CD application data 新しい CD 分析情報 210-CD-0025 Date 2015/03/26 キャピラリセルを用いたタンパク質の一滴熱変性解析はじめにタンパク質の CD 測定においては二次構造解析と熱変性解析がよく利用されています。通常の CD 測定では光路長 1mm の角型セルなどが用いられていますが、この場合 200-250 μL のサンプル量が必要になります。しかしながら非常に微量のサンプルしか得られないケースでは、さらに極微量での測定方法が求められていました。日本分光では 10μL 以下のサンプル量で温度変化測定が可能なキャピラリセルとキャピラリジャケットをラインナップしています。これにより極微量でのタンパク質の熱変性解析を可能にします。また 2-10μL のサンプル量で CD スペクトル測定が可能なマイクロサンプリングディスク (260-CD-0011, 260-CD-0019 にて既報) をラインナップしており、これらを用いることで極微量でのタンパク質の二次構造解析と熱変性解析が可能になります。ここでは J-1500 円二色性分散計、キャピラリジャケット、キャピラリセルを用いたリボヌクレアーゼ A の熱変性解析を紹介します。＜Keywords＞微量測定, キャピラリジャケット, 温度変化測定＜サンプル調製＞ 1mg/mL のリボヌクレアーゼ A 水溶液を光路長 0.5mm のキャピラリセルに毛細管現象で吸い上げた後に、シール材で端をふさぎキャピラリジャケットに挿入しました。比較として 0.5mg/mL のリボヌクレアーゼ A 水溶液を光路長 1mm の角型セルに入れたものを測定しました。＜測定手順の紹介＞キャピラリセルにサンプル*を吸い上げるキャピラリジャケットに挿入シール材で端をふさぐ水冷ペルチェセルホルダにキャピラリジャケットをセット *写真の溶液は測定に用いたサンプルではありません。本社・工場 192-8537 東京都八王子市石川町 2967-5 TEL 042(646)4111 代表 FAX 042(646)4120 東京 03(3294)0341／北海道 011(741)5285／北日本 022(748)1040／西東京 042(646)7001／筑波 029(857)5721／神奈川 045(989)1711／名古屋 052(452)2671／大阪 06(6312)9173／広島 082(238)4011／九州 092(588)1931 ＜測定条件＞測定装置: 測定波長: レスポンス: 昇温速度: J-1500 円二色性分散計 PTC-510 水冷ペルチェセルホルダ CTU-100 恒温水循環ユニットキャピラリジャケットキャピラリセル角型 CD 石英セル栓付 1×10 セルスペーサデータ取込間隔: バンド幅: 222 nm 8秒 1℃/min シール材 0.2 ℃ 1 nm ＜測定結果＞キャピラリセルと角型セルで測定したリボヌクレアーゼ A の温度変化データを Fig.1 に示します。これらの温度変化データを[JWTDA-519 熱変性解析プログラム]を用いて解析したところ変性温度 (Tm) はキャピラリセルでは 59.4℃、角型セルでは 59.7℃と良く一致し、キャピラリセルを用いた微量測定でも高精度の測定が可能なことが確認できました。 -15 -20 CD [mdeg] -25 -30 20 40 60 80 85 Temperature [℃] Fig.1 リボヌクレアーゼ A の温度変化データキャピラリセル 1mm 角型セル本社・工場 192-8537 東京都八王子市石川町 2967-5 TEL 042(646)4111 代表 FAX 042(646)4120 東京 03(3294)0341／北海道 011(741)5285／北日本 022(748)1040／西東京 042(646)7001／筑波 029(857)5721／神奈川 045(989)1711／名古屋 052(452)2671／大阪 06(6312)9173／広島 082(238)4011／九州 092(588)1931