演題No41 ●体位性蛋白尿を判定するための前彎負荷試験前後における尿中蛋白解析久保田亮1、楠木杏奈1、大平賢太郎2、入野さつき2、酒井伸枝3、川上保子1、金森きよ子1、下村弘治1、芝紀代子2 1 文京学院大学保健医療技術学部臨床検査学科、2文京学院大学大学院保健医療科学研究科、 3 埼玉県立大学保健医療福祉学部健康開発学科【はじめに】 ③SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS- 体位性蛋白尿は安静臥床では尿蛋白が陰性であ PAGE）法り、立位では尿蛋白陽性となる蛋白尿をいう。そ負荷前後で総蛋白濃度を調整した尿検体を用い、の予後は良好とされているため、多数の例におい SDS-PAGEを行った。泳動したゲルは銀染色｢キて詳細な検査はなされておらず、体位性蛋白尿にットワコー（和光純薬工業）を用いて銀染色を行どのような蛋白が含まれているか不明な点が多い。った。そこで本研究では安静時に採尿した尿を負荷前尿、 ④ウエスタンブロット法５、10、15分間の負荷を与え採尿した尿を負荷後 SDS-PAGE後、α1-m、RBP、β2-mの抗体を使尿とし、これらの尿中の各蛋白成分の変動につい用し、それぞれウエスタンブロッティングを行って比較したところ、２，３の知見が得られたので報告する。た。【結果】【対象】 ①負荷前後における尿蛋白の増加率同意の得られた文京学院大学保健医療技術学部負荷前に比べ、負荷後上昇したのは、尿試験紙臨床検査学科の男子学生17名（年齢21∼22歳）の法では５分負荷では17名中10名（59%）、10分負荷前彎負荷試験前後の尿を用いた。では４名（24%）、15分負荷では３名（18%）、総【方法】蛋白定量法では５分負荷では17名中９名（53%）、１．前彎負荷試験方法 10分負荷では７名（41%）、15分負荷では17名中14 第二腰椎の突起部に直径４cmの塩化ビニル棒を地面と平行になるよう両腕で抱え、足は膝関節を名（82%）であった。 ②SDS-PAGE法伸ばし、肩幅に両足を開き、下肢軸の延長線と躯負荷前が尿蛋白試験紙陰性であり、負荷後に蛋幹軸の延長線上の角度を約20°になるよう上体を白が上昇していた人の尿についてSDS-PAGEを行後ろに反らせた。ったところ、負荷後はアルブミンより高分子領域２．採尿方法および39.2 kDaと27.7 kDaのバンドが濃染してい安静時に採尿した尿を負荷前尿とし、約180 ml の飲水後、前彎負荷試験を行い、安静後採尿した。た。 ③ウエスタンブロット法負荷時間とその後の安静時間は合わせて35分になるよう調整した。負荷前が尿蛋白試験紙陰性であり、負荷後に蛋白が上昇していた人の尿について、負荷前後のα ３．測定方法 1 ①試験紙法 α1-m、β2-mについては負荷後において、負荷前 -m、RBP、β2-mの分子サイズを確認したところ、ウロペーパーⅢ栄研（栄研化学）を用いUS1000（栄研化学）で尿蛋白を測定した。に存在する低分子のバンドが消失し、高分子側にバンドが見られた。 ②各蛋白成分の定量【まとめ】自動分析装置（Accute、東芝メディカル）を用今回、前彎位に負荷をかけることにより、低分いて、総蛋白、α1-ミクログロブリン（α1-m）、レ子蛋白が高分子化するという非常に興味深い知見チノール結合蛋白（RBP）、β2-ミクログロブリンが得られた。（β2-m）を測定した。 90 生物試料分析 Vol.35 No.1 2012