VOL. 25 NO. CHEMOTHERAPY 5 T-1220の 毒 性 869 試 験(第4報) ビー グ ル犬 筋 注 に お け る亜 急 性 毒 性 試 験 高井 明 ・米 田 豊 昭 ・河 村 泰 仁 柴 田 哲夫 ・正 谷 博 之 ・佐 藤 盛 富 山化学工業株 式会社綜合研究所 T-1220に 関 して は,急 性 毒 性1),ラ ッ ト腹 腔 内 投 与 亜 急 性 慢 性 毒 性2),ラ ッ ト静 脈 内投 与 亜 急 性 毒 性3),に い てす で に報 告 した 。 こ こ で は, T-1220の の一 環 と して行 な った ビー グ ル犬1カ つ 安 全 性試 験 月筋 肉 内 投与 実 験 の結 果 を報 告 す る。 対 照 薬 と して ア ミノ ベ ンジ ル ペ ニ シ リ ン(Na塩, ABPC)を 1.実 来 の ビー グ ル犬 雌11頭 を6カ 月齢 料(日 本 ク レァCD-5) 赤 血 球 数,白 度60±5%で 1日300gと イ ヌ用 固型 飼 水 道 水 を 自由 に与 え 血 球 数(蠶 ク リ ッ ト(毛 細 管 法),ヘ ロ ピ ン法),網 and 生 体 染 色),血 血 球 百 分 率(メ 小 板 数(Rees イ ー ギ ム ザ 染 色)。 (Reitman-Frankel法), 橋,柴 ALP (Kind-King法), 田 法), Chol. (Zurkowski法), Indophenol法), T, Bilirubin (Babson変 上8項 法)以 BUN 目 は,オ 用 した 。 飼 育 は 個 別 ケ ー ジ で行 な った。 本実 験 で の 高 用 ー ズ ア セ テ ー ト膜 電 気 泳 動 法) ,血 量 を,予 備 実 験 の 結 果 か ら,筋 肉 内投 与 に お け る 可及 的 Refiectance 250mg/kg投 し,他 にそ の1/4量 で あ る 与 群 を設 定 した。 250mg/kgは,臨 量 を2g/man/dayと 推 定 した 場 合,約6倍 量 で あ る、 実 験 計 画 をTable 床使用 に相当する 1に 示 す 。 を 行 な い,1日1回 左 右 の 後 肢 大 腿 部 筋 肉 に分 割 して 注 射 した 。 対 照 群 に は 滅 菌 生 理 食 塩 水 を 同様 に投 与 した 。 30日 間 の 投 与 期 間 中,毎 日一 般 症 状 を観 察 し,3日 毎に 腺,甲 重 量 を 測 定 し,こ 腸,結 腸 リ ン パ 節,骨 Labstix),ウ ロ ビ リノー ・ ゲ ン(AmesUrobilistix),ビ リル 状 腺,膵,副 胱,子 髄,下 二 指 腸,空 宮,腸 H・E染 色 し,組 に つ い て は,グ 1 Experimental design in beagle 酸 鉛 二 重 染 色 を 行 な っ て,電 for subacute toxicity 腸,回 巣の 腸,盲 間 膜 リ ン パ 節,鼠 径部 織 学 的観 察を行な っ 酸 ウ ラ ニ ル,ク エ ン 子 顕 微 鏡 に よる微 細 構 造 の 観 察 を 行 な った 。 dogs (i.m., 1 month) 下 腺,卵 ル タ ー ル ア ル デ ヒ ド前 固 定, ポ ン包 埋,酢 ビ ン(AmesIctostix)。 Table 腎,顎 垂 体 お よ び投 与 局 所 の筋 肉 を 加 え て オ ス ミ ウ ム酸 固 定,エ トン体,潜 血, pH (Ames 例 に つ い て 糞 を 培 養 し,光 れ に 胃,十 直 腸,膀 た 。 肝,腎 蛋 白,ケ Dextrostix 光 光 度 計)。 検 を 行 な っ た 。 肉 眼 的 観 察 の 後,脳,心,肺, 肝,腎,脾,胸 実 験 期 間 中 に 次 の項 目に つ い て 検 査 を 行 な った 。 尿 量(ml / 20hr),糖 ルPt 例 を ペ ン トバ ル ビ タ ー ル 深 麻 酔 下 で 頸 動 脈 よ り放 血 死 さ ホ ル マ リ ン 固 定, 尿検査 糖(Ames 動分 方 法 に よ り腸 内 細 菌 叢 の 変 動 を 調 べ た 。 最 後 に 全 体 重 と摂 餌 量,摂 水 量 の 測 定 を 行 な った 。 実 験 開 始 前 と i) K(炎 30日 間 の 投 与 終 了 後,全 岡4)の せ,剖 検 体 は 用 時 調 製 と し,蒸 留 水 に溶 解 した後,濾 過 滅 菌 Na, LDH リ ン パ スACA自 析 装 置 に よ り測 定 。 総 蛋 白(屈 折 率 法),A/G比(セ meter), (Urease- (Evelyn-Malloy法), て1カ 月 間 予 備 飼 育 し,健 康 状 態 を確 認 した後 実験 に使 大 量 と思 わ れ る1000mg/kgと マ ト 液化 学検査 GPT Ch-E(高 一 ル タ ー カ ウ ン タ ー),ヘ モ グ ロ ビ ン(シ ア ン メ ト ヘ モ グ 赤 血 球 数(超 Ecker法),白 GOT, 験 材 料 お よび 方 法 で 購 入 し,室 温22±2℃,湿 血液検 査 iii)血 用 い た。 日本 ク レア(株)由 ii) test of T-1220 CHEMOTHERAPY 870 Fig. 1 Body weight treated changes in beagle intramuscularly dogs with T-1220 for 1 month II. 実 1. 験 結 果 一 般 症 状 と発 育 にお よぼ す 影 響 T-1220お よびABPCの1000mg/kg投 与 群 で は,投 与 直 後,動 物 は 悲 鳴 を あ げ,狂 乱 状 態 に 陥 り,手 当 た り 次 第 に噛 み つ く反 応 を 示 した 。 こ の痛 み を表 わ す症 状 は 投 与 後3分 以 内 に 軽 減 され るが,約30分 ず る歩 行 が み られ た 。 T-1220 間 は後 肢 を 引 き 250Mg/kg投 与群 では こ れ らの症 状 は 認 め られ な か った 。 眼 に は 肉 眼的 異 常 が み られ ず,ま た 行 動 に も,視 覚 障 害 に よる と思 わ れ る 異 常 は み られ な か った 。 発 育 に関 して はFig.1に 示すよう に,各 投与 群 と も抑 制 は み られ なか った 。 2. 摂 餌 量 と摂 水 量 各 投 与 群 と も毎 日300gの 飼 料 を完 全 に食 べ て お り, 検 体 投 与 に よ る影 響 が み られ なか った。 摂 水 量 に も変 化 を 認 め な か った 。 3. 尿 検 査(Table2) T-1220 1000mg/kg投 反 応 を み た ほ か, ABPC 与 の3例 中1例 に軽 度 の 潜 血 1000mg/kg投 与 の2例 に,軽 度 の蛋 白 と ビ リル ビ ンの 出現 を認 め た 。尿 量, pH,糖,ケ トン体,ウ 4. ロ ビ リノ ー ゲ ンには 著 しい変 化 が な か った 。 血 液 検 査(Table T-1220 250mg/kg, 3-1, 3-2, 3-3) 1000mg/kg投 与 群 に は赤 血 球 数, ヘ モ グ ロ ビ ン,ヘ マ トク リ ッ ト,網赤 血 球 数,血 小 板 数 に 異 常 が 認 め られ な か った 。 白 血 球 数 に も異 常 が 認 め られ JULY1977 VOL.25 NO.5 CHEMOTHERAPY 871 872 CHEMOTHERAPY JULY 1977 VOL.25 NO.5 CHEMOTHERAPY 873 874 CHEMOTHERAPY JULY 1977 VOL.25 NO.5 CHEMOTHERAPY 875 CHEMOTHERAPY 876 な い が,白 血 球 分 画 で は, 1000mg/kg投 与で 好 中 球 の わ ず か な 増 加 が み られ る 例(No.8) が あ っ た 。 ABPC投 与2∼3週 与 の1例(No.10)は,投 後 に 赤 血 球 数,ヘ モ グ ロ ビ ン,ヘ マ ト ク リ ッ トの 減 少 と 白 血 球 数 の 増 加(分 で は 好 中 球 が 増 加 して い る)を 5. 血 液 化 学 検 査(Table 画 示 した。 4-1, 4-2, 4-3, 4- 4, 4-5) T-1220お 群 で, よ びABPCの1000mg/kg投 GOT , GPTの 与 上 昇 が あ り,投 与1∼2 週 後 を ピ ー ク と して 以 後 徐 々 に 低 下 す る 傾 向 を 示 し た 。 こ の 変 化 は, もABPC投 ま た 投 与2週 が, T-1220投 与群 よ り 与 群 に 若 干 強 く現 わ れ て い た 。 T-1220, 後 を ピ ー ク とす るLDHの ABPC投 上昇 与 群 にほ ぼ 同程 度 に認 め られ た 。 他 の 検 査 項 目 には 検 体 投 与 に起 因 す る と思 わ れ る異 常 が な か った 。 6. 腸 内 細 菌 叢 の 変 動(Table T-1220投 5-1, 5-2) 与群では総菌数がわずか な 減少 を 示 し た が,そ の 主 因 はBifidobacteriaの 消 失 に よ る も の と 思 わ れ た 。 そ の 他Staphylococciの 著 明 な 減 少, 的 で あ り,ま Clostridiaの 消失が特徴 たBacteroidaceaeの わずか な 減 少 が み ら れ た 。 こ れ をABPC投 較 す る と,総 菌 数 減 少, Staphylococci減 bacteria消 失, 与 群 と比 Clostridia消 少 の 点 で 共 通 し, Bacteroidaceae減 失, Bifido- 少 はT-1220 に 特 徴 的 で あ る よ うに み え た 。 仏 剖 検 所 見 と臓 器 重 量,臓 肉 眼 所 見 で は, 1000mg/kg投 T-1220お 器重量体重比 よ びABPCの 与 全 例 の 投 与 部 位 筋 肉 に高 度 の 出 血 や 壊 死 が あ り(Photo. 1, 2),こ れ ら の 例 で は鼠 径 部 リ ンパ節 の肥 大 が 認 め られ る も の も あ っ た 。 T-1220 250mg/kg投 与群では投 与 部 位 の 筋 に ほ と ん ど 肉 眼 的 な 異 常 が な く, 生 理 食 塩 水 投 与 の対 照 群 との 間 に 差 が み られ な か っ た 。 他 に は 脾 の 周 辺 部 に,暗 状 に 隆 起 した,限 250mg/kg投 局 した う っ血 が, 与 の2例, 1例 ,ABPC投 与 の2例 臓 器 重 量 をTable をTable 6-2に の 肝 重 量 増 加 が,両 れ た 。T-1220 T-1220 1000mg/kg投 与 の に 認 め られ た 。 6-1に,臓 器重量体重比 示 す 。 臓 器 重 量 で は, お よ びABPCの1000mg/kg投 赤 色 に帯 T-1220 与 群 に,軽 度 検 体 と も同 程 度 に 認 め ら 250mg/kg投 与 で は これ が み JULY 1977 VOL.25 CHEMOTHERAPY NO.5 Table 5-1 Numbers of organisms in the intestinal bacterial flora of beagle dogs treated intramuscularly with T-1220 for 1 month (log/g of feces) Table 5-2 Mean numbers of organisms (log/g of feces) and detection rates of the intestinal bacterial flora from beagle dogs treated intramuscularly T1220 for 1 month 877 CHEMOTHERAPY 878 Photo. 1 The injection site (Musculus fernoris) from a beagle dog given T-1220 at 1000 mg/kg with intramuscular injection for 1 month. Focus of muscular necrosis, which was formed by the injection of T-1220, is shown. Table 6-1 Organ weight in beagle dogs treated JULY Photo. 2 1977 The injection site (Musculus femoris) from a beagle dog given ABPC at 1000 mg/kg with intramuscular injection for 1 month. Granulation tissue is formed surrounding the broad muscular necrosis. intramuscularly with T-1220 for 1 month (g) VOL. 25 NO. CHEMOTHERAPY 5 Table 6-2 Relative organ intramuscularly weight 879 per 100 g body weight with T-1220 in beagle dogs treated for 1 month Photo. 3 The muscle of the injection site from a beagle dog given T-1220 at 1000 mg /kg with intramuscular injection for 1 month. Hemorrhage, tion, muscular and are cell infiltranecrosis granulation observed. •~ staining. tissue 80, H. E. CHEMOTHERAPY 880 Photo. 4 The liver cells 1000mg/kg Hydropic the Photo. 5 Electron T-1220 granules are fixation acetate reticulum and with undistinguishable with glutaraldehyde lead of 200, citrate. dog liver of the H. E. of confined and given T-1220 injection cell can liver for be cell at 1 month. observed, shows no but signifi- staining. the intramuscular and is beagle the observation 1000mg/kg endoplasmic a intramuscular pattern changes. •~ microscopic at change cord-like cant from with JULY liver cell from injection its area in the osmic are for enlarged. cytoplasmic acid. Double a beagle 1 month. The matrix. •~ staining dog given Glycogen rough surfaced 7500, Double with uranyl 1977 VOL. 25 NO. CHEMOTHERAPY 5 Photo. 6 The kidney mg/kg significant rulus Photo. 7 Electron dog There are osmic acid. られ なか った 。 他 にはABPC and microscopic given T-1220 no from with dog are seen tubule. •~ 400, H. 1000 gross changes. •~ staining of the mg/kg 与 群にの both E. in at 1 month. the renal glomerulus of the intramuscular Double uranyl T-1220 for 1000 No glome- staining. with 7500, with given injection changes Double 1000mg/kg投 a beagle intramuscular observation at 881 fixation acetate and with lead kidney from a beagle injection for 1 month. glutaraldehyde 組 織 学 的 検 査 の 結 果 をTable み,腎 重 量 の軽 度 増 加 と胸 腺 電 量 の減 少 が あ った 以 外, ABPCの1000mg/kg投 検 体 投 与 に起 因 す る と思 わ れ る 重量 の変 化 が なか った 。 そ の 周 囲 の 肉 芽 組 織(Photo.3)が 8. 組 織 学 的 検 査 と電 子 顕 微 鏡 的 観 察 た,可 and citrate. 7に 与 全 例 に,投 示 す 。 T-1220と 与部位の筋壊死 と 高 度 に 認 め られ た 。 ま 逆 性 の 肝 細 胞 の 水 腫 様 変 性(Photo.4)が 全例 にみ CHEMOTHERAPY 882 Table 7 Histological observation T-1220 for 1 month JULY in beagle dogs treated intramuscularly 1977 with No significant changes were observed in brain, hypophysis, heart,lung, kidney, thyroids, thymus, submaxillary glands, adrenals, pancreas, stomach, duodenum, jejunum, ileum, cecum, rectum, colon, uterus, ovaries, urinary bladder, mesentery lymph nodes and bone marrow. られ た が,肝 細 胞 索 の配 列 は 正 常 で あ り,炎 症 性 変化 は 症 状,投 与 部 位 の 肉 眼 的 所 見 と も生 理 食 塩 水 投 与 対照 群 認 め られ な か つた 。 こ の肝 細 胞 を電 子 顕 微 鏡 的 に観 察 す との 間 に差 が み られ な か つた 。T-1220投 る と(Photo.5),細 と思 わ れ る変 化 と して は,1000mg/kg投 胞 質 のendoplasmic な って お り,核 膜 とmitochondria周 reticulumは 疎 に 辺 に わ ず か にみ ら れ る だ け で あ つた 。 細 胞 質 のglycogenareaは 大 して お り,glycogen granulesの 異 常 に拡 電子密度は対照群 よ 投 与 開 始1∼2週 与 に起因する 与 群 に お い て, 後 を ピー ク とす るGOT,GPT,LDHの 中 等 度 の上 昇 と肝 重 量 の増 加,お よ び組 織 学 的 に肝 細 胞 の 水 腫 様 変 性 と脾 の限 局 した うっ血 が あ つた 。 肝 の電 子 り低 い傾 向 を示 して い た。 この 変 化 は,T-1220とABPC 顕 微 鏡 所 見 で は,細 胞 質glycogenareaの の1000mg/kg投 た こ とか ら,検 体 に よ る肝 の糖 質 代 謝 に 対 す る何 らか の 与 群 で ほ ぼ 同程 度 に 認 め られ た 。 腎 に は 各 投 与 群 とも,組 織 学 的(Photo.6)に 的(Photo.7)に も,電 子 顕 微 鏡 も異 常 を認 め な か った 。 他 に は,鼠 径 部 拡 大 が み られ 影 響 が 考 え られ るが,こ の 変 化 は 形 態 的 には 可 逆 的 範 囲 を 超 え な い 程 度 の も ので あ った 。 またGOT,GPT,LDH リ ンパ 節 の腫 大 と リ ンパ球 の増 加 がT-1220とABPCの の上 昇 は,こ の 肝 の 変 化 の み な らず,投 与 部 位 の 骨 格 筋 1000mg/kg投 壊 死 に よる 影響 を もい く分 反 映 して 現 わ れ た もの と思 わ 与 群 にみ られ,脾 の 限 局 性 の うっ血 が 対 照 群 を 除 く各 投 与 群 に投 与 量 と無 関 係 に散 発 的 に み られ れ た 。上 記 変化 はABPClOOOmg/kg投 た。 認 め られ た。T-1220250mg/kg投 III. 総 括 と 考 察 T-1220250mg/kg,1000mg/kgを1群3頭 比 較 検 討 した 。 投 与 後,T-1220お の 雌 性 ビー よびABPCの1000mg/ 与 群 の動 物 は激 しい痛 み を 表 わ す 症 状 を 示 した 。 これ は50%溶 液 の2ml/kg筋 注 とい う本 実 験 の た め に や む な く設 定 した 高 濃 度 の 検 体 の大 量 筋 注 に よる影 響 に加 え て,T-1220,ABPCと 与 群 で は検 体 投 与 に 起 因 す る と思 わ れ る異 常 が な か つたo グ ル犬 に1ヵ 月 間筋 肉 内 投与 し,そ の 安 全 性 をABPCと kg投 与 で も同程 度 に 結 1) T-1220 論 250mg/kg, 1000mg/kgを1群3頭 の雌 性 ビー グル 犬 に1ヵ 月 間 筋 肉 内投 与 した 。 対 照 薬 と して ABPC 1000mg/kgを 同様 に投 与 し,対 照 群 に は生 理 食 塩 水 を投 与 したo 2) T-1220お よびABPCの1000mg/kg投 与群で も局 所 刺 激 作 用 を 有 す る5)と い は,投 与 後 激 しい 痛 み を表 わ す 症 状 が み られ,剖 検 で は う要 因が 加 わ つた た め と思 わ れ た 。 これ らの 動 物 の投 与 投 与 局 所 の 筋 肉 に 出 血,壊 死 が 認 め られ た が,そ の 程 度 部 位 に は 出血 や 限 局 した筋 壊 死 が 認 め られ たoし か し, は 両検 体 間 に 差 が な か つた 。 T-1220250mg/kg(25%溶 液,1ml/kg)投 与 群 で は, 3) T-1220お よ びABPCの1000mg/kg投 与 群 で, VOL. GOT, 25 GPT, NO. CHEMOTHERAPY 5 LDHの 中 等 度上 昇 が 一 過 性 にみ られ,肝 883 の 組 織 学 的検 査 で は 肝細 胞 の 水 腫 様 変 性 が 認 め られ た が, 文 1) に 差 が な か った 。 T-1220 明,米 恒 夫,柴 T-1220の 肝細 胞 索 の 配 列 は 正 常 で あ った 。 そ の 程 度 には 両 検 体 間 4) 高井 献 田 豊 昭,中 田 弘 子,正 田 哲 夫,中 村 昌 三,河 毒 性 試 験(第1報),マ 田 イ ヌ,サ ル に お け る 急 性 毒 性 試 験 。 Chemotherapy 250mg/kg投 与 群 に は 検 体 投 与 に起 因 す る異 常が な か った 。 25 (5) : 816∼828, 2) 謝 辞 賜 わ った金 沢 大 学 医 学 部 第2病 理 学 教 室 太 田 五 六 教 授 と,腸 内細 菌 叢 の検 査 に関 して,実 験,解 高井 明.米 夫,河 村 泰 仁,佐 2報),ラ 実 験 の遂 行 に あ た り,組 織 標 本 の 観 察,診 断 と校 閲 を 1977 田 豊 昭,中 田 弘 子,正 藤 盛 3) 析 全般 に わ た 高井 明,米 仁,佐 藤 田 豊 昭,正 盛,中 25(5) 毒 性 試 験(第3報),ラ らび に千 田俊 雄,石 津 景 子 の 各 氏 に深 甚 な る感 謝 の 意 を表 します 。 力を 頂 い た 当 研 究 所 4) 山照 美, 鷲 塚 康 子,古 川 裕 美,折 川 真 佐 子 の各 氏 に感 謝 し ます 。 田 哲 夫,河 場 淳 子: 性毒 1977 村泰 T-1220の ッ ト静脈 内 投 与 に お け る 亜 25 (5) : 857∼868, 1977 光 岡 知 足:腸 内 フ ロー ラ の 調 べ 方 と決 め 方 。 腸 管 感 染 研 究 会 編 「感 染 モ デ ル の 組 み 方 」。 p.165∼ 192.近 代 出 版 。 1973 中 田弘 子,大 森 雅 春, 荒 井 博 敏,池 上 輝 久,中 村 昌三,稲 場 淳 子,伊 田哲 毒 性 試 験(第 : 829∼857, 谷 博 之,柴 田 弘 子,稲 急 性 毒 性 試 験 。 Chemotherapy 室 中谷 林 太 郎 教 授,な 谷 博 之,柴 : T-1220の ッ ト腹 腔 内 投 与 に お け る 亜 急 性,慢 性 試 験 。 Chemotherapy って ご協 力 を頂 いた 東 京 医 科 歯 科 大 学 医学 部 微 生 物 学 教 また,協 谷 博 之,室 村 泰 仁,佐 藤 盛: ウ ス,ラ ッ ト, 5) 高井 明,米 三,岡 野 悦 子 : T-1220の motherapy 田 豊 昭 。 中 田 弘 子,室 田 恒 夫,中 村 昌 局 所 刺 激 性 試 験 。 Che- 25 (5) : 934∼940, 1977 TOXICITY TESTS OF T-1220 (IV): SUBACUTE TOXICITY OF T-1220 IN BEAGLE DOGS WITH THE INTRAMUSCULAR ADMINISTRATION AKIRATAKAI,TOYOAKIYONEDA,YASUHITOKAWAMURA, TETSUO SHIBATA,HIROYUKIMASATANIand SHIGERUSATO Research Laboratory, Toyama Chemical Co., Ltd. The subacute toxicity of T-1220 was tested using female beagle dogs treated with the daily intramuscular administration for a month, and compared with that of aminobenzylpenicillin ( ABPC ) . T-1220 was injected to the dogs with daily doses of 250 and 1,000 mg/kg, and ABPC was with daily dose of 1,000 mg/kg. Control dogs were treated with physiological saline. The results are as follows. 1) The signs showing severe pain were observed immediately after the administration in groups of T-1220 and ABPC, respectively, at 1,000 mg/kg. 2) The bacterial flora of the bowel of the beagle dogs treated with T-1220 for a month was examined. The administration of T-1220 produced a slight decrease in total number of organisms that was mainly due to the disappearance of Bifidobacteria and Clostridia. 3) The GOT, GPT and LDH increased slightly in groups of T-1220 and ABPC at 1,000 mg/kg. The histological examination, however, showed only hydropic changes of the hepatic cells and did not any inflammatory changes throughout the livers in both groups. 4) The group of T-1220 at 250 mg/kg had no abnormalities produced by the administration.
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