選択培地による基質特異性拡張型βラクタマーゼ産生大腸菌の検出方法

2014 年度
応用生物学部卒業論文概要
論文題目
選択培地による基質特異性拡張型βラクタマーゼ産生
大腸菌の検出方法の検討
氏名
指導教員
佐々木
康
浦瀬
太郎
キーワード：Extended Spectrum β-Lactamase , Cefotaxime , Ceftazidime ,
Escherichia coli
【はじめに】病原性細菌への対策として様々な抗生物質が使われているが、
次々と抗生物質耐性を獲得した菌を生み出し、人の生活環境に入ってきてい
る。その中でも現在日本でよく使われている第 3 世代セファロスポリンに耐性
を持つ基質特異性拡張型 β ラクタマーゼ（ESBL）産生菌が注目されている。
本研究では環境試料からの ESBL 産生大腸菌の検出法の検討を行った。
【実験方法】多摩川上流域 1 回、多摩川中流域 3 回、大学排水の処理水 3 回の
計 7 回採水し、フィルター上で大腸菌を濃縮し、CHROMagar ECC、CHROMagar ECC
に CTX（セフォタキシム）を添加したもの、ESBL 産生菌を選択的に検出できる
CHROMagar ESBL を使用して 37℃24 時間培養した。各プレートから 4 株（少な
ければ 2 株）ずつ単離し、ディスク拡散法による耐性試験で CTX,CAZ,CPR のい
ずれかに耐性が認められた株に対しては，さらに ESBL 産生の阻害剤によって
阻止円が拡大するかによって ESBL 産生菌かどうかの確定試験を行った。
【結果と考察】確定試験で ESBL 産生菌と判断された株の数を採水地と使用し
た培地ごとに表 1 にまとめた。処理水が合流する前の上流域の試料や ECC 培地
から釣菌し株では、ESBL 産生大腸菌は検出されなかった。中流域や工科大処
理水の試料について CTX を添加した培地から得られた株のほとんどは，ESBL
産生大腸菌であった。ESBL 培地で釣菌される株が ESBL 産生菌である確率は，
CTX 添加培地の場合よりも低いが，CTX を分解できない ESBL 産生菌が存在して
いることから、培地によって検出される大腸菌の種類が異なると考えられた。
表 1 各培地と採水地点による ESBL 産生大腸菌割合

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