３）LC/MS/MSを用いた畜水産食品中の残留動物用医薬品迅速分析法の検討（第3報）－牛肉（筋肉）試料を用いた妥当性評価－濱田寛尚＊吉元秀和村川弘試料とした。はじめに２）添加回収試験畜水産食品中に残留する動物用医薬品等の検査については，厚生労働省が示している「食品中に残留する農試料10.0 g に混合標準液（表1に示す動物用医薬品187 薬等に関する試験法の妥当性評価ガイドライン」1）（以成分）を40及び 10 ng/gになるように添加し，LC/MS/MS 下「ガイドライン」という。）により，当該検査に使用法により，分析者3名でそれぞれ添加試料を1日2回，2日する試験法の妥当性を確認することが求められている。間分析した。前報 2）では，当所で開発したLC/MS/MSによる残留動物用医薬品の一斉分析法（以下「LC/MS/MS法」という。）結果及び考察について，豚肉（筋肉）及びブリを試料に用い，ガイド今回実施した妥当性評価試験の結果を表1に示す。動ラインに基づき，枝分かれ実験による妥当性評価試験を物用医薬品187成分中，ガイドラインに示されている目行ったところ，動物用医薬品179成分中目標値を満たし標値のうち，真度が適合した動物用医薬品成分数は添加たものは，豚筋肉試料では標準品添加濃度10 ng/gで144 濃度40 ng/gでは160成分，10 ng/gでは148成分であった。成分，50 ng/gで151成分，ブリ試料では10 ng/gで137成分，そのうち，精度も適合であった動物用医薬品成分は，添 50 ng/gで147成分であり，当該試験法が畜水産食品中の加濃度40 ng/gでは156成分，10 ng/gでは145成分であった。残留動物用医薬品多成分一斉迅速分析法として有用で目標値に適合した動物用医薬品成分の真度の平均値は，あることを報告した。両添加濃度とも約92 %程度であり，真度に大きな差があ今回，ガイドラインで示されている「妥当性評価試験る適合成分はほとんどなかった。しかしながら，不適合に用いる代表的な畜水産食品」である，牛肉（筋肉）試の動物用医薬品成分のうち，真度不適合の動物用医薬品料を用い，同様の妥当性評価試験を実施したので，その成分数は，添加濃度40 ng/gで27成分，10 ng/gで37成分で結果を報告する。あり，真度適合で精度不適合の動物用医薬品成分数は，添加濃度40 ng/gで4成分, 10 ng/gで2成分認められた。精実験度が不適合となった理由の一つとして，試料マトリックスのイオン化阻害による定量値のばらつき等が推測さ１試薬混合標準液：表1の＊を付した各標準を秤量，メタノれ，さらに，高濃度の添加量の場合はガイドラインで要ール又はアセトニトリル等に溶解し，100 mg/ℓ の混合標求される精度の目標値が低いため，両濃度における精度準原液を調製した。各混合標準原液と市販の動物用医薬が同程度であっても高濃度の添加量の場合に不適合が品混合液PL-1-3, PL-2-1（和光純薬工業(株)製）を混合し，多くなったと考えられた。メタノールで200 μg/ℓ に調整した。検量線は，既報 3),4) また，今回の妥当性評価試験では，前報 2)の豚肉（筋肉）及びブリ試料を用いた場合と比較し，適合した動物のとおりマトリックス一致検量線を用いた。用医薬品成分数は同等以上であった。これにより，本分析法の牛肉（筋肉）試料に対する残留動物用医薬品迅速２装置及び分析条件 2) 分析法としての妥当性が確認できた。前報のとおり。３試験方法参考資料１）厚生労働省 :厚生労働省医薬食品局食品安全部長通１）試料牛肉（筋肉）試料をフードプロセッサーで細切して， . 知，食安発1224第1号，平成22年12月24日. ２）村川弘，福島孝兵，飛野敏明 : 熊本県保健環境科＊現熊本県健康福祉部健康福祉政策課学研究所報, 39, 21-25 (2009) 119 表１　妥当性評価試験結果（試料：牛肉）試料： Name 牛肉 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 [Monobis(Trimethylammoniummethylen e Chloride)]-Alkyltoluene* 2-Acethylamino-5-Nitrothiazol Albendazole* Albendazole Metabolite* Azaperone* Avilamycin* Altrenogest* Ampicillin* Amprolium* Isoeugenol* Dipropylisocinchomeronate* Isoprothiolane* Isometamidium* Ivermectin* Ethopabate Eprinomectin B1a* Efrotomycin* Epoxiconazol* Emamectin B1a Emamectin B1a (8, 9-Z)* Erythromycin* Didecyldimethylammonium* Enrofloxacin* Ciprofloxacin* Oxacillin* Oxabetrinil* Oxyclozanide* Oxytetracycline* Chlorotetracycline* Tetracycline* Oxibendazole* Oxolinic Acid* Ofloxacin* Olaquindox* Orbifloxacin* Ormetoprim* Oleandomycin* Carazolol* Carprofen* Xylazine Kitasamycin* Clenbuterol Cloxacillin* Cloquintcet Mexyl* Closantel* Clostebol* Clopidol* Clorslon Chlorhexidine* Chlormadinone* Ketoprofen* Trenbolone Melengestrol Acetate Sarafloxacin* Salinomycin* Diaveridine* Diclazuril* Dichlorvos* Dicyclanil* Dinitlmide* Dibutylsuccinate* Difloxacin* Josamycin* Cyromazin* Spiramycin* Neospiramycin* 添加濃度：試料中 40 ng/g 回収率併行精度室内精度平均値判定 RSD% RSD% (%) 添加濃度：試料中 10 ng/g 両濃度回収率併行精度室内精度平均値判定とも適合 RSD% RSD% (%) 83.7 6.1 9.0 ○ 91.9 11.9 16.5 ○ ◎ 95.8 91.8 89.1 95.1 80.8 90.3 3.8 3.8 10.9 4.3 7.7 5.7 6.2 3.8 14.5 5.3 7.7 5.7 ○ ○ ○ ○ ○ ○ 93.1 89.2 79.4 95.9 82.6 86.6 1.6 2.4 7.6 6.2 23.3 8.3 4.6 3.2 10.0 8.7 23.3 11.6 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ 132.4 102.7 84.2 89.1 73.9 88.9 101.9 100.2 97.0 94.6 94.4 92.3 99.2 79.2 129.4 155.8 85.0 88.6 78.5 93.9 98.1 111.3 99.3 97.7 142.4 82.5 104.9 98.5 99.5 92.8 85.6 91.6 86.5 97.4 100.0 78.7 83.1 93.4 98.6 73.1 86.0 93.0 91.3 95.7 89.8 128.1 70.9 92.6 89.7 96.1 108.9 92.0 58.9 114.3 91.1 88.3 110.4 147.4 10.2 7.8 3.2 2.8 16.8 4.6 3.0 3.2 3.9 2.6 2.4 3.6 3.0 5.0 7.3 4.0 11.3 2.6 5.3 3.1 3.5 3.1 3.4 3.5 8.0 10.1 5.5 3.6 4.7 3.1 2.5 2.6 8.7 9.3 4.1 3.1 5.2 3.9 3.6 8.3 3.8 3.7 3.9 3.4 2.3 4.8 3.1 9.0 3.3 3.2 6.7 4.8 1.6 5.4 2.3 4.4 5.7 6.7 10.2 7.8 4.6 3.5 57.2 7.3 3.0 5.4 10.2 3.1 3.6 3.6 4.0 6.8 7.3 5.0 11.3 3.4 10.1 11.0 16.9 14.6 3.9 3.9 8.2 11.3 6.6 3.6 4.7 4.3 3.6 2.8 8.7 11.9 7.3 3.3 6.2 4.3 5.9 8.3 4.1 3.7 3.9 3.4 5.4 6.1 4.4 12.3 6.6 3.3 14.7 4.8 6.1 7.5 2.7 4.9 7.5 6.9 ○ ○ ○ 219.3 117.4 82.8 86.8 8.3 14.7 5.6 2.8 15.6 14.7 5.6 2.8 ○ ○ ○ ◎ ◎ ◎ 80.8 99.1 100.2 101.6 97.1 94.6 90.5 95.9 79.8 178.4 319.0 89.0 89.6 79.6 126.6 139.0 143.8 94.9 99.5 241.4 108.9 124.6 96.9 101.0 94.7 82.4 91.7 91.5 90.7 97.8 75.9 88.1 87.7 91.3 90.1 8.3 2.6 13.8 20.5 3.4 3.3 1.7 3.1 4.6 3.9 5.7 5.3 3.1 6.7 3.3 7.3 4.1 4.1 5.2 3.5 16.7 5.9 4.7 4.6 6.8 5.0 6.2 10.5 8.3 20.0 2.8 11.2 3.5 7.6 11.0 14.7 3.5 13.8 31.5 3.7 3.5 2.6 3.1 4.6 4.4 10.7 10.8 3.1 11.6 3.3 7.3 4.1 4.4 5.2 4.7 29.4 8.8 7.9 4.6 8.5 8.1 7.4 10.5 16.9 20.0 3.6 11.2 4.6 7.9 11.0 ○ ○ ○ ◎ ◎ ◎ ○ ○ ○ ○ ○ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ○ ○ ○ ◎ ◎ ◎ ○ ○ ◎ ◎ ○ ◎ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ 93.9 94.0 96.7 92.7 220.0 68.4 91.4 86.6 94.1 74.8 89.8 56.4 153.6 90.6 97.1 194.0 298.2 5.5 4.6 4.7 6.0 5.5 3.2 17.2 7.8 4.4 14.5 9.1 4.5 7.5 3.3 6.1 7.1 4.4 6.5 5.6 6.2 8.7 5.5 4.9 17.5 10.0 4.4 14.5 10.3 6.6 7.5 3.4 8.0 9.0 5.3 ○ ○ ○ ○ ◎ ◎ ◎ ◎ ○ ○ ○ ○ ○ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ○ ○ ◎ ◎ 120 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ 表１　妥当性評価試験結果（試料：牛肉）試料： Name 牛肉 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 Spectinomycin* Sulfaethoxypyridazine* Sulfaquinoxaline Sulfachlorpyridazine Sulfadiazine* Sulfadimidine Sulfadimethoxine Sulfacetamide Sulfathiazole Sulfadoxine Sulfatroxazole* Sulfanitran Sulfapyridine Sulfabromorethazine* Sulfabenzamide* Sulfamethoxazole Sulfamethoxypyridazine Sulfamerazine Sulfamoildapsone* Sulfamonomethoxine Sulfisozole* Zeranol Semduramicin* Tylosin* Danofloxacin Thiabendazole 5-Hydroxythiabendazole* Tiamulin Thiamphenicol Tilmicosin Dexamethasone Decoquinate* Temephos Doramectin* Triclabendazole* Triclabendazole Sulphone* Trichlorhon Tribromsalan* Tripelennamine* Trimethoprim Toltrazuril* Tolfenamicacid* Nicarbazin* Nafcillin* Narasin* Nalidixic Acid* Nitarson* Nitroxynil* Novobiocin* Norfloxacin* Virginiamycin* Parbendazole* Halofuginone Lactate* Bithionol* Hydrocortisone Pyrantel* Pyrimethamine Famphur Fenitrothion* Phenoxymethylpenicillin* Fenobucarb Praziquantel* Flamprop Methyl* Prifinium* Flunixin* Flubendazol* Flumequine* Prednisolone 添加濃度：試料中 40 ng/g 回収率併行精度室内精度平均値判定 RSD% RSD% (%) 96.8 97.4 92.8 90.6 97.0 98.3 92.4 96.5 102.4 99.1 94.0 96.0 95.6 94.7 100.7 103.3 95.5 103.2 83.8 104.2 95.5 97.4 94.7 184.5 97.5 89.4 95.2 101.5 126.5 91.4 78.3 81.2 91.7 90.0 83.8 97.6 75.9 99.3 87.0 92.4 85.1 84.4 90.1 67.2 95.9 86.7 88.1 85.8 176.0 93.1 88.7 88.8 71.8 99.9 82.6 87.2 97.2 89.6 5.3 4.6 9.6 3.6 9.2 3.2 4.6 8.5 4.6 4.8 11.6 4.5 4.5 3.6 5.3 5.7 5.4 4.5 20.1 4.3 8.9 2.2 5.6 3.5 5.1 6.4 3.9 6.3 19.4 2.9 3.8 5.0 4.2 4.4 5.4 18.8 9.7 4.2 14.9 3.8 4.8 6.3 2.9 3.6 7.7 1.9 2.9 5.0 6.2 2.6 5.4 5.4 5.7 7.9 8.0 6.0 2.9 9.1 5.3 6.0 10.4 4.4 9.2 3.5 8.2 8.5 5.4 4.8 11.6 5.0 5.4 4.3 6.1 6.2 5.4 6.1 24.7 4.4 11.5 3.1 5.6 7.7 5.5 7.5 4.3 8.1 19.4 3.1 4.5 5.0 4.2 5.0 5.4 21.4 10.8 4.4 19.8 6.5 7.0 6.3 7.3 6.6 7.7 3.9 5.3 5.0 11.3 4.6 6.0 7.5 8.2 7.9 14.7 6.0 2.9 12.3 125.1 97.4 94.0 98.5 92.3 97.7 95.5 96.2 5.5 1.9 2.6 3.6 3.1 8.3 3.3 4.6 14.9 3.2 3.0 3.9 3.3 8.3 3.3 4.6 121 添加濃度：試料中 10 ng/g 両濃度回収率併行精度室内精度平均値判定とも適合 RSD% RSD% (%) 3.9 5.0 7.6 5.3 8.0 3.2 4.4 6.2 4.4 3.4 14.8 6.0 7.6 1.7 7.4 7.3 8.4 9.5 12.2 7.4 11.8 3.4 8.1 2.7 3.2 9.7 2.2 16.5 4.0 6.4 7.9 6.9 9.3 4.0 6.4 6.2 4.4 4.6 14.8 6.9 8.0 1.9 8.3 7.3 9.0 9.9 12.2 9.1 22.4 3.9 14.7 4.1 3.2 9.7 3.1 27.6 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ○ ○ ○ ○ 92.7 91.7 94.4 94.3 93.2 95.6 93.6 93.7 96.8 98.5 96.2 95.3 84.1 94.8 97.1 101.5 94.2 99.2 89.7 104.0 99.3 94.7 102.5 363.9 98.3 87.9 96.2 88.4 ○ ○ ○ ○ ◎ ◎ ◎ ◎ ○ ○ ○ ○ ○ ○ 91.0 75.8 84.3 93.6 87.9 85.5 6.4 2.7 5.6 8.4 5.2 15.3 6.4 2.7 5.6 11.2 5.2 30.0 ○ ○ ○ ○ ○ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ 13.6 3.9 17.7 12.4 11.1 5.4 2.7 6.9 3.3 1.4 7.9 5.4 4.7 3.3 3.1 4.3 4.7 8.2 15.5 5.4 4.7 14.6 13.6 4.2 38.4 16.6 14.9 5.4 10.3 7.2 4.1 2.4 7.9 8.8 9.5 4.8 3.1 4.4 7.1 10.9 30.2 10.0 4.7 16.9 ○ ○ ◎ ◎ ○ ○ ○ ○ ◎ ◎ ◎ ◎ ○ ○ ○ ○ ◎ ◎ ◎ ◎ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ 70.4 100.4 67.4 86.4 84.0 85.2 92.0 65.2 89.2 83.8 80.7 98.7 363.2 92.5 87.9 99.7 68.5 112.5 93.2 80.1 97.8 84.7 ○ ○ ○ ◎ ◎ ◎ ○ ◎ ○ ○ ○ ◎ ◎ ◎ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ 120.6 94.2 92.1 102.3 88.1 94.0 90.3 86.2 7.1 2.1 2.0 4.7 4.5 3.0 3.7 10.6 10.7 2.7 3.0 7.9 4.7 4.2 3.7 16.3 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ◎ ◎ ◎ ◎ 表１　妥当性評価試験結果（試料：牛肉）添加濃度：試料中 40 ng/g 回収率併行精度室内精度平均値判定 RSD% RSD% (%) 94.7 3.5 4.4 ○ 85.1 3.5 3.5 ○ 86.5 2.8 4.9 ○ 99.8 1.9 3.3 ○ 100.3 5.8 6.7 ○ 86.9 7.0 7.0 ○ 95.0 3.4 4.5 ○ 7.1 7.3 16.7 試料： Name 牛肉 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 Brotizolam* Propaquizafop* Propetamphos* Propxur* Florfenicol Vedaprofen* Betamethasone* Permethrin* Benzylpenicillin* Benzocaine* Boscalid* Maduramicin* Mafoprazine* Marbofloxacin* Miloxacin* Mirosamycin* Methylprednisolone* Metoclopramide* Mefenpyr Diethyl* Mebendazol* Meloxicam* Menbutone* Moxidectin* Monensin Morantel* Lasalocid* Rifaximin* Lincomycin Revamisole* Robenidine* Warfarin* Glycyrrhizic Acid* Chloramphenicol* Chlorpromazine* Dimetrildazole* Nitrofurazone* Furazolidone* Nitrofurantoin* Furaltadone* Metoronidazole* Malachitegreen* Malachitegreen* Oxfendazole Sulfone* Oxfendazole* Febantel* Fenbendazole* Canthaxanthin* Pirlimycin* Ractopamine* Sulfisoxazole* Sulfisomidine* Difurazone* Piromidic acid* 101.0 94.2 83.2 96.3 154.3 81.7 94.1 92.9 98.8 87.2 96.8 86.2 92.8 76.1 87.1 94.5 75.6 101.0 93.4 98.3 70.4 94.0 21.1 98.0 69.8 101.6 111.4 2.9 1.7 2.8 4.1 7.7 4.7 2.7 3.0 5.7 2.3 5.5 3.0 2.1 6.5 2.0 4.9 2.9 3.2 7.3 3.8 3.8 2.3 12.5 2.9 4.0 3.3 18.2 2.9 3.8 5.3 4.1 7.8 5.8 3.7 4.6 7.4 3.3 5.6 5.1 4.8 6.5 4.1 6.0 4.8 3.6 8.3 3.8 4.7 3.7 26.5 4.8 6.9 3.9 27.8 ○ ○ ○ ○ 98.3 34.0 31.3 95.5 97.9 95.0 90.6 2.3 84.2 98.3 102.3 95.5 64.3 98.1 3.7 3.9 4.7 3.9 1.3 2.1 2.1 16.1 5.0 7.9 4.2 10.2 9.6 1.8 3.7 6.3 7.1 4.1 2.6 3.3 4.3 38.0 5.3 7.9 4.8 12.0 9.6 3.0 ○ 合計 122 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ 156 添加濃度：試料中 10 ng/g 両濃度回収率併行精度室内精度平均値判定とも適合 RSD% RSD% (%) 96.8 4.0 5.3 ○ ◎ 82.3 2.8 3.1 ○ ◎ 86.5 4.7 4.7 ○ ◎ 97.3 3.5 3.6 ○ ◎ 96.8 6.1 8.8 ○ ◎ 99.8 8.6 9.9 ○ ◎ 98.5 5.8 6.4 ○ ◎ 11.3 17.3 17.3 99.0 92.6 80.1 93.8 264.9 88.0 95.6 96.5 93.4 84.0 94.0 83.3 92.6 81.5 84.1 96.9 72.6 110.7 109.3 99.1 70.8 92.5 1.8 5.3 2.2 7.8 4.2 5.0 3.1 8.3 4.8 3.8 4.7 6.1 6.7 8.1 5.5 7.6 4.4 3.1 6.3 3.1 7.5 3.8 3.3 5.5 4.1 7.8 6.4 10.7 3.7 8.3 5.1 3.8 4.7 6.6 7.5 12.8 5.6 13.2 5.9 5.5 17.0 3.7 10.9 4.1 ○ ○ ○ ○ ◎ ◎ ◎ ◎ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ 103.8 69.7 106.0 8.9 2.7 4.0 10.7 4.3 4.5 ○ ◎ ○ ◎ 96.3 34.3 28.9 94.0 93.9 92.8 89.4 7.4 6.1 3.9 5.6 4.0 3.0 5.2 7.4 8.8 8.6 5.6 4.0 3.0 7.3 ○ ◎ ○ ○ ○ ○ ◎ ◎ ◎ ◎ 79.9 94.0 97.2 90.8 71.3 94.7 4.1 17.1 4.8 11.6 15.6 4.7 5.1 17.1 4.8 15.0 15.6 6.8 ○ ○ ○ ○ ○ ○ 145 ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ 143