OnePCRTM Cat No. MB203-0100 Size: 100 Reaction ( 2 x 1.25ml ) Storage: 室温・ 3 カ月 4℃（冷蔵）・ 6 ヶ月 -20℃（冷凍）・ 1 年輸送温度： 4℃（冷蔵輸送）メモ： OnePCRTM は光に敏感に反応するため、遮光保存でお願いいたします。製品概説 OnePCRTM は ready-to use タイプの PCR 用混合試薬です。本製品にプライマー・テンプレート・滅菌水を加えていただくだけで簡単に PCR 反応の準備が完了いたします。本製品は、 Taq DNA ポリメラーゼ・ PCR バッファー・ dNTP ・ローディングダイ・ DNA 蛍光染色試薬を含んだプレミックス試薬となっております。 OnePCRTM には Thermus aquaticus DNA ポリメラーゼ遺伝子由来で、 E.coli. から精製された酵素が混合されております。この酵素は５’－３’ DNA ポリメラーゼで５’－３’ エキソヌクレアーゼ活性を持っておりますが、３’－５’ エキソヌクレアーゼ活性は持っておりません。また、 OnePCRTM は蛍光染色試薬を含んでおり DNA 電気泳動後そのまま、 BLooK LED トランスイルミネターや UV トランスイルミネターなどで直接検出していただけます。最終的な反応ボリュームのおよそ 50％のプライマー・テンプレートなどを加えるため、 OnePCRTM 混合液は２X 濃度で調整されております。本製品は、反応ボリューム・５０µｌで十分に増幅反応が可能になっております。図 .1a ：蛍光色素の蛍光励起スペクトル図 .1b ：蛍光色素の蛍光スペクトルはじめに ➢DNA 染色を必要としません。 ➢PCR 試薬調整のための分注を最小限にいたします。 ➢直接アガロースゲルへ、ローディング後分析していただけます。 ➢高感度　－　臭化エチジウム（EtBr）に比べ、高感度。 ➢迅速さ　－　PCR 産物の脱色の必要はありません。 ➢広い互換性　－　青色光または、 UV トランスイルミネーターどちらでもシグナルを検出いただけます。トラッキングダイ ➢ブロモフェノール・ブルー，キシレン・シアノール FF プロトコール OnePCRTM 標準 PCR プロトコール１： 50µｌ反応系・ご使用前にアイスラック上の 0.2ｍｌＰＣＲチューブにそれぞれを、分注してください。分注量（µｌ） OnePCRTM ２５フォワードプライマー， 5 ～ 10µ ㏖　１リバースプライマー ,　5 ～ 10µ ㏖　１ＤＮＡ　テンプレート　１ ddH2O を加えてください　２２ } Total 50µｌ２：軽く撹拌後、必要に応じて遠心をして壁についた反応液を落としてください。チューブにキャップをしてサーマルサイクラーにセットしてください。３：サーマルサイクラーは、 25 ～ 35 サイクルで以下の通りで設定してください。（標準プロトコル） Initail Denature　2 ～ 5 分間　94℃ Denature Annealing　20 ～ 40 秒間 94℃ Extension Final extension 1 分間ご使用のプライマーに合わせた温度 2 分間 72℃ 5 分間 72℃ 30 サイクルメモ：増幅の最適条件は、ご使用になるサーマルサイクラーやプライマーによって変化いたします。必要に応じてご使用になるプライマー・テンプレート・サーマルサイクラーに合ったサイクル条件最適化を行ってください。４：ＰＣＲ反応終了後、ＰＣＲ産物を直接電気泳動してください。５：ＵＶまたは青色光トランスイルミネーター用い、ゲルの観察を行ってください。蛍光色素の除去１：蛍光色素入りＰＣＲ産物に、最終濃度が 100ｍＭになるように塩化ナトリウム溶液を加え 95 ～ 100％エタノールを 2.5 倍量加えてください。（例： 50µl ＰＣＲサンプル + 50µl 200mM NaCl + 250µl 95 ～ 100% エタノール）２：氷の上で 20 分間インキュベートしてください。３： 4℃で最低１0 分間遠心分離してください。４：上清を除去し、１ｍｌの 70％エタノールで洗浄してください。５：エタノールを乾燥させ、ＴＥバッファーに溶解してください。関連製品 Cat. No. 製品名 GDXBK-001 BLooK LEDトランスイルミネーター GDXLD001-1000 Novel Juice GDXLD003-1000 Novel Green Plus GDXMB205-0100 OnePCRTM HiFi GDXMB206-0100 OnePCRTM HotStar GDXDM101-0100 OneMARK 100 GDXDM110-0100 OneMARK B 容量 1台 1ml 500µｌ(20,000X in DMSO) 100回 100回 600µｌ 600µｌ注意１．本製品御使用時には、白衣・手袋など安全保全製品をご使用ください。２．本製品は、研究用試薬となります。動物やヒトなどへの治療・検査にはご使用いただけません。