認められ、スフィンゴイド塩基投与で、細胞内β—カテニン含量が減少した。また、分化させた Caco-2 細胞では、スフィンゴイド塩基でのアポトーシスはほとんど誘導されなかった(3%以下)。 以上の結果より、1)スフィンゴイド塩基によるアポトーシスにはβ—カテニン(細胞増殖を亢進させ る wnt-β—カテニン経路の初発タンパク)の減少が関与する。2) 接触阻害により Caco—2細胞を 分化させると、アポトーシスが減少することが明らかになった。
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