佐賀県衛生薬業センター ー所報 第 34 号（平成 号 24 年度） [技術資料] in-source CID によるシル ルデナフィ ィル類縁体 体の構造解 解析 薬品課 中園 陽子 江口 晴香 八ヶ代 一郎 医薬 食品 品化学課 中山 山 秀幸 ィル類縁体 Q-TOF Q MS MS^3 スペクトル キーワード：シルデナフィ に １ はじめに 医薬品成分 分が含有され れた健康食品 品・化粧品等に による健康被 被害の事例が、世界的に問 問題となっている。当セ ンターでは、 、これらの成分 分を検出する るシステムとし して、LC-TOF F MS を用い いた精密質量デ ース検索シ データーベー ステム１）２）、L LC-QTOF MS M を用いた未 未知医薬品類 類似物質の検 検索システム３）を開発し運 運用している。しかし、本 システムだけ けでは推定が が困難な、置換 換基の一部の のみを変更し した異性体を含 含む違法薬物 物やいわゆる る健康食品 の出現が相次いでいる。平成 24 年度 度に当センター ーで分析を実 実施した強壮 壮系の製品（い いわゆる健康食 食品）では、 物において保 保持時間（RT T）、UV スペク クトル及び MS S スペクトルが が酷似し、どち ちらの化合 候補に挙がった 2 化合物 ているのか判 判定が困難で であった事例が があった。さら らには MS/M MS スペクトル ルも非常に類似 似していた 物が含有して （図 1）。この のような化合物 物については は、標準品との の確認が非常 常に重要にな なってくるため め、判定までに に要する時 間は標準品 品の入手に依存 存する。また、構造決定に には MS スペ ペクトルの情報 報だけでは不 不十分であり、核磁気共 鳴（NMR）ス スペクトル、GC C/MS、赤外線 線吸収スペク クトル（IR）及び び元素分析等 等が必要にな なり、時間、技 技術及びコ ストの面で全 全てを満たすことには限界 界がある。 一方、LC--MS 分析に用 用いられるエ エレクトロスプレ レーイオン化 化（ESI）はソフトなイオン化で であり、H+や Na+といっ た付加イオン ンが主として観 観察されフラ ラグメントイオン ンは観察され れにくいが、フ フラグメンター ー電圧を調整 整することに よりインソース衝突誘起解 解離（in-sourrce CID）によ よるフラグメン ントイオンの観 観察が可能とな なる。この点に着目し、 は in-source CID C と QTOF を組み合わせ せて擬似的な な MS＾3 スペク クトルを計測 し、得られた MS^3 スペ 今回我々は クトルのライブラリ化を試 試みたので報告 告する。 成分名 名 組成 成式 構造式 UVスペクトル ル ホモシルデナフィル C23H322N6O4S メチソシルデナ ナフィル 図 1. 構 造類似体の分析結果 - 40 - MS^2スペク クトル 佐賀県衛生薬業センター ー所報 第 34 号（平成 号 24 年度） [技術資料] ２ 方法 1. シルデナ ナフィル類縁体 体 シルデナフ フィル、ヒドロキ キシホモシル ルデナフィル、 デスメチルシ シルデナフィル ル、ノルネオ オシルデナフィ ィル、メチソ シルデナフィ ィル及びホモ モシルデナフィ ィルをメタノー ールで希釈し 0.2mｇ/mL の標準溶液を の を作成した。実 実験には、 標準溶液を適宜メタノールで希釈し、0.2μm のメ メンブランフィル ルターでろ過 過したものを使 使用した。（表 表 1） び測定条件 2. 装置及び （LC 装置及 及び測定条件 件） 装置：A Agilent 1200 シリーズ カラム：Agilent ZOR RBAX Eclipsee Plus C18 R Rapid resolusiion HD φ2.1×100mm, 粒径 1.8 μm 相：(A)0.1 %ギ酸 酸+2.5 mM 酢酸アンモニ 酢 ニウム/15%MeC CN 移動相 (B)0.1 %ギ酸 酸+2.5 mM 酢酸アンモニウ 酢 ウム/85%MeC CN グラジエ エント条件：A A:B（time）=10 00：0(0min)→ →0：100(30min n) →0：100(3 35min) カラム温 温度：40 ℃付 付近の一定温 温度 流速 速：0.2 mL/min 注入量 量：3μL （MS 装置及 及び測定条件 件） 装置：A Agilent 6540（Q TOF MS） ） イオン化 化：Dual ESI，Positive mode 乾燥ガ ガス：N2，350℃ ℃，10.0L/min n ネブライ イザー：N2，5 50psig キャピラ ラリー電圧：3500Ｖ コリジョンガス：N2 フラグメンター電 電圧：100V～3 350V エネルギー：55～40V コリジョンエ 範囲：25～10050(m/z) SCAN 範 表 1. シルデナフィル ル類縁体 - 41 - 佐賀県衛生薬業センター ー所報 第 34 号（平成 号 24 年度） [技術資料] 【結果及び考 考察】 各種シルデ デナフィル類 類縁体のうち、特徴的であ あったホモシル ルデナフィルとメチソシル ルデナフィルの の結果を示 す。両化合物 物は同一の組 組成式（C22H32N6O4S）を持 持ち、フラグメ メンター電圧を を 150V とした た場合、得られ れる MS ス ペクトル及び び MS^2 スペク クトルは殆ど同 同一であり、保 保持時間も近 近接、UV スペ ペクトルも類似 似している（図 1）ことから 判定には注 注意が必要であ ある。 そこで、フ フラグメンター ー電圧を 350V V とし、両化合 合物で唯一異 異なる構造を持 持つ置換基（--C6H13N2，m m/z=113.11） のフラグメン ントイオンを Q1 にて分離、Q2 にてコリジ ジョンエネルギ ギーを 15V としてプロダク と クトイオンを観 観察したとこ ろ、異なった たスペクトルが が得られ、構造 造上の差を確 確認することが ができた（図 3）。 3 本事例の のように置換基 基の構造のみ みが異なる異性 性体に対して て in-source CID C と QTOF F（タンデム型 型質量分析 計）を組み合 合わせた擬似 似 MS＾3 スペクトル解析は は非常に有用であり、医薬品類似物質の の基本骨格に に着目した スクリーニン ング検索システ テムとを組み合 合わせることに 能力の更なる る向上に繋が がるものと考え えている。 により、検索能 ≠ ホ ホモシルデナフ フィル メチソシルデ デナフィル 図 3. 2 化合 合物の MS^3 スペクトル ス １） 原口那津美、中山秀幸、志 志岐寿子、吉冨 冨淑玲、古川義朗 朗：佐賀県衛生 生薬業センター所 所報，31，p.322-35,2009 ２） 原口那津美、中園陽子、八 八ヶ代一郎、靍田清典：第 48 回 回全国衛生化学 学技術協議会年 年会講演集，pp.290-291 ３） 原口那津美、中野里美、古 古川義朗、靍田清典：第 47 回 回全国衛生化学 学技術協議会年 年会講演集，p.3306-307 - 42 -
© Copyright 2024 ExpyDoc
