■ビタミンB1(チアミン)の測定例(ポストカラム誘導体化法) AS/LC-037 ビタミンB1(チアミン)は水溶性ビタミンに分類される生理活性物質です。天然にはチアミンとその リン酸エステルの形で存在しますが、体内ではリン酸エステルが切断されチアミンとして吸収 されます。糖質を分解する酵素を助けエネルギーに変える働きがあり、豚肉、うなぎ、玄米などに 多く含まれています。不足すると糖質のエネルギー代謝が悪くなり、疲れやすくなったり手足の しびれやむくみが現れます。 今回は食品衛生検査指針(*)に示されている分析法の内、「高速液体クロマトグラフ法」に準拠して 日立高速液体クロマトグラフ Chromasterで測定しました。ビタミンB1をアルカリ性フェリシアン化 カリウムによりチオクロームに変換し、蛍光検出するポストカラム誘導体化法です。 N H3C N NH2 CH2 N S Cl CH2CH2OH CH3 C12H17N4ClOS = 300.81 (*)食品衛生検査指針 理化学編(日本食品衛生協会 2005年) 【ビタミンB1 (チアミン)構造式】 ■ビタミンB1 標準試料と栄養ドリンクの測定例 20 ビタミンB1 r2 = 0.9999 (1 ~ 100 μ g/L) 25 面積(×10-4) 15 FLU ビタミンB1 50 μ g/L 10 5 20 15 10 5 0 0 0 0 1 2 3 4 min 5 6 7 20 8 40 60 濃度(μ g/L) 80 100 【ビタミンB1 直線性】 10 栄養ドリンク 6 FLU <測定条件> カラム : 溶離液 : 流量 : カラム温度 : 反応液 : 反応液流量 : 反応温度 : 検出波長 : 注入量 : ビタミンB1 8 4 2 <溶離液調製法> リン酸二水素ナトリウム 1.2 g、過塩素酸ナトリウム一水和物 21.1 g を 水に溶かし 1 L とし、過塩素酸で pH 2.2 に調整する。この緩衝液 900 mL と メタノール 100 mL を混合する。 0 0 1 2 3 4 min 5 6 7 LaChrom Ⅱ C18 (5 μ m) 4.6 mm I.D. × 150 mm リン酸緩衝液(pH 2.2) / メタノール = 9 / 1(v/v) 0.8 mL/min 40 ℃ 0.01 % フェリシアン化カリウム・15 % 水酸化ナトリウム 0.4 mL/min 40 ℃ FL Ex 375 nm、Em 440 nm 20 μ L 8 <反応液調製法> フェリシアン化カリウム 50 mg を量り採り、15 % 水酸化ナトリウム溶液を 加えて 500 mL とする。容器はプラスチック製容器を使用する。 <試料調製法> 0.1 N 塩酸で10000倍希釈し、0.45 μ m フィルタでろ過 カラムオーブン オート サンプラ ポンプ 反応コイル(*1) カラム FL検出器 ポンプ 溶離液 反応液 【流路図】 (*2) 廃液 (*1)試験法では反応コイル 0.8 mm I.D. × 1 m と記載されているが、ここでは 0.25 mm I.D. × 3 m を使用した。 (*2)感度低下を避けるため、反応ポンプのインレットチューブフィルタと流路フィルタはSUS製から樹脂製に変更した。 主な装置構成 : Chromaster 5110 ポンプ×2、5210 オートサンプラ、5310 カラムオーブン、5440 蛍光検出器、ビタミンB1分析キット、カラム 注意 : 本資料に掲載のデータは測定例を示すもので、性能を保証するものではありません。 Page.1 (2014/03)
© Copyright 2024 ExpyDoc