MS 研究技術委員会児玉和子パーソナルケア製品に含まれる防腐剤パラベンの体内摂取量と尿への代謝量および代謝形態の分析方法に関する研究中部大学大院応用生物学研究科 ○児玉和子、鈴木茂 A study of urinary excretion of parabens : provisional method for determining parabens and their metabolites in urine, Kazuko KODAMA and Shigeru SUZUKI(Grad. School of BioSci. & BioTech. Chubu Univ.) 1．はじめにパーソナルケア製品等に使用されているパラベンは、ｶﾗﾑ：GL Science Inertsil ODS-3 「アレルギーなどの皮膚障害を起こす恐れのある物注入量：10.0μL 質」とされており、人によってはアレルギーや皮膚 ○MS 条件障害を起こす恐れがある。さらに、女性ホルモンの機種：Waters micromass ZQ エストロゲンと似たような働きをするため、内分泌ｲｵﾝ化法：ｴﾚｸﾄﾛｽﾌﾟﾚｰｲｵﾝ化法(ESI-Nega) 攪乱作用をもつのではないかとの疑いもあり、人体のホルモンレベルの変動への影響が懸念されている。分析条件(2) パラベンは、摂取後一部がグルクロン酸抱合体等と ○LC 条件して主に尿中に代謝されることが知られている 1)が、機種：SHIMADZU prominence シリーズ LC-20AD すべての代謝形態および量を把握する分析方法はなく、代謝形態の把握を含む分析法の開発は難しい。カラム：GL Sciences Inertsil 演者らはパラベンの人体への曝露および代謝物を含ガードカラム：GL Sciences ODS-3 む尿への排泄量を把握するため、表 1 の 5 種のパラ Cartridge Guard Column E ベンを対象に、LC/MS による分析方法を研究してい InertSustain C18 3μm る。注入量：10.0μL そのはじめとして、尿中のパラベン抱合体の数種の ○MS 条件機種：AB SCIEX 探索を行った。表 1.対象物質の分子量と logPow API4000 ｲｵﾝ化法：ｴﾚｸﾄﾛｽﾌﾟﾚｰｲｵﾝ化法(ESI-Nega) Scan: Precursor Ion 対象物質分子量 LogPow メチルパラベン 152.15 1.96 エチルパラベン 166.17 2.47 プロピルパラベン 180.2 3.04 0.00 95 5 0.2 ブチルパラベン 194.23 3.57 5.00 0 100 0.2 ベンジルパラベン 228.26 3.6 20.00 0 100 0.2 21.00 95 5 0.2 2．実験方法表 2.グラジエント条件時間（分）水（％）メタノール（％）流量（mL/min） ①分析方法以下に LC/MS 条件を示す。分析条件(1) ○LC 条件機種：Waters Alliance2695 ②操作方法抱合体を含むパラベン類の分析では、C18 固相カートリッジを用いて試料の前処理を行い、以下の手順で前処理した試料を測定に使用した。 MS 研究技術委員会児玉和子量値が上がった。抱合体としてクラスター化された尿中のパラベンが高い Cone 電圧によって解離し検出されたためであると推察される。一例としてインソース CID で解離エチルパラベンの SIM クロマトグラム(図 2.)に示す。エチルパラベンのピーク図 2.尿中エチルパラベンの SIM クロマトグラム次に LC/MS/MS による Precursor Ion Scan 測定（低分解能）を行い，尿中パラベンを探索した。その結図 1. 抱合体を含むパラベン類の分析のフローチャート果、メチル、エチル、プロピル、ブチルのプロダクはじめに分析条件(1)を使用し、インソース CID によトイオンを生じる前駆が探索された。しかし、一概るパラベン抱合体の探索可能性を調べた。抱合体をに質量が抱合体と一致するだけでは不十分である。解離させるため Cone 電圧 (MS へのイオンの誘導電現在構造解析を行うため、Triple－TOF での測定の圧)を 20v から 10v 刻みで 60v まで変化させた。解析を行っている。また、抱合体と Free 体のパラベインソース CID で抱合体の探索可能性が示唆されたン両方を視野にいれた定量分析方法の開発にも取りため、LC/MS/MS を用いて分析条件(2)により、5 種組んでいる。表 3. Cone 電圧と尿中パラベン濃度(ppb)の変化のパラベンを生じる前駆物質を Precursor Ion Scan で測定、探索した。 3．結果と考察 Methyl 20v 30v 40v 50v 60v 1.2 2 2.9 54.4 0.6 インソース CID におるパラベン抱合体の探索可能性 Ethyl 0 0 0.5 28.1 149.4 について尿サンプルは標準を添加せずに用いた。表 Propyl 0.9 1.2 1.3 0.1 0.2 3.に Cone 電圧と検出された尿中パラベンの濃度の Butyl 0 0 0 1.7 2 Benzyl 0 0 0 0 0 変化を示す。なお検量線はサンプルと同じ Cone 電圧でそれぞれ作成し、濃度を測定した。Cone 電圧 50v ではメチルパラベンとして 54.4ppb、エチルパラベンとして 28.1ppb が検出され、またエチルパラベンに関しては Cone 電圧 60v で 149.4ppb という値が検出された。Cone10v~30v の間は濃度に変化はなく、40v あたりから電圧が上がるにつれて徐々に定 4．参考文献 1) Sayaka Shirai, Yayoi Suzukia, Jun Yoshinaga, Reproductive Toxicology. 35 96–101 2013