OnePCRTM HiFi Cat No. MB205-0100 Size: 100 Reaction ( 2 x 1.25ml ) Storage: 室温 ・ 3 カ月 4℃(冷蔵) ・ 6 ヶ月 -20℃(冷凍) ・ 1 年 輸送温度 : 4℃(冷蔵輸送) メモ : OnePCRTM HiFi は光に敏感に反応するため、 遮光保存でお願いいたします。 製品概説 OnePCRTM HiFi は ready-to use タイプの PCR 用混合試薬です。 本製品にプライマー ・ テンプレート ・ 滅菌水を加えて いただくだけで簡単に PCR 反応の準備が完了いたします。 本製品は、 GDP-HiFi DNA ポリメラーゼ ・ PCR バッファー ・ dNTP ・ ローディングダイ ・ DNA 蛍光染色試薬を含んだプレミックス試薬となっております。 また、 OnePCRTM HiFi は蛍光染色試薬を含んでおり DNA 電気泳動後そのまま、 BLooK LED トランスイルミネターや UV トランスイルミネターなどで直接検出していただけます。 最終的な反応ボリュームのおよそ 50%のプライマー ・ テンプレート などを加えるため、 OnePCRTM HiFi 混合液は2X 濃度で調整されております。 本製品は、 反応ボリューム ・ 50µlで十分に 増幅反応が可能になっております。 OnePCRTM HiFi に使用されている GDP-HiFi DNA ポリメラーゼは強い校正活性を示し、 また優れた処理能力と伸長性を示します。 その伸長性は、 通常の Taq DNA ポリメラーゼのおよそ 2 倍にあり伸長スピードは 106 ~ 138bases/sec になります。 本製品は平滑末端のPCR産物を合成いたします。 図 .1a : 蛍光色素の蛍光励起スペクトル 図 .1b : 蛍光色素の蛍光スペクトル はじめに ➢DNA 染色を必要としません。 ➢PCR 試薬調整のための分注を最小限にいたします。 ➢直接アガロースゲルへ、 ローディング後分析していただけます。 ➢高感度 - 臭化エチジウム (EtBr) に比べ、 高感度。 ➢迅速さ - PCR 産物の脱色の必要はありません。 ➢広い互換性 - 青色光または、 UV トランスイルミネーターどちらでもシグナルを検出いただけます。 ➢GCリッチなサンプルの増幅に効果的 ➢強い3’-5’ エキソヌクレアーゼ活性を示します。 トラッキングダイ ➢ブロモフェノール ・ ブルー, キシレン ・ シアノール FF プロトコール OnePCRTM HiFi 標準 PCR プロトコール 1 : 50µl反応系 ・ ご使用前にアイスラック上の 0.2mlPCRチューブにそれぞれを、 分注してください。 分注量 (µl) 最終濃度 OnePCRTM HiFi 25 1X フォワードプライマー, 5 ~ 10µ ㏖ Variable 0.1 ~ 0.2µM リバースプライマー , 5 ~ 10µ ㏖ Variable 0.1 ~ 0.2µM DNA テンプレート Variable 4pg ~ 500ng トータル 50 2 : 軽く撹拌後、 必要に応じて遠心をして壁についた反応液を落としてください。 チューブにキャップをしてサーマルサイクラーにセットしてください。 3 : サーマルサイクラーは、 25 ~ 35 サイクルで以下の通りで設定してください。 (標準プロトコル) Initail Denature 2 ~ 5 分間 94℃ Denature 20 ~ 40 秒間 94℃ Annealing 1 分間 ご使用のプライマーに合わせた温度 30 サイクル Extension 2 分間 72℃ Final extension 5 分間 72℃ メモ : 増幅の最適条件は、 ご使用になるサーマルサイクラーやプライマーによって変化いたします。 必要に応じて ご使用になるプライマー ・ テンプレート ・ サーマルサイクラーに合ったサイクル条件最適化を行ってください。 4 :PCR反応終了後、PCR産物を直接電気泳動してください。 5 :UVまたは青色光トランスイルミネーター用い、 ゲルの観察を行ってください。 メモ :DNAの濃度が4pg 以下の場合、 電気泳動の移動度がシフトする場合がございます。 この問題が発生した場合は 今一度実験手順を参照していただくか、PCR&ゲル精製キットなどを使用し蛍光色素を除去していただき、 電気泳動後 再度染色操作を Novel Green (LD002-0500) などでしていただくことを推奨いたします。 蛍光色素の除去 1 : 蛍光色素入りPCR産物に、 最終濃度が 100mMになるように塩化ナトリウム溶液を加え 95 ~ 100%エタノールを 2.5 倍量加えてください。 (例 : 50µl PCRサンプル + 50µl 200mM NaCl + 250µl 95 ~ 100% エタノール) 2 : 氷の上で 20 分間インキュベートしてください。 3 : 4℃で最低10 分間遠心分離してください。 4 : 上清を除去し、 1mlの 70%エタノールで洗浄してください。 5 : エタノールを乾燥させ、TEバッファーに溶解してください。 注意 1. 本製品御使用時には、 白衣 ・ 手袋など安全保全製品をご使用ください。 2. 本製品は、 研究用試薬となります。 動物やヒトなどへの治療 ・ 検査目的にはご使用いただけません。
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