681
酵素によう細菌の変異に関する研究
第2報 パンクレアチンによる研究
金沢大学医学部細菌学教室（主任 谷教授）
専攻生
窪
田
保
Tamotu． thbota．
（昭和27年6月25日受付）
第1章
緒
酵素に関する研究は最：近著しく盛んになり，
言
題と云うべし．
細菌学の領域に於いても，この研究は異常なる
宮永（1929年）1），鈴木（1930年）2）は，「カs
発展を遂げ，新しき方面を開拓しつつあり，
ラーゼ」を用い，青木（1929年）3）は，「リパー
今，有機触媒たる酵素を培養基に加えて，作
ゼ」及び「トリプシン」を用いて夫々研究発表
用せしむる時，酵素は種々なる条件の下に於い
せり．著者（1950年）4）も亦「ヂアスタ置潮」を
て，生活細胞たる細菌体に接触剤として作用し
用いて研究発表する所あり．
今般，膵臓酵素の混合物たる「パンクレアチ
或は助勢的に或は抑制的に作用して，細菌の生
活現象に相当の影響を与えるであろうと云う一こ
ン」を培養基に加え，種々実験を行いたるに脚
とは想像し得る所にして，その結果細菌に如何
か興味ある知見を得たり．依ってここに報告し
なる変異が惹起せられるかは，蓋し興味ある問
諸賢の御叱正を乞わんとす．
）
第2章
貿
験
第1節パンクレアチン液の調製
方 法
的に操作す）即ち，該濾液申の「ステアプシソ」は，水
局方「パンクレアチン」5）の3％：水溶液を作り，よ
の存在に於いて中性脂肪を分解して脂肪酸を分離せる
く溶解せる後，濾紙にて濾過す．濾液のPHを約8・0
によりPHほ酸性に傾きたるものと推定さる．従っ
とし，この液をSeitzの濾過器を以て濾過し，得たる
て，「パソクレアチy」をSeitzの濾過器を以て濾過す
滅菌濾液を実験に供す．
るも，作用力は失われざるものなり．
第2節 培養基の製法
次に，この滅菌濾液中に果して酵素の有効成分あり
ゃ否やを検せんがため，「ヂアスターゼ」及び「トリプ
3．7％普通寒天培地を作り（PH＝7．2），中試験管に
シy」の定量を行い，不安定なる「ステアプシン」に就
7cc自分注して滅菌す，この寒天培地を加熱溶解し，
いては定性試験を行いたり．即ち，Wohlgemuthの法
45℃の浴槽中に保ち各試験管に前記の調製パンクレ
・・によりて「ヂアスターゼ」を寵すオ・ぱ，d二一256
アチン液を培地の半量即ち，3．5cc宛注加し混和して
となり，Grossの法6）によりて「トリプシン」を定量
斜面となし，無菌試験を経て実験に供す（Pn“培地と
すれば，・一lt；1 ＝＝・28となる・「ステアプシソ」の離
称す）
上記の如くにして得た培地は，寒天約2．5％，PH約
試験f）として，中性牛乳0．5cc，蒸溜水1．Occ，該濾
液1．5ccを混じ（PH＝約7．4），これを38℃30分
7．5なり．
浴槽中に保てばPH約6．4となり酸性に傾く．（無菌
【詔 】
対照培地としては，前記の「パンクレアチン」液を
682
窪
田
100℃15分聞加熱し，その作用を消失せしめたるもの
「ミロン反応8）9）lo）は，普通寒天斜面に37℃20時
を同様に用いて培地を作り実験に供す．（K∼培地と称
間培養せる菌の1mg／ccの蒸溜水浮游液に「ミロ：ゾ
す）
試薬を1−2滴加え火焔上で加熱沸騰せしむ．試験管
壁に沿い菌の凝塊の昇るを陽性とす．陽性度強き時は
第3節使用菌株
沈澱を生ず．凝塊が煉瓦色に着色することあり．
実験に使用せる菌殊は，金沢大学医学部細菌学教室
細菌集落がR型の時には，本反応が陽性に現る，
保存のものにして，使用に先立ちて形態的及び生物学
第6節 トリパフラビン反応10）11）
的性状を検せり．
1）
2）チ フ ス 菌
普通大腸菌
清心せそ，凝集反応用試験管に0．1％トリパフラビン
3）
パラチフスA菌
4） パラチフス1ヨ菌
溶液0．5 ccをとり，これに：普通寒天斜面に37℃20
5）
赤痢菌（志賀）
6）赤痢菌（駒込A）
時間培養せる菌の2m9／cc蒸溜水浮游液1・一2滴を
7）
赤痢菌（駒込BIII）
8）赤痢菌（大野）
9）
赤痢菌（箕田）
10）赤痢菌（中村）
11）
赤痢菌（川瀬）
12）赤痢菌（西貢）
コ レ ラ 菌
14） ゲルトネル菌
15）
鼠チフス菌
16）霊
18） 黄色ブドウ球菌
13）
17）
緑
19）
膿
白色ブドウ球菌
21）
枯
草
菌
滴下し，37℃の贈卵器に2時間収めて結果を判定す・
凝集起れるを陽性とす．
細菌集落がR型の場合に本反応は陽性に昂る，
第7節 重金属イオン反応12）
菌
：普通寒天斜面に37℃約20時閥培養iせる菌の，
1mg／ccの蒸溜水浮游液に，10％Cuso4，2％
20） ＝普通ジYガイモ菌
AgNO3溶液のIN2滴を加え，加熱沸騰せる後に判定す．
菌
試験管壁に沿い菌塊が昇る場合を陽性とす，陽性度
養 方 法
第4節培
強き時は沈澱を生ず．
細菌集落がR型の場合に本反態は陽性に現る．（第
P∼培地に前記の21株の細菌を隔日に継代培養す．
5，6，7節の反応をS∼R型鑑別反応と称す）
対照としてはk∼培地に同様に培養す、
第5節 ミロン反応
第3章
實
験
成 績
第2節 普通大腸菌1雪）1の1の
第1節 P∼培地上の菌発育状態
第1項集落の状態
P∼培地上に於ける細菌の発育状態を検せん
がため，P∼培地に各種細菌を培養し37℃24
P∼培地23代通過菌の集落は，灰白色円形に
時間培養のものに就いて，その発育状態を観察
す，
実験に供せし21菌株は何れもよく発育し，対
照と異る所なし，然れ共，継代培養を血ぬる時
して原型菌集落と全く一致す．然るにK∼培地
23代通過菌集落は，2種の集落に分れ，一つは
原型菌集落に一致し，他は灰白色類円形辺縁稽
e不規則なる集落にして，これを普通寒天培地
は，以下に記する数種の菌は発育不良となり継
に4代継代培養すれば原型に復帰す．P∼培；地
代培養不能となる．
93代通過菌は，大小2種の集落を生ず，小集落
ユ）コ レラ菌（31）
は原型菌集落に一致し，大集落は灰白色類円形
2）赤痢菌（志賀）（37）
3）赤痢菌（駒込：BIII）（41）
の辺縁梢ヒ不規則なる集落にして，小集落の約
4）赤痢菌（川瀬）（41）
培地に10代継代培養すれば，一部は原型菌集落
5）赤痢菌（駒込A）（53）
に一致し，一一部は大なる集落を作りて原型には
1．r）∼2．0倍大の直径を有す．これを普通寒天
（括弧内の数字は継代培養可能代数にして，
復帰し難し．K∼培地に培養せる菌の集落は，
それ以後は継代培養不能なり）
帯黄灰白色不正形辺縁鋸歯’状，内部凹凸不正，
【訓 】
酵素による細菌の変異に関する研究
原型菌集落の約2∼3倍大の直径を有す．
683
生物学的性状を観察するに，第2表に示す如く，
：P∼培地93代通過菌集落に就き，S∼R型鑑
P∼培地93代通過によりて生ぜし大集落菌は，
別反応を行えば第1表に示す如く，小集落に於
継代培養100代に於て，：Maltoseに対する分解
ては，3反応共に陰性，大集落及び対照集落に
能力を完全に消失し，普通寒天培地に1e代培養
着て著明なり．
するも，Maltose分解能力を復活するには至ら
White8）， Pampana11），岡本12）等に従えば，
ず．P∼培地7（♪代通過菌は， Salii inを分：解す
小集落はS型，大集落及び対照菌集落はR型と
るに際し，24時間を要せしに，対照菌は10日を
云うべし．
要せり．
第1表 P∼培地93代通過菌集落
叉，前記2集落菌の100代目に於けるIndol
のS∼R型鑑別反応
熱容
小集落
反応，Methア1−red反応の発現には，第2表に示
Millon Trypaflavin 硫酸銅
硝酸銀
一十十沈
一十十沈
一十十沈赤
一十十沈
す如く，夫々2H，7日を要し，37代，70代に
於けるよりも遅延す．
第 2 表
蜿W落
菌
普通大腸菌
名
ﾎ照集落
『
：K∼培地
註；沈＝沈澱，赤＝沈澱煉瓦赤色（以下各菌
継代
共通）
類
一＝・陰性，±こ弱陽性，＋＝陽性
第2項形態的観察
Alabinose
Xylose
一 一 一
一
小集
大嵐
大嵐
落命
落菌
四十
100
100
o∼培地
一碧寒
い70
右各世代 37
10
㊥
（D
①
㊥
①
①
㊥
㊦
（D
㊥
①
①
（D
㊦
①
1）∼培地93代通過菌集落の中，小集落は比較
Rhamnuse
㊥
（D
（D
的単在性の両端二三の桿菌なり，大集落は長短
Glucose
①
㊦
①
①
①
㊦
大小不同2∼3個連鎖をなすものあり，両端は
Galactose
㊥
e
①
（D
①
①
一般に濃染性なり，「グラム氏染色を行いたるに
Saccllarose
一
陰性なり．今井日高氏法によりて鞭毛染色を行
いたるに何れも鞭毛を有す．対照集落に於いて
も前記大集落と略it同じ所見を有す．
一
『
一
噛
隔
Malto臼e
e
Φ
㊥
㊥
一
一
Lact（，se
㊥
（D
㊤
（D
（D
㊥
Dulcit
e
㊥
㊥
㊥
①
④
㊥
㊦
㊥
⑦
（D
㊥
①
（D
①
㊥
①
㊥
Sorbit
第3項 糖類分解試験
Ma㎜it
使用せる糖類及び高級アルコール類は，13種
i類にして培養i基は変法：Barsiekow培地を使用
せり．
Arabi nose， Xylose， Rhanmose， Glucose，
Galactose，’Saccharose， Ma｝tose， Lactosc
In（》sit
一
一
『
一
一
唱
Sal量cin
㊥
㊥
㊥
（D
㊥
㊥
Indo1＿R
十1
十1
十1
十2
十2
十2
Methyレred−R
十布
十5
十5
十7
十r
十7
’ lnosit， SaZicin，
Dulcit， Sorbit， Mlinnit，
普寒10＝P∼培地100代通過菌を：普通寒天培池へ
糖類分解試験を行うに当りては，菌を一度パ
10代培養
ンクレアチン」を含有せざる普通寒天培地に37
℃24時間培養せる菌を使用す，観察期間は2
註： 十＝分解，一＝非分解，○＝Gas形成，
十1，2，5，7＝発現までに要する日数
その他，Voges−Proskauer反応陰性， Ci trat−
週聞とす．
medium上に発育せず，牛乳を凝固し，Gelatin
第1回試験は37代，第2回試験は70代，第13
回試験は100代に於いて行う．（以下愚生共通）
P∼培地通過菌の糖類分解試験及びその他の
を液化せず，硫化水素を発生せざる等の性状に
関しては，原型菌と異る所なし．
1 35 ］
684
窪
田
第4項血清学的観察
P∼培地93代通過菌の大小2集落菌は，両端
P∼培地93代通過によりて生ぜし大小2種の
梢ヒ濃染性にして「グラム陰性桿菌，懸滴標本
集落菌が，原型菌免疫血清に対して如何なる態
にてその運動性を見るに，余り活濃ならず．
度を示すかを知らんと欲し，凝集反応を行えば
第3項糖類分解試験
第3表に示す如く，1，600倍の凝集価を有する
P∼培地通過菌の糖類分解試験14）15）及びその
原型菌免疫血清に対して，小集落菌は豹0倍ま
他の生物学的性状を検：するに，第5表に示す如
で，大憲落忌は400倍まで，夫々凝集さる，か
く，P∼培地70代通過菌に於ては， Maltoseに
くの如く，変性集落菌は原型菌免疫血清に対し
対する分解能力を消失す．これを普通寒天培地
て，被凝集性が相当に低下するを知る，
に10代継代培養するも分解能力を復活するに至
らず．叉，Inosit分解に際し， P∼培地通過菌
第3表 変性大腸菌の凝集反応
＼稀
ｫ墾
小集落菌
は24時間にて完全に分解するも，K∼培地通過
50
100
200
400
800
柵宮垣
什十丹
什島台
十±什
十閥十
1600
菌は72時間を要す，
硫化水素を発生する点に於いては，対照菌と
鴨一命
相違する所なし．
蜿W落菌
第 5表
ｴ型菌
re1一一mpt 一r一：1；＝：一：：；；；一r：
第3節鼠チフス菌
第1項集落の状態
P∼培地37代通過によりて，大小2種の集落
粗
名
壁
地
無数
糖
を生ず，小集落は灰白色正円形の集落にして原
型菌集落に一致す，大集落は類円形灰白色光沢
なく不透明，辺縁不規則なる集落なり．これを
類
Arabinose
灘37
大集落を作る．更にP∼培地に累代培養するも，
Saccharose
略同様の変化を繰返す，
Ma］ tose
これらの集落に就いて，S∼R型鑑別反応を
Lactose
行えば第4表に示す如く，大集落は3反日共に
陽性にして所謂R型の性状を示す，小集落は
Dulcit
Sorbit
Manni t
Inosit
塵L
集
落
二
loo 四
寒
ele o
e （DiCD e
o o e
o
eio o
O1（D
o o
Rhamnose
Glucose
100
集
落
一斗L
（IE）
（［DI（iE）
Galactose
70
’1−da1 6
（［E）
原型菌集落に復帰し，一部は前記同様の不正形
同様反応陰性にしてS∼型の性状を示す．
集
三里 P∼培地 落
菌
Xylose
普通寒天培地に7代継代培養する時は，一部は
Mi llon反応弱陽性に現るるの外は対照集落と
鼠チフス菌
集
落
兎
普
寒
10
（｛E）
（D
（ID
（ED
（ED
（ID
（D
c｛D
E）
olo
Oj〈［D
’（ll） 1 （｛D
elo
（iD
（［D
（ll）
（D lO
（ID
十1十
十
o o
e e
（iD
（ID
（［1）
（［D
o o e
o
EE）
（lll）
Saliein
第4表
1）∼培地37イL℃通過菌「集落
H2S発生
のS∼R型鑑別反応
※
一小集落
蜿W落
ﾎ照集落
@一 一 一 一
?一
一
一
＿ −
■ 了 一 ＿＿ 冒 ＿
±十鞠
十
一 一 一
培地へ10代培養
硝酸銀
硫酸銅
c 『
@『
@十
@一
第2項形態的観察
一十口
＋1＋
at ：普寒10＝P∼培地70代通過菌を普通寒天
Trypaflavin
Mi110n
十
一
第4項血清学的観察
一 一 一
@一
@十
@囎
P∼培地100代通過大小2集落菌が原型菌免
疫血清に対する態度を知らんと欲し，凝集反応
を試むれば第6表に示す如く，小集落菌は1，600
倍まで，大集落菌は400倍まで，対照菌は3，20（♪
（ ss ］
685
酵素による細菌の変異に関する研究
第2項形態的観察
倍まで凝集さる．
変性集落菌の形態は対照菌に比し，菌体は稻
第6表 変性鼠チフス菌の凝集反応
マ、
小集落菌
it太き感を与う．グラム陰性桿菌．
50
100 200 400 800 1600 3200
第5項糖類分解試験
P∼培地通過菌の糖類分解試験を行えば第8
柵甘柵
什十柵
十十什
十十十十、
十一甘
十一十
一鞠十
表に示す如し，37代，70代に於ては対照菌と異
蜿W落菌
る所なし．然るに100代に於ては，P∼培地通
ﾎ照集落菌
第4節ゲルトネル菌
過菌は3週間に亘って観察するもDulcitを分
解せず，対照菌は48時間にて分解す，蓋し
第1項集落の状態
Dulcitに対する分解能力消失すると云うべし．
第8表
P∼培地28代通過菌集落は，灰白色不透明に
して対照菌集落に比し稻ヒ大なり。これを普通
寒天培地に2代継代培養すれば原型菌集落に一・
i致す，
菌
名
培
地
ゲルトネル菌
鵜一
※数 ｢代
辺は稽セ不規則の集落にして，小集落の1．0∼
1．5倍大の直径を有す．小集落は正円形にして
対照菌集落tl＝一一一致す．大集落は，これを普通寒
天培地に7代継代培養するも，同様の集落を生
じて原型菌集落に一致するに至らず．
集虞
大集
落菌
落菌
落菌
落菌
普寒10
普寒10
P飼培地
右各 37
P∼培地93代通過菌に於ては，大小2種のi集
落を作り，大集落は僅に帯黄灰白色類円形，周
小集
一100 一100
70
100
Arabinose
㊥
①ie
（D
㊥
①
（D
㊧
Xylose
㊥
（D
④
㊥
㊥
（D
（D
㊥
Rhammose
㊥
㊦
①
㊦
（D
㊥
①
㊧
Glucose
㊥
①
㊦
㊥
㊥
㊥
㊥
（D
Gala心tose
（D
㊥
④
①
㊥
㊥
㊥
④
Saccharose
これらの集落に就いてS∼R型鑑別反応を行
Ma星tose
一
一
嗣
一
陶
隅
噸
哺
（D
①
㊥
㊥
㊥
㊥
①
㊥
鞠
曙
哨
輔
一
一
軸
輸
一
碗
えば第7表に示す如く，P∼培地28代通過菌集
Lactose
暉
一
一
落は，Mi llon反応弱陽性， Trypaflavin反応陽
Dulcit
①
㊥
（D
性，重金属イオン反応弱陽性を示す．P∼培地
93代通過菌の小集落は，3反応共に陰性，大集
Sorbit
①
①
①
㊥
①
①
㊥
㊥
Manni t
㊥
⑤
㊥
（D
①
㊥
㊥
①
落は，3反応共に陽性，対照菌集落に於いては，
Inosi t
一
一
一
一
噛
一
一
一
噌
一
關
輸
一
幅
剛
一
Salicin
3反応陰性を示す，P∼培地28代通過菌集落は，
その状S型よりR型への移行型と見逸すべき
第4項血清学的観察
か．
P∼培地93代通過によりて生ぜる大小2集落
第7表 P∼培地通過菌集落の
に就きて血清学的観察を行えば第9表に示す如
S∼R型鑑別反応
く，原型菌免疫血清に対し，小集落菌は6，400
iillx＞］xEl．1｛ltui；1 “’｛i1i”n
Trypaflavin 硫酸銅
硝酸銀
倍まで，大集落菌は800倍まで，対照菌は6，400
第9表変性ゲルトネル菌の凝集反応
P∼培地28代
集
落
主
十
±
豪
士
P一培地93代
小集落
P∼培地93代
大集落
100 200 400 800 1600 3200
小集瀦国大購劇什対照集落菌陣
十
十
十
十
K∼培地93代
集
50
落
【訂 】
構什柵
督什柵
什十朴
十士什
十輌十
十一十
土一十
晒
窪
田
倍まで凝集せられ，P∼培地通過菌は対照菌に
比し被凝集性が低下す．
性の成績を示す．Katalase反応陽性，牛乳を凝
固せず，Gelatinを液化せず，硫化水素を発生
第5節赤痢菌（中村）
せざる点に於いては，対照菌と異る日なし．
第1項集落の状態
第11表
：P∼培地58代通過によりて，大小2種の集落
を生ず．小集落は原型菌集落に一致し，正円形
にて稽ヒ粘稠性を有す．大集落は小集落の1．・5
∼2，0倍大の直径を有し，正円形或は類円形の
集落にして周辺はre e不規則なり．これを普通
寒天培地に7代培養すれば，一部は原型菌集落
に一一ikし，一部は完全には・一致せずして周辺稽
菌
名
赤痢菌（中村）
地
騙P一儀
小集
￨
一 一
砂♂悔離
1十
Arabinose
Xylose
一
小集
呼集
落菌
落菌
集
落菌
｝ 一 一
落菌
』70 ｝『 ｝70
37
一100
V0
工00
u
十
十
十
十
十
十
『
鞘
『
殉
一
一
Rhamnose
e不規則なり，
一
一
剛
一
一
聞
廓
Glucose
十
十
十
十
十
十
十
これらの集落に就いて，S∼R型鑑別反応を
Galactose
十
十
十
十
十
十
十
行えば第110表に示す如く，小集落はMillon反
Saccha】ose
哨
一
唖
一
一
■一
一
応弱陽性，他は陰性，大集落はTrypaflavl n反
Maltose
十
一
一
『
喝
一
一
応弱陽性，他は陽性，対照菌集落は3反応共に
1．actose
咽
一
鞠
一
殉
一
一
陰性なり，これらの集落は継代培養して100代
Dulcit
噛
一
一
一
瑠
口
一
に至るも略ll同様の有様を繰返す．
S（♪rbit
Manni t
第10表 1）∼培地・58代通過菌の
Inosit
S∼R型鑑別反応
＼ 反
_＼麿
小集落
；
l’1㎞
o・幽㎞
Salicin
硫酸銅
硝酸銀
剛十曙
曙十一
軸
一
噛
十
十
十
1十
十
十
鴫
一
噛
一
殉
一
一
『
一
一
一
剛
一
閥
一
嘲
一
囎
一
一
第4項血清学的観察
±十閣
『±『
『
十
1＋
IndoレR
1「『
嘲
蜿W落
ﾎ照画
W 落
P∼培地通過菌と原型菌免疫血清との間に凝
集反応を行えば第12表に示す如く，P∼培地37
代通過菌は3，200倍まで凝集せらるるに，’P
∼培地70及び100代通過菌は1，600倍まで凝集
第2項形態的観察
：P∼培地100代通過菌は，両端稽ヒ濃染性に
せらる．K∼培地通過菌は何れも6，400倍まで
して，「グラム陰性の桿菌なり，
凝集せられ，P∼培地に継代培養を続くるに従
第5項 糖類分解試験
第12表 P∼培地通過菌の凝集反応
P∼培地通過菌の糖類分解試験を行えば第」1
表に示す如く，P∼培地37代通過菌に於ては，
：Maltoseに対する分解能力を消失し，普通寒天
院主
培地に1〔戚継代培養するも分解能力を復活する
に至らず，この性質はP∼培地70及び】00代に
32001漣
50
?
37
一
100 200 400 800 1600
一
什骨i什柵
P∼培耽 V0
於ても同様なり．
督
{｝‡ 『 一
十十±十十十十
十『一十十十
一一一十十十
一
P00
その他の生物学的性状を検するに，P∼培地
37代通過菌に於ては，Indo1反応は48時間培養
菌に就いて観察するも全く陰性の成績を得，然
るに対照菌に於いては，24時間培養菌にて強陽
（ ss ］
? 一 一 『
? 一
一 一 一 一
一
37
脚半丹
K∼培地 V0
P00
刑柵
柵督什
｝−
酵素による細菌の変異に関する研究
いて，被凝集性は次第に低下するが如し，
687
異る所なし．
第14表
第6節パラチフス：B菌14）の
第1項集落の状態
’
菌
P∼培地50代通過によりて2種の集落を生
ず．一つは正円形の微小集落にして殆んど透明
なり，他は半透明の少しく不正なる円形集落に
して原型菌より梢自大なり，これを普通寒天培
名
培
パラチブス：B菌
K｛’
地
P∼培地
￨地
』右各
＼き数 ｢代
微集
小才
大集
微集
落菌
集
落菌
小才
『100 一100
30
70
100
70
70
Arabin⑪se
㊥
㊦
㊥
e
㊥
㊥
①
①
Xylose
㊥
㊥
㊦
（D
①
落を形成し始め，代を累ぬるに従いて大なる集
④
①
㊦
Rhamnose
（D
㊥
Φ
①
㊥
（D
Glucose
㊦
㊥
㊥
㊥
（D
①
㊥
これらの集落に就いてS∼R型鑑別反応を行
e
e
（D
落の数を増す，後者は次第に原型菌に近似す．
Galactose
①
㊥
（D
㊥
（D
㊦
㊥
えば第13表に示す如く，微小集落は3反応共に
Saccharose
弱陽性，大集落は硫酸銅に於いて弱陽性，他は
Maltose
陽性を示す．両集落共にR型への移行型と見倣
1．actose
地継代培養すれば，前者は5代目より大なる集
Dulcit
すべきか．
㊥
一
一
閣
剛
一
｝
一
一
④
㊥
㊦
①
㊥
㊦
（D
e
一
一
一
一
一
帽
一
霜
㊥
①
㊦
①
①
㊦
①
④
Sorbit
㊦
㊥
㊥
㊥
㊦
Φ
Manni t
e
①
第13表 変性パラチフス：B菌のS∼R型鑑別反応
（D
㊥
（D
①
①
（D
①
（D
※応
Inuおit
㊥1
㊥2
一
『
圃
㊦2
㊦・ゆ・
微小集落
：MiHon
Trypaflavin
硫酸銅
硝酸銀
Sahcin
一
@一 一
±十±
±十“
±±一
「
一
一
一
（D2
e2
④2
±十幽
第4項 血清学的観察
P∼培地通過菌と原型菌免疫血清との間に凝
蜿W落
ﾎ照菌集落
集反応を行えば第15表に示す如く，P∼培地37
代通過菌は12，SOo倍まで凝集せらるるに反し，
第2項形態的観察
70代及び100代通過菌は1，60（，倍まで凝集さる
微小集落菌は両端鈍円の中等大桿菌なり，微
小集落菌，大集落菌共に両端濃染性，「グラム」
るのみ，継代培養を続くるときは，被凝集性が
次第に低下するを思考し得．
陰性なり，
第15表 P∼培地通過菌の凝集反応
第3項 糖類分解試験
P∼培地通過菌の糖類分解試験を行えば第14
轟地
50
100 200 400
表に示す如く，P∼培地70代通過菌に於いては，
Inositに対する分解能力を消失す． P∼培地37
37
代通過菌に於いては，Inositを分解すべく2日
柵柵
柵二二
P∼ 蛯e
ｹ地
す．即ち，P∼培地通過菌は，その分解能力を次
過菌は，Salicinに対する分解能力を有す．100
ｧ地
V0
二十十
十十十
十一一
±一刷
卦十十
什十十
十十十
十十十
12800
B＋
371柵
K’・》
1600 3200 6400
¥十 羽
号要するも，対照菌に於いては24時間にて分解
第に低下するものの如し，叉，P∼培地7（耽通
柵 十十
脚
柵柵珊
什什
柵三州什
柵
P100i柵
@1
代通過菌に於いても同様なり．
第7節 その他の菌の変性
その他の生物学的性状に於いては，Indol反
応陰性，Gelatinを液化せず，牛乳を凝固せず，
硫化水素を発生する等の点に於いて，対照菌と
［ 59 1
第1項 チフス菌
P∼培地93代通過菌は大小2種の集落を生
688
窪
田
ず．大集落は灰白色半透明の集落にして，小集
照菌と異る所なし．
落の1．5∼2．0倍大の直径を有す．小集落は小
その他の生物学的性状に於いても対照菌と異
円形透明の集落にして原型菌集落に一・致す．大
る所なし．即ち，Gelatinを液化せず，牛乳を
集落は，普通寒天培地に3代培養すれば原型菌
凝固せず，Indol反応陰性，硫化水素を発生す．
P∼培地100代通過菌と原型菌免疫血清との間
集落に一・i致す．
形態的には対照菌よりも僅に長き感を与う．
に凝集反応を行えば，P∼培地通過菌は3，200
倍まで凝集せらるるも，K∼培地同母通過菌は
「グラム陰性桿菌，今井H高時法により鞭毛を
認む．
6，400倍まで凝集せらる．P∼培地通過菌は対
糖類分解試験を行えば第16表に示す如く，対
照菌に比し僅に被凝集性が低下す．
第
菌
名
糖 継代数
類
チフス菌
P
93
K
93
Arabinose
Xylose
十
十
十
十
Rhamnose
Glucose
GalactDse
パラチフ
スA菌
P
K
16 表
赤痢菌
（箕 田）
P
K
loo
loo
100
lco
o
e
o
e
o
o
o
o
o
e
o
十
十
十
十
（D
十
十
十
十
o
e
e
（ED
o
o
o
赤痢菌
（志賀）
P
37
K
37
赤痢菌
（犬 野）
P
93
K
93
赤痢菌
（西 貢）
P
K
赤痢菌
（川瀬）
P
K
93
93
37
37
十
十
十
十
十
十
十
十
十
十
十
十
十
十
十
十
十
十
十
十
十
十
十
十
十
十
Saccharose
Maltose
Lactose
Dulcit
Sorbi t
Mannit
o
一1一
o
o
十
（i］）
十
（［D
十7
十i
十
下
Inosit
Salicin
郎：P＝P∼培地
K＝K∼培地
十7．t＝分解に要する日数
第2項パラチフスA菌
P∼培地37代通過によりて2種の集落を生
応陰性，牛乳を凝固せず，Gelatinを液化せず，
硫化水素を発生せざる等，対照菌と異る所なし．
70代及び100代に於て検するも，この程度以
ず，一つは灰白色半透明の円形集落にして，原
型菌集落より梢ミ大なり．他は前者よりも僅に
上の変化を認め難し．
大にして灰白色不透明の周辺梢ヒ不規則なる集
血清学的には，P∼培地70代通過菌は，原型
落なり，これらの集落を普通寒天培地に5代培
菌免疫血清に対し，6，400倍まで凝集され，対
養するも夫kの特長を失わず．
照菌はユ2，800倍まで弱く凝集さる．即ち，P
∼培地通過菌の被凝集性は低下す．
形態的には両端略解なる小桿菌にして，「グラ
第3項赤痢菌（箕田）
P∼培地47代通過により大小2種の集落を生
ム陰性，鞭毛を有す．
糖類分解試験を行えば第16表に示す如く，対
ず，小集落は灰白色半透明円形集落にして，原
照菌と異る斜なし．
型菌集落に一致す．大集落は帯黄灰白色，不透
その他の生物学的性状に於いても，1皿dol反
（ 40 ］
酵素による細菌の変異に関する研究
明にして小集落の1．5∼2．0倍大の集落なり，
689
これらの性状は100代通過菌に於いても同様
これを普通寒天培地に5代培養するも，それら
の性質を失わず．
なり．（赤痢菌（志賀），赤痢菌（川瀬）を除く）
夫々の原型菌免疫血清と凝集反応を行えばP
形態的には両端鈍円なる小桿菌にして，「グラ
∼培：地通過菌は，K∼培地通過菌に比し僅に低
ム陰性．
価に凝集さる．
糖類分解試験に於いては，対照菌と異る所
第5項緑膿菌ls）20）21）
なし，叉，その他の生物学的性状に於いては，
P∼培地93代通過によりて大小2種の異りた
Indol反応陰性，牛乳を凝固せず， Gelatinを
る集落を生ず．小集落は帯緑半透明円形集落な
液化せず硫化水素を発生せず．
り．大集落は帯緑灰白色不透明周辺梢不規則，
第70代，第100代に於いても同程度の変化な
内部稽セ不均等の集落なり．S∼R型鑑別反応
り．
を行えば，小集落は：Millon及び’rrypaflavin
P∼培地70代通過菌は原型菌免疫血清に対し
反応弱陽性，重金属イオン反応陰性，大集落は
1，600倍まで凝集され，K∼培地70代通過菌は
3，200倍まで凝集さる．
3反応共に陽性の成績を示す．
形態的には，両集落共に細長き桿菌にして
第4項赤痢菌（志賀）18）
2∼3個連鎖をなせるものあり．
赤痢菌（大野）
その他の生物学的性状として，Gelatinを液
赤痢菌（西貢）
化し，牛乳を凝固し次いで消化す．
赤痢菌（川瀬）
P∼培地通過菌の色素産生の程度は，K∼培
地通過菌に比し常に著明なり．（37℃24時間培
P∼培地93代通過により大小2種の集落を生
ず．小集落は微小集落にして灰白色半透明円形
なり．大集落は小集落より梢ヒ大にして，円形
養…）
第8節変性を認めざる菌
P∼培地100代通過に依りて何等の変性をも
灰白色半透明でngN it粘稠性なり．これを普通寒
来さざる菌は下記の如し．
天培地に5代培養するも夫々の特性を失わず．
（赤痢菌（志賀），赤痢菌（川瀬）は第37代にて
1）赤痢菌（駒込A）
検：す）
2）赤痢菌（駒込BIII）
3） コ レ ラ 菌
形態的には両端鈍円の桿菌にして両端は濃染
一4）黄色ブドウ球菌
性の傾向を有す．「グラム陰性，
糖類分解試験に於ては第16表に示す如く，赤
5）白色ブドウ球菌
6）霊
菌
痢菌（川瀬）を除き対照菌と異る所なし．
その他の生物学的性状に於いては，K：atalase
7） 普通ジャガイモ菌
反応は赤痢菌（志賀）陰性，他3菌陽性，Indol反
応は，赤痢菌（志賀），赤痢菌（川瀬）（10日観
8）枯 草 菌
（コレラ菌，赤痢菌（駒込A），赤痢菌
察）陰性，他2菌陽性，4菌共に牛乳を凝固せ
（駒込：BIII）は夫々3（状，40代に於て
ず，Gelati nを液化せず，硫化水素を発生せず，
検査せるものなり．）
第4章 総括並びに考按
1．細菌の発育状態
P∼培地に21種の細菌を培養しその発育状態
養を累ぬる申に数種の細菌は，発’育不良となり
を観察するに，大部分の細菌は発育良好にして，
継代培養は困難となる．即ち，「コレラ菌（31），
K∼培地に培養せる菌と異る所なきが，継代培
［ 41 1
6co
窪
田
4．糖i類分解能力の変化
赤痢菌（志賀）（37），赤痢菌（駒込：BIII）（41），
赤痢菌（川瀬）（41），赤痢菌（駒込A）（53）の5
普通大腸菌のP∼培地100代通過大集落菌
菌なり．（括弧内は継代培養可能代数にして，そ
は，Maltoseに対する分解能力を消失す．
れ以後は継代培養不能なり）
鼠チフス菌のP∼培地7⑪代通過菌は，：MaltOse
2．i集落の変化
に対する分解能力を消失す．又，Inositを分解
P∼培地に細菌を継代培養するとき，変性集
するに際し，24時間を要す．然るに対照菌は72
落を生ずるものあり．その大部分は腸内病原菌
時間を要す．
にして，非腸内病原菌としては，緑膿菌のみな
「ゲル｝ネル菌のP∼培ttL 100代通過菌は，
Dulcitに対する分解能力を消失す．
り．
継代数と変性集落の固定性との関係を見る
赤痢菌（中村）の：P∼培地37代通過菌は，
と，37代前に於いて固定性を得るものはなし．
Maltoseに対する分解能力を消失す．
37代に於いては，鼠チフス菌，パラチフスA菌，
「パラチフス：B菌のP∼培地37代通過菌に於い
赤痢菌（志賀）及び赤痢菌（川瀬），47代に於い
ては，Inosit分解時間遅延し，70代以後に於い
ては，赤痢菌（箕田），50代に於いては，パラチ
ては分解能力消失す．P∼培地70代通過菌に於
フス：B菌，S8代に於いては，赤痢菌（中村），93
いてはSalicinに対する分解能力を獲得せるも
代に於いては，「ゲルFネル菌，チフス菌及び緑
のの如し．
膿菌が夫々相当に固定性を得．
赤痢菌（川瀬）のP∼培地37代通過菌に於い
普通大腸菌に於いては，93代に於いて固定性
ては，Sorbitを分解すべく，7日を要す。然る
ある集落を生ずれ共，K∼培地通過菌に於いて
に対照菌に於いては24時間にて分解す．ここ
も同様の所見を認む．
に於いて，P∼培地通過菌のSorbit分解能力
これらの集落に就いて，S∼R型鑑別反応を
の低下を推測し得．更に継代培養を続くれば，
分解能力は消失せんか．
行えば，陽性の成績を得るものあり．White，
Petmpana，岡本等に従えば，これらの変性集落
上記の如く，Maltoseに対する変化の多きは，
はR型と云うべし，又，「ゲルトネル菌のP∼培
Maltoseが不純或は不安定なるによるものなら
地28代集落の如く，弱陽性に現るはS∼型より
んか．
R∼型への移行型と見倣すべきか．
：Pbili p（1935）15）等は， Maltose非分解鼠チフ
「パラチフス：B菌のP∼培±de・50代通過菌集落の
ス菌に就いて報告す．著者も亦，鼠チフス菌の
如く，明にS型と思わる集落に拘らず，上記3
反応弱陽性に現るはS∼r型と見なすべきもの
変異菌としてMaltose非分解菌を分離せり，
集落の変性を来すことなくして糖類分解能力
ならん．
の変性を来すものはなし，集落の変性を来すも
糖分解能力の変性を来さざる菌多し．
使用菌数は少なるも，球菌及び有芽胞菌に於
5． その他の生物学的性状の変化
いては変性を認めず．
3．形態的変化
普通大腸菌のP∼培地100代通過菌は，
変性菌は，一般に菌体が太く両端濃染性の傾
Indol反応及びMethyl．red反応発現に夫々2日，
向を有す．普通大腸菌及び鼠チフス菌の如く数
個連鎖をなすものあり．
7日を要し対照菌に比し遅延す．
赤痢菌（中村）のP∼培地37代通過菌は，
「グラム染色，鞭毛染色に於いては，対照菌と
異りたるものなし．
Indol反応消失す．
牛乳凝固，Gelatin液化，硫化水素発生，
大小2種：の集落を生ぜし場合，小集落より大
Katalase反応等に関しては，何等の変化を認め
集落に於いて，その変化著明なるが如し．
ず，
（ 42 ］
691
酵素による細菌の変異に関する研究
集せらる．特に，普通大腸菌，鼠チフス菌及び
6．変性菌の凝集反応
「ゲルトネル菌に於いて著明なり．
原型免疫血清に対し，変性菌は相当低価に凝
第5章
結
論
P∼培地に21株の細菌を培養し，細菌に如何
赤痢菌（川瀬）のSorbit分解時間は遅延し，
なる変異が現るかを検して次の結論を得たり．
鼠チフス菌のInosi t分：解時間は促進せらるる
1．多くの病原性腸内細菌は，「パンクレアチ
が如し．
ン」に依りてR型化を促進せらるるが如し．
「パラチフス：B菌は，Salicinに対する分解能
2．変性菌の形態は，両端濃染性なるもの多
力を獲得す．
5．赤痢菌（中村）は，Indo1を産生せざる
し，
3。球菌及び有芽胞菌に於いては，変性を来
に至り，普通大腸菌に於いては，Indol産生能
低下するものあり．
すものなし．
4．P∼培地に継代培養するとき，普通大腸
6．変性集落菌は，原型菌免疫血清に対して，
被凝集性が低下す．
菌，鼠チフス菌及び赤痢菌（中村）は，Maltose
に対する分解能力を失い，「ゲルトネル菌は，
摘筆するに当り終始御懇篤なる御指導並びに御校閲
Duleftに対する分解能力を失い，「パラチフス：B
を賜りたる恩師谷教授に潔謝す．
菌はInosi tに対する分解能力を失うに至る．
主
要
文
献
1）宮尿：日i新医学，18：1970，2155（192g）
894 （1943） 13） Anna：J． lnfecf． Dis．，
2）鈴木：愛知医学会雑誌，37二964（1930）
42：575 （1928） 14） Roberts Breed：
5）青木：衛生学伝染病学雑誌，32：485（1936）
Bevgey’s manual of detaminative Bacteriology．
4）窪田：十全医学会雑誌，54；94（1952）
6th Edition． 445， 501， 502 （1948） 15）
5）朝日奈：日本薬局方，6版＝428（1951）東
Philip：J． Bact．， so；465 （1935） 16）
京，南江堂． 6）金井：臨躰検査法提要，10
Sberman：J． Bact．， ss：315 （1937） 17）
版・286287（1951） 東京，日本医書出版．
石山：福岡医科大学雑誌，Zl：1006（1929）
18）渡邊：衛生学伝染病学雑誌，18：214
7）大里，日ts ：内科診断書，7版＝241（1948）
東京，南山堂．
sa ： 85 （1929）
6 ： 15 （1951）
8） White；J． Path． Bact．，
（1922）
9）齋藤：日本細菌学雑誌，
（1929） mo） Maschman：Zbl．， Bacter．， 1．
10）晶晶＝名古屋医学雑誌，
as ： 95 （1949）
11） Pampana：J． Hyg，，
ss ： 402 （1933）
12） 岡本：日新医学，32：
19） 梅田：慶応医学，9；949
o． 1ca：288（1937） 21）山本＝日本微生物
学会雑i誌， 19 ： 1582（1925）
（ 45 ］
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