６ PRRS-ELISAにおける非特異的陽性反応に対する一考察西部家畜保健衛生所１ ○ 梁川直宏千代隆之はじめに管内PRRS陰性A農場にて、PRRS-ELISA（ELISA）陽性反応があり、その後、確認検査、疫調査を実施し、 ELISA陽性反応は非特異的陽性反応と断定し、 PRRS陰性と判断した。当事例について、「ワクチン履歴」「他疾病の抗体検査」「血清生化学的検査」「非特異的陽性反応の除去」を4本柱に、多角的に原因追求を試みた。２ PRRS-ELISA陽性反応事例ＰＲＲＳ -ＥＬＩＳＡ家畜伝染病予防事業を根拠に、 A農場の県外導 • １０月２５日 P R RS 陰性Ａ農場が ♀ ３０頭県外から導入入時に採血しELISAを実施したところ、30検体中 • １１月１３日 • １１月１４日採血ＥＬＩＳＡ 4検体で陽性反応、 1 検体で擬陽性反応が認められた。採血時に臨床症状は見られなかった。４検体陽性反応 11 月1 3日採血 NO 生年月日導入日 11 月1 4日検査 S/ P比値（陽性：0 .4以上）判定１１ 1 80 32 3 0. 42 陽性初動対応として農場に連絡・聞き取りを行っ２０ 1 80 33 1 0. 70 陽性２１ 1 80 33 1 1 81 02 5 0. 49 陽性た。臨床症状なし、農場自主検査で陰性を確認２４ 1 80 40 1 0. 39 - ３０ 1 80 40 5 0. 50 陽性しているとのことであったが、結論が出るまでＰＲＲＳ-ＥＬＩＳＡ隔離を指示した。当家保で保存していた過去の導入豚やと畜場採血の未検査材料でELIS Aを実施。過去導入豚 83 検体中2検体陽性、と畜場採血検体は 40検体陰性 • 導入豚８３頭（２頭陽性） • 出荷豚４０頭（全陰性） • RETEST３０頭（再現性あり）生年月日 NO 導入日であった。全ての陽性検体を病性鑑定室に IFA,R T-PCR検査を依頼した。経時的変化を見るため、最初採血から 2週間後３６ 180204 180830 前ロット計153頭１１月１５日検査 9月25日採血 6月26日採血 S/P比値判定 S/P比値判定 0.62 陽性３８ 171207 180530 前々前 1.17 ロットに同検体の再採血及び、同じ豚舎内の前回導入陽性豚の未移動豚７頭も併せて採血し、ELISAを実施ＩＦＡ＆ＲＴ-ＰＣＲした。IFA、 RT−PCR、 ELISA全て陰性であった。結果をまとめると、 ELISA陽性検体にウイルスＲＴ−PC R ＩＦＡ１ｓｔ２ｎｄ抗体価判定判定１１ < ×2 0 − − ２０検体不足 − − ２１ < ×2 0 − − ２４ < ×2 0 − − ３０ < ×2 0 − − ３６ < ×2 0 − − < ×2 0 − − NO 遺伝子検出なし、IFA抗体陰性、豚舎内に新たな広がりなし、ELISA陽性検体の２週間後血清は抗体が陰転した。以上のことから、ELISA陽性反応は、非特異的陽性反応と断定し、PRRS 陰性と判断した。３同居豚３８多角的原因追求上記非特異的ELISA陽性検体を用い「ワクチン履歴」「他疾病の抗体検査」「血清生化学的検査」「非特異的陽性反応の除去」を 4本柱に、多角的に原因追求を試みた。（１）ワクチン履歴ワクチン歴の調査右図の表のとおりのワクチンを接種していた。３回目の接種後直ぐに陸送をしているため、体内免疫反応によるストレスやトラック陸送にワクチン種２回目３回目着地豚丹毒 ( SE ) ストレス（８週齢）よる移動ストレスが考えられた。これらストレグレーサースと非特異反応物質に何らかの関わりがあるかＨＰｎ２価もしれないが、科学的分析手法を検索する必要１回目 9/4 9/25 10/23 （5 ヶ月齢） 10/25 9/25 10/23 陸送 9/4 （A P P）（5 ヶ月齢）ＡＲ（Ｃ） 9/4 9/25 10/23 （5 ヶ月齢）があると思われた。マイコバスター 9/4 ストレス 9/25 10/23 （5 ヶ月齢）（２）他疾病の抗体検査その他疾病の抗体検査右図のとおり行った。他のELISA 検査における非特異的陽性反応との相関はなく、本疾病の ◎ＡＤ抗原ラテックス全陰性 ◎ＨＣ-ＥＬＩＳＡ全陰性（非特異反応なし） ◎ＳＥ抗原ワクチンテイク ◎ＡＰＰ抗原ワクチンテイク ELISA抗原に特異的に反応する非特異物質であるということがわかった。 ※ＡＤＶ（Ｓ）‐ＥＬＩＳＡの非特異反応との関係相関なし（３）血清生化学的検査 ELISA陽性検体（右表白抜のNo.1∼10）と陰性検体（右表網掛の NO.11,20,21,24, 30,36,38 ）とグループ分けしてドライケムを用いて血清生化学検査を行った。 BUNに注目すると、陽性グループの方が陰性グループに比べて低い値で有生化学検査 No 1 TP A LB BUN 血清においては、有意差がなくなった。このこ GOT 5.2 1 2.9 1.1 2 7 .1 4.4 1 8.3 3 7 .9 4.7 3 4.4 4 7 .6 4.3 5 7 .7 4.5 6 6 .8 7 7 .3 8 9 10 ALP 41 20 6 1.4 44 21 8 2.3 8 36 29 3 1 1.7 0.9 32 17 5 1 8.4 1.4 1 24 19 4 3.5 8.7 0.7 17 83 4.8 1 0.3 1.0 28 22 8 7 .9 4.8 1 1.6 1.0 47 13 4 7 .3 8 .2 4.5 4.3 1 3.2 1 0.3 1.7 1.0 25 39 14 3 21 9 11 検体不足 20 意差（5%の危険率）があった。２週間後採血の CR E 8 .8 9.9 1.2 21 7 .5 4.6 9.6 1.5 42 19 8 24 8 .3 5.1 5.9 1.6 41 15 7 30 7 .7 4.3 1 2.6 1.6 28 22 5 36 9.5 1.5 38 1 0.4 1.1 とから、非特異的反応物質が体内に存在するときに BUNが低くなることが示唆された。個体ごとによるストレスの感受性や食欲（タンパク摂取）低下によるBUN低下、非特異反応物質の出現の３者に何らかの関わりがあるものと考えられた。４まとめ ELISA検査の非特異反応の原因は多岐にわたり、血液材料に起因するもの（交差反応等）、抗体や標識など材料に起因するもの、マイクロプレート等の採用している固相等の基本技術に起因するものが考えられるといわれている。この度は、血液材料に起因するものと想定して、多角的に原因追及を行った。ストレスとの関わりが最も関係があるように思われ、今後においても、このようなデータを積み上げていきたいと思う。