バイオ精製操作に関する技術資料 BioProcess Application E.coli菌体破砕処理後の細胞残渣除去 E.coliのある菌体内生成蛋白成分を回収するために、菌体破砕処理後細胞残渣分離操作を行った。導入遺伝子組み換え処理したE.coliを培養し、物理的細胞破砕処理を行った。必要な成分は菌体内に蓄積する蛋白で、抗癌活性のあるインターフェロンであった。実験条件使用した破砕液のバッチサイズは245Lでした。孔径0.2μmの KrosFloモジュール（品番K02-M20U-06-N：膜面積1.0m2）１本を使用しました。液循環流速は、終始57 L/minを維持しました。透過液口は、液循環が安定状態になるまで、閉鎖しておきました。その後徐々に透過液口を開放しました。循環液戻りラインの流量制限（加圧）は一切行いませんでした。操作開始時の液温は４℃でしたが、操作終了時には、１２℃まで上昇していました。操作開始時モジュール入口圧は12 psig (0.85 bar) でしたが、液温上昇に伴って徐々に11 psig (0.77 bar)まで低下し、その後固形成分の濃度上昇に伴って上昇に転じ、操作終了前には13 psig (0.91 bar) まで上昇しました。結果細菌破砕液についてよく認められるように、透過液流速は、初め急速に低下した後安定した平衡透過流束（Flux）を示すようになりました。操作時間65分で、237Lの精製された透過液が得られました。平衡Flux値200 L/m2hrにて、細胞残渣は、30倍濃縮されました。求める蛋白成分は、透過液として 99%回収されました。議論細胞破砕処理後、破砕液から目的成分を経済的に分離するには、適切なろ過モジュールと操作条件の選択が重要です。SpectrumのKrosFlo®フィルターモジュールは、細胞破砕液から、溶解蛋白成分を分離するのに極めて有効なツールです。使い捨て型モジュールは、繰り返し使用型モジュールに比べ、種々の利点を持っています。使い捨てのノンパイロジェニックフィルターを使用することにより、繰り返し使用型のフィルターのように、洗浄の煩わしさに悩む必要がありません。使い捨てですから、ロット間交差汚染の心配もありません。最後に、複数回の操作を通して、安定した優れた性能が示されました。図１図2 E. coli細胞破砕液から細胞残渣を分離するために組んだシステム仕様 E. coli細胞破砕液からの細胞残渣分離実験時のFluxおよび透過液量の経時変化実績 Spectrum Japan（日本支社）+077-552-7820 310-885-4600 (worldwide) 420-11395-015 Rev.01-151404