OnePCR HiFi.ai

OnePCRTM HiFi
Cat No. MB205-0100
Size: 100 Reaction ( 2 x 1.25ml )
Storage: 室温・ 3 カ月
4℃（冷蔵）・ 6 ヶ月
-20℃（冷凍）・ 1 年
輸送温度： 4℃（冷蔵輸送）
メモ： OnePCRTM HiFi は光に敏感に反応するため、遮光保存でお願いいたします。
製品概説
OnePCRTM HiFi は ready-to use タイプの PCR 用混合試薬です。本製品にプライマー・テンプレート・滅菌水を加えて
いただくだけで簡単に PCR 反応の準備が完了いたします。本製品は、 GDP-HiFi DNA ポリメラーゼ・ PCR バッファー・
dNTP ・ローディングダイ・ DNA 蛍光染色試薬を含んだプレミックス試薬となっております。
また、 OnePCRTM HiFi は蛍光染色試薬を含んでおり DNA 電気泳動後そのまま、 BLooK LED トランスイルミネターや
UV トランスイルミネターなどで直接検出していただけます。最終的な反応ボリュームのおよそ 50％のプライマー・テンプレート
などを加えるため、 OnePCRTM HiFi 混合液は２X 濃度で調整されております。本製品は、反応ボリューム・５０µｌで十分に
増幅反応が可能になっております。
OnePCRTM HiFi に使用されている GDP-HiFi DNA ポリメラーゼは強い校正活性を示し、また優れた処理能力と伸長性を示します。
その伸長性は、通常の Taq DNA ポリメラーゼのおよそ 2 倍にあり伸長スピードは 106 ～ 138bases/sec になります。
本製品は平滑末端のＰＣＲ産物を合成いたします。
図 .1a ：蛍光色素の蛍光励起スペクトル
図 .1b ：蛍光色素の蛍光スペクトル
はじめに
➢DNA 染色を必要としません。
➢PCR 試薬調整のための分注を最小限にいたします。
➢直接アガロースゲルへ、ローディング後分析していただけます。
➢高感度　－　臭化エチジウム（EtBr）に比べ、高感度。
➢迅速さ　－　PCR 産物の脱色の必要はありません。
➢広い互換性　－　青色光または、 UV トランスイルミネーターどちらでもシグナルを検出いただけます。
➢ＧＣリッチなサンプルの増幅に効果的
➢強い３’－５’ エキソヌクレアーゼ活性を示します。
トラッキングダイ
➢ブロモフェノール・ブルー，キシレン・シアノール FF
プロトコール
OnePCRTM HiFi 標準 PCR プロトコール
１： 50µｌ反応系・ご使用前にアイスラック上の 0.2ｍｌＰＣＲチューブにそれぞれを、分注してください。
分注量（µｌ）
最終濃度
OnePCRTM HiFi ２５
１Ｘ
フォワードプライマー， 5 ～ 10µ ㏖
Variable
0.1 ～ 0.2µＭ
リバースプライマー ,　5 ～ 10µ ㏖
Variable
0.1 ～ 0.2µＭ
ＤＮＡ　テンプレート
Variable
4pg ～ 500ｎｇ
トータル
５０
２：軽く撹拌後、必要に応じて遠心をして壁についた反応液を落としてください。
チューブにキャップをしてサーマルサイクラーにセットしてください。
３：サーマルサイクラーは、 25 ～ 35 サイクルで以下の通りで設定してください。（標準プロトコル）
Initail Denature　2 ～ 5 分間　94℃
Denature
20 ～ 40 秒間 94℃
Annealing　1 分間
ご使用のプライマーに合わせた温度
30 サイクル
Extension
2 分間
72℃
Final extension
5 分間
72℃
メモ：増幅の最適条件は、ご使用になるサーマルサイクラーやプライマーによって変化いたします。必要に応じて
ご使用になるプライマー・テンプレート・サーマルサイクラーに合ったサイクル条件最適化を行ってください。
４：ＰＣＲ反応終了後、ＰＣＲ産物を直接電気泳動してください。
５：ＵＶまたは青色光トランスイルミネーター用い、ゲルの観察を行ってください。
メモ：ＤＮＡの濃度が４pg 以下の場合、電気泳動の移動度がシフトする場合がございます。この問題が発生した場合は
今一度実験手順を参照していただくか、ＰＣＲ＆ゲル精製キットなどを使用し蛍光色素を除去していただき、電気泳動後
再度染色操作を Novel Green （LD002-0500) などでしていただくことを推奨いたします。
蛍光色素の除去
１：蛍光色素入りＰＣＲ産物に、最終濃度が 100ｍＭになるように塩化ナトリウム溶液を加え 95 ～ 100％エタノールを
2.5 倍量加えてください。（例： 50µl ＰＣＲサンプル + 50µl 200mM NaCl + 250µl 95 ～ 100% エタノール）
２：氷の上で 20 分間インキュベートしてください。
３： 4℃で最低１0 分間遠心分離してください。
４：上清を除去し、１ｍｌの 70％エタノールで洗浄してください。
５：エタノールを乾燥させ、ＴＥバッファーに溶解してください。
注意
１．本製品御使用時には、白衣・手袋など安全保全製品をご使用ください。
２．本製品は、研究用試薬となります。動物やヒトなどへの治療・検査目的にはご使用いただけません。

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