様式１論文審査の結果の要旨および担当者学位申請者論文担当者持田菜穂子主査小川啓恭副査越久仁敬副査玉置知子 Live births from isolated primary/early secondary follicles Following a multistep culture without organ culture in mice. 学位論文名 (マルチステップ培養法によるマウス 1 次および初期 2 次卵胞からの産仔の誕生) 論文審査の結果の要旨卵巣には生殖細胞が豊富に存在するが、女性が生殖年齢にある間に排卵に至るのは、そのごくわずかにすぎない。一部の不妊症女性や、若年にしてがん治療を経験する女性の中には、生殖年齢にもかかわらず卵巣機能が低下し、難治性の排卵障害による不妊症に陥ることがある。このような場合に、卵巣から卵子が枯渇する前に出来る限り初期発育卵胞の段階で採取し、卵母細胞を体外で発育させ、成熟卵子に成長させ、引き続き体外受精により受精卵を作出できれば、妊孕性の温存ならびに新たな不妊治療法の開発に繋がる。申請者は、ヒトに応用するまでの基礎研究として、マウスの卵巣から初期発育卵胞を単離し、これを体外発育・体外成熟させる培養システムの開発を行った。具体的には 6 日齢マウス卵巣から 1 次および初期 2 次卵胞を単離し、マルチステップ培養法と名付けた合計 17 日間の体外培養を行った。第 1 ステップでは卵胞をコラーゲンゲルに包埋し、微小滴培地中で 9 日間培養を行い、続いて第 2 ステップではコラーゲンコート膜に移して 8 日間培養を行った。その後、体外成熟、体外受精・胚移植を実施した。卵胞径により採取した卵胞を 3 群に分けて培養したところ、培養開始時の卵胞の直径が大きいほど、卵胞発育率は有意に高率であった。ただし採取した卵胞の直径にかかわらず、発育した卵胞の成熟率には差がなかった。得られた成熟卵子の受精率ならびに胚発生率にも差を認めなかった。続いて得られた胚を偽妊娠マウスに移植して産仔の誕生にも成功し、性成熟後の妊孕性も確認できている。このように申請者はコラーゲンゲルとコラーゲンコート膜を段階的に用いるマルチステップ法を開発し、マウス初期発育卵胞を効率よく発育誘導できることを示した。