イチゴ萎黄病のヘソディム左：本圃の発病下：育苗圃の発病三重県農業研究所〒515-2316 三重県松阪市嬉野川北町530 TEL : 0598-42-6357 ―　171　― 対象診断手順 1 イチゴ萎黄病についてイチゴ萎黄病とは調査方法糸状菌の一種であるFusarium oxysporum Schlechtendahlにより引き起こされる病害です。評価方法病徴は、新葉の３小葉のうち、１～２葉が奇形（小型）化して舟形にねじれる特徴があります（写真参照）。葉は、光沢を失い、黄味を帯びます。病徴の進展にともない、株全体の矮化や枯死に至ります。診断票伝染は土壌伝染と苗伝染によって蔓延する病気です。土壌伝染は、厚壁胞子として土壌中に生存し伝染源となり、根から侵入します。一方、苗伝染は、親株が罹病していた場合、ランナー内の導管を経由して苗が発病したり、保菌苗となります。対策技術三重県の育成品種である「かおり野」は、「章姫」に比べ本病に罹病性であることから、「かおり野」の普及とともに発生の拡大が懸念される病害です。留意点出典：日本植物病害大事典その他 ―　172　― 品種の病害抵抗性対策技術の選定品種の病害抵抗性前作発病程度 ―　173　― その他対策技術の選定留意点土壌中の病原菌密度対策技術本圃の調査診断票親株更新の有無評価方法育苗培土の種類調査方法親株床の栽培様式診断手順土壌中の病原菌密度象育苗圃の調査 2 対診断の手順対象診断手順 2 表．育苗圃発病と本圃発病の調査方法イチゴ栽培においては、育苗期相関係数（単回帰分析）間中に潜在感染した苗の本圃への調査年度 2カ年持ち込みによる発病が見られます。 2014年 2015年平均そのため、「育苗圃」の調査と 0.71 0.94 0.76 「本圃」の調査が必要です。調査圃場数：21圃場（2014年） 11圃場（2015年）評価方法診断票対策技術【土壌中の病原菌密度】萎黄病菌は厚壁胞子として土壌中に生存しており、伝染源となります。罹病苗の根系土壌から病原菌密度 104cfu/mLレベルで確認されることもあります。育苗圃においては、親株の地床育苗や育苗培土の自家配合では、土壌中に病原菌が含まれる危険性が購入培土に比べ高くなります。本圃においては、前作で萎黄病の発病が見られた場合、土壌中に病原菌が存在する危険性があります。【品種の病害抵抗性】品種により萎黄病抵抗性の強弱が異なります。栽培予定品種の病害抵抗性を把握することが重要です。留意点その他【親株更新の有無】親株の更新が行われていない場合、前作の発病程度により、潜在感染している可能性が考えられます。ランナー内の導管を経由し親株から子苗に伝染します。 ―　174　― 診断票図．ベンチアップされた育苗 100 前作発病程度前作発病程度試験的に発病させた土壌をかおり野章姫かおり野章姫 0 10 10個/mL 100個/mL 1000個/mL 10000個/mL 土壌中の萎黄病菌密度 0 0 10個/mL 100個/mL 1000個/mL 10000個/mL 図．品種別の萎黄病感受性の違い 80 70 土壌中の萎黄病菌密度図．品種別の萎黄病感受性の違い 60 80 50 発70 病 40 60 度 30 発 50 病 20 40 度 10 30 200 10 0 10/8 10/18 10/28 11/7 11/17 11/27 12/7 12/17 12/27 昨年度土壌 1/6 無接種図．保存した萎黄病菌汚染土壌での発病 10/8 10/18 10/28 11/7 11/17 11/27 12/7 12/17 12/27 1/6 昨年度土壌無接種図．保存した萎黄病菌汚染土壌での発病 ―　175　― その他 1年間保存し、「かおり試験的に発病させた土壌を野」を定植したところ、発 1年間保存し、「かおり病を確認しました。野」を定植したところ、発病を確認しました。発病度発病度図．ベンチアップされた育苗留意点汚染土壌において、「かお試験的に作成した萎黄病菌り野」は菌密度102cfu/mL 汚染土壌において、「かおで発病しましたが「章姫」 2cfu/mL り野」は菌密度10 は104cfu/mLでも発病しまで発病しましたが「章姫」せんでした。は104cfu/mLでも発病しませんでした。 90 80 100 70 90 60 80 50 70 40 60 30 50 20 40 10 30 0 20 対策技術図．親株床の地床栽培品種の病害抵抗性試験的に作成した萎黄病菌品種の病害抵抗性評価方法図．親株床の地床栽培調査方法栽培方式により、萎黄病菌に汚染された土壌が栽培圃場に混入親株床の栽培様式育苗培土の種類する危険性が異なります。栽培方式により、萎黄病菌に汚染された土壌が栽培圃場に混入する危険性が異なります。診断手順で調査します。圃場内の土壌を採取し、選択培地を用いた平板希釈法やPCR法で調査します。親株床の栽培様式育苗培土の種類象土壌中の病原菌密度圃場内の土壌を採取し、選択培地を用いた平板希釈法やPCR法土壌中の病原菌密度対 3 診断方法診断方法対象診断手順 3 【検定用の土壌採取】調査方法圃場の４隅と中心部の計５点以上から採取します。採取は、表層の土を１㎝程度取り払い、深さ10㎝程度の土壌を100g 程度採取します。５点の土壌をまとめてビニル袋に入れ、 2㎜の篩で篩掛けし、よく混ぜます。【PCR法による病原菌検出】評価方法診断票 ①50mLの遠沈管に供試土壌10mLを入れ、Fo-G2培地を 2mL添加し、25℃で4日間静置培養します。 ②改変塩化ベンジル法（Kageyama、2003）を用いて DNAを抽出後、MagExtractor-plant genome kitにより、 DNAを精製します。 ③須賀ら（2011）のPCR条件を参考にし、PCRを行います。その後、1.5％アガロースでPCR産物の電気泳動（135V、 20分）を行い、バンド（240bp）の有無で判断します。【選択培地を用いた病原菌検出】対策技術 ①供試土壌10gと生理食塩水90mLを30分間、強振し 10-1希釈液とします。 ②適宜10-2、10-3・・・希釈液を作成します。 ③これらの希釈液を100μLずつ、西村培地に塗抹し25℃で 7日間培養し、生育の有無を確認します。留意点【品種の病害抵抗性】その他栽培予定品種の病害抵抗性を把握する際に、利用できます。 ①萎黄病菌をPS培地にて25℃、137rpm、4日間振とう培養します。 ②園芸培土と山砂を１：１の体積比で混合した土壌に、土壌体積あたり、101～104cfu/mLになるように萎黄病菌を混和接種します。 ③調査したい品種を定植し、発病程度により萎黄病に対する感受性を確認できます。 ―　176　― 低高レベル1 レベル2 レベル3 土壌中の菌密度非検出 2 10 cfu/mL未満 10 2 cfu/mL以上またはPCRで検出親株床の栽培様式育苗培土の種類地床からの隔離栽培プランター等の利用による（ベンチアップ）地床からの隔離栽培購入培土自家配合培土前作発病程度かおり野（真性抵抗性品種）他品種（病害抵抗性不明）（罹病性品種）有一部更新無無発病一部発病発病 ※土壌中の菌密度が不明の場合は、親株床の栽培様式や育苗培土の種類から判断します総合評価診断項目品種以外の項目が全てレベル１ポテンシャル２品種以外の項目が「レベル２」以下ポテンシャル３品種以外の項目で「レベル３」がある発病危険度（発病ポテンシャル）低高レベル1 レベル3 章姫（圃場抵抗性）かおり野（真性抵抗性品種）他品種（病害抵抗性不明）（罹病性品種）非検出 10 2 cfu/mL未満 10 2 cfu/mL以上品種土壌中の菌密度またはPCRで検出前作発病程度無発病一部発病 ※土壌中の菌密度が不明の場合は前作発病程度から判断します ※育苗期に発病が見られる場合、総合評価に関わらず本圃での発病の危険性があります。ポテンシャル１診断項目の合計レベルが２～４ポテンシャル２診断項目の合計レベルが５ポテンシャル３診断項目の合計レベルが６ ―　177　― その他総合評価発病留意点レベル2 対策技術本圃の調査ポテンシャル１診断票（親株の更新が無い場合）章姫（圃場抵抗性）評価方法品種親株の更新地床栽培調査方法診断項目診断手順発病危険度（発病ポテンシャル）象育苗圃の調査対 4 評価方法対象診断手順 4 調査方法「２診断手順」に示したように、イチゴ栽培においては、育苗期間中に潜在感染した苗の本圃への持ち込みによる発病が見られます。そのため、育苗期に発病が見られる場合、総合評価に関わらず本圃での発病の危険性が高まります。発病ポテンシャルの考え方診断項目「品種」では、「章姫」は抵抗性品種ですが、圃場抵抗性品種のため発病する場合があり、「レベル２」にしています。評価方法総合評価の考え方例（育苗圃）発病危険度（発病ポテンシャル）診断票低高診断項目レベル1 レベル2 レベル3 土壌中の菌密度非検出 10 2 cfu/mL未満 10 2 cfu/mL以上またはPCRで検出親株床の栽培様式対策技術育苗培土の種類地床からの隔離栽培プランター等の利用による（ベンチアップ）地床からの隔離栽培購入培土品種親株の更新留意点前作発病程度（親株の更新が無い場合）地床栽培自家配合培土章姫（圃場抵抗性）かおり野（真性抵抗性品種）他品種（病害抵抗性不明）（罹病性品種）有一部更新無無発病一部発病発病その他上記の場合、「菌密度」不明のため「親株」と「育苗培土」から「レベル３」と「レベル１」の平均をとり「レベル２」、「品種」では「レベル３」、親株の更新は無いため「前作発病程度」で判断し「レベル１」のため、総合評価は「ポテンシャル２」になります。 ―　178　― 調査圃場親株定植予定日本圃定植予定日栽培作物・品種品種の病害抵抗性育苗方法育苗培土の種類親株の由来診断票土壌消毒剤の履歴農薬散布の履歴前作の発病状況評価方法生産者調査方法土壌採取日診断手順調査日象診断票問診表 5 対診断票問診表対策技術施肥量（炭疽病、萎黄病、他）コメント他留意点前作の発病状況を問診する際は、栽培品種や土壌消毒の種類も同時に聞き取ることが重要です。その他 ―　179　― 対象診断手順 5 炭疽病の項目に記載した「診断票」と同様になります。調査方法イチゴ栽培生産者への問診を行う際に利用します。診断および対策を行うにあたって、栽培管理、農薬の散布履歴を知ることが大切です。診断票は萎黄病を対象にするだけでなく、炭疽病や他病害の診断や対策に役立てるため、萎黄病に対する診断項目以外の項目も設けています。評価方法診断票また、健全なイチゴを栽培するためにはイチゴ栽培に適した施肥管理が重要となります。土壌分析を行うことで下記のような診断票が栽培の参考にできます。三重県では、「三重県土壌診断・堆肥流通支援システム」（http://www.taihi.pref.mie.lg.jp/U620000.aspx）によって、施肥計画の確認ができます。例対策技術留意点その他 ―　180　― 本圃の対策本圃の対策ポテンシャル１太陽熱消毒を行うポテンシャル１太陽熱消毒を行うポテンシャル３クロールピクリン消毒を行うポテンシャル３クロールピクリン消毒を行う抵抗性品種の検討抵抗性品種の検討その他 ―　181　― 留意点育苗期に発病が見られた場合は、本圃への感染苗の持ち込み育苗期に発病が見られた場合は、本圃への感染苗の持ち込みが考えられます。葉の奇形が見られる苗は定植を行わず、定が考えられます。葉の奇形が見られる苗は定植を行わず、定植後も葉の奇形が見られた場合は、直ちに圃場から出してく植後も葉の奇形が見られた場合は、直ちに圃場から出してください。ださい。対策技術炭疽病の発病危険度が高い場合は、圃場に残っているクラウ炭疽病の発病危険度が高い場合は、圃場に残っているクラウン等の罹病残渣を圃場から除き、危険度に従って土壌消毒をン等の罹病残渣を圃場から除き、危険度に従って土壌消毒を行ってください。行ってください。炭疽病菌と萎黄病菌では、土壌での生存性は炭疽病菌の方が炭疽病菌と萎黄病菌では、土壌での生存性は炭疽病菌の方が劣ります。土壌消毒の選択は、萎黄病の発病ポテンシャルを劣ります。土壌消毒の選択は、萎黄病の発病ポテンシャルを参考にしてください。参考にしてください。診断票ポテンシャル２太陽熱消毒またはバスアミド消毒を行うポテンシャル２太陽熱消毒またはバスアミド消毒を行う抵抗性品種の検討抵抗性品種の検討評価方法ポテンシャル３土壌消毒か購入培土を利用する。地床からの隔離を考えるポテンシャル３土壌消毒か購入培土を利用する。地床からの隔離を考える抵抗性品種の検討抵抗性品種の検討親株を更新し、潜在感染していないものを利用する親株を更新し、潜在感染していないものを利用する調査方法ポテンシャル２親株を更新し、潜在感染していないものを利用するポテンシャル２親株を更新し、潜在感染していないものを利用する診断手順ポテンシャル１初発後、直ちに罹病親株と罹病子苗を除去するポテンシャル１初発後、直ちに罹病親株と罹病子苗を除去する象育苗圃の対策育苗圃の対策 6 対対策技術対策技術象診断手順ポテンシャル３調査方法「発病ポテンシャル３」の場合、現地の発病と土壌消毒効果を検証したところクロールピクリン剤による土壌燻蒸剤の有効性を確認しました。また、無消毒の場合、調査したすべての圃場で発病が見られたため、「発病ポテンシャル３」の場合、防除の必要性が明らかになりました。表．本圃（ポテンシャル3）での萎黄病発病程度と土壌消毒方法別の単回帰分析による相関係数土壌消毒方法調査年度クロピク太陽熱無消毒 2014 -0.73 -0.47 0.75 評価方法萎黄病発病 2015 -0.61 - 0.61 2カ年 -0.59 -0.41 0.69 調査圃場数：7圃場（2014年）、5圃場（2015年）太陽熱消毒 100,000 10,000 10,000 1,000 対策技術炭疽病菌密度(cfu/mL) 診断票作成した炭疽病菌および萎黄病菌汚染土壌を用いた温度別防除効果の検証では、 50℃以上において2日間で死滅することを確認しました。萎黄病菌密度(cfu/ml) 対 6 100 10 1 0 1,000 100 10 1 0 0日 1日 40℃ 50℃ 2日 60℃ 3日 0日図．炭疽病菌汚染土壌を用いた温度別の消毒日数 1日 40℃ 2日 50℃ 3日 4日 60℃ 図．萎黄病菌汚染土壌を用いた温度別の消毒日数留意点 55 50 45 培 40 土内温 35 度（）その他高設栽培圃場における太陽熱消毒については、施設全体の被覆がない場合、最高温度が45℃未満であり、培土の被覆に加え施設全体の被覆がないと消毒効果が認められない可能性があります。 ℃ 30 25 7/15 7/20 7/25 7/30 8/4 栽培施設のビニル被覆あり 8/9 8/14 8/19 8/24 8/29 栽培施設のビニル被覆なし図．高設栽培における太陽熱消毒時の培土内温度 ―　182　― 留意点三重県で主に栽培されている品種である「かおり野」と「章姫」について、調査を行いました。これらの品種は、炭疽病と萎姫」について、調査を行いました。これらの品種は、炭疽病と萎黄病についての病害抵抗性に特徴があり、診断や対策を行うにあ黄病についての病害抵抗性に特徴があり、診断や対策を行うにあたって、重要な項目となりました。たって、重要な項目となりました。全国的にも、両病害に対して抵抗性を示す品種は限られており、全国的にも、両病害に対して抵抗性を示す品種は限られており、品種ごとに問題化する病害を対象として検討する必要があります。品種ごとに問題化する病害を対象として検討する必要があります。対策技術３）品種３）品種三重県で主に栽培されている品種である「かおり野」と「章診断票イチゴ炭疽病・萎黄病・疫病感染苗検査マニュアル（千葉県他 2012）を参考にしています。発病しなかった土壌からも病原菌 2012）を参考にしています。発病しなかった土壌からも病原菌を検出しており、危険度を測るうえで、参考になります。を検出しており、危険度を測るうえで、参考になります。育苗圃では、親株の定植する土壌や子苗用の土壌が汚染されて育苗圃では、親株の定植する土壌や子苗用の土壌が汚染されていた場合、発病の危険性が増します。また、本圃では、前作の発いた場合、発病の危険性が増します。また、本圃では、前作の発病程度と相関が高く、これらを調査することが重要です。病程度と相関が高く、これらを調査することが重要です。評価方法２）土壌中の病原菌密度２）土壌中の病原菌密度イチゴ炭疽病・萎黄病・疫病感染苗検査マニュアル（千葉県他調査方法マニュアルに記載した内容は、2013年～2015年に三重県内で調査した内容をもとに作成しています。で調査した内容をもとに作成しています。栽培地域により、品種や栽培方法が異なります。そのため、診栽培地域により、品種や栽培方法が異なります。そのため、診断を行うにあたっては、地域の実情に応じて調整する必要があり断を行うにあたっては、地域の実情に応じて調整する必要があります。ます。診断手順１）マニュアル内容１）マニュアル内容マニュアルに記載した内容は、2013年～2015年に三重県内象 7 対留意点留意点その他 ―　183　― 対象診断手順 7 ４）親株の潜在感染調査方法三重県では、親株の更新割合は低く、前年に育苗した苗を各生産者の圃場で保管し、春先に親株として定植しています。そのため、前作で発病が見られた圃場では、親株の中に潜在感染した苗が含まれ、ランナーを通じて子苗に伝染することがあります。評価方法５）前作発病程度毎年の萎黄病の発病程度を知ることは、圃場での発病のしやすさを測るうえで大切な情報になります。どの程度、いつ頃から発生したか、記録をつけるようにしてください。診断票６）育苗期の発病対策技術育苗期の感染が原因と思われる発病を本圃で確認しています。定植時には、葉の奇形等の異常株が見られた場合は廃棄してください。感染苗の持ち込みにより、苗の発病だけでなく土壌に病原菌が残る要因となります。留意点その他 ―　184　― 日本植物病害大事典（岸東京，p489-490 國平編集）．全国農村教育協会，辻朋子・黒田克利・鈴木啓史・對馬誠也・吉田重信（2014）．イチゴ炭疽病菌および萎黄病菌の土壌菌密度と発病の関係．日植病報 81:86（講要）対策技術須賀晴久・平山喜彦・森島正二・鈴木健・景山幸二・百町満朗（2011）.イチゴ萎黄病菌の特異的検出が可能なPCR 用プライマー．日植病報 77:62.（講要）診断票 Nisimura, N.(2007). Selective media for Fusarium oxysporum. J. Gen. Plant Pathol.73:342-348. 評価方法 Kageyama, K., Komatsu, T., Suga, H.(2003). Refined PCR protocol for detection of plant pathogens in soil. J. Gen. Plant Pathol. 69:153-160. 調査方法イチゴ炭疽病・萎黄病・疫病感染苗検査マニュアル（「イチゴ健全種苗生産のための病害検査プログラムの構築」研究プロジェクトチーム）．診断手順【参考文献】象 8 対その他留意点その他 ―　185　―