LC application data No.220058H(1/2) December 2014 ラピッドセパレーションHPLC（RHPLC）による脂肪酸の分析 Analysis of Fatty Acids by Rapid Separation High-performance Liquid Chromatography 【はじめに】微粒子充填剤を使用した分析を行うシステムは、低いシステムボリューム、高耐圧、高速レスポンスが必要です。これに対して、Rapid separation HPLC（RHPLC）は、コンベンショナルHPLCから一部のUHPLCまでをカバーする高速分析のことで、これからのスタンダードとなる分析手法です。今回、Unifinepak C18とRHPLCシステムを使用して脂肪酸を測定しました。セミミクロスケールに対応した示差屈折率検出器（RI-4035）を使用して、脂肪酸を測定した結果を報告します。 Keyword : RHPLC, 脂肪酸, セミミクロ, ODS, RI 【実験】 [Equipment] Pump: Pump option: Autosampler: Column oven: Detector: [Conditions] Column: PU-4185 DG unit AS-4150 CO-4060 RI-4035 Eluent : Flow rate: Column temp.: Injection volume: Standard Sample: A) Unifinepak C18 (4.6mmI.D. x 150mmL, 5µm) B) Unifinepak C18 (2.0mmI.D. x 150mmL, 1.9µm) C) Unifinepak C18 (2.0mmI.D. x 30mmL, 1.9µm) 0.1%TFA/Acetonitrile (20/80) A; 1.2mL/min, B-C; 0.6mL/min 40℃ A; 10µL, B-C; 2µL Fatty acids mixture (1mg/mL each) 【結果】図1にRHPLCシステムを使用し、コンベンションナルHPLCおよびUHPLCカラムを用いて測定した、脂肪酸のクロマトグラムを示します。セミミクロスケールに対応したRI-4035を使用することで、良好なピーク形状および分離が得られています。また、Unifinepakは選択性が同一な粒子径違いの充填剤を採用しているため、オプションのメソッド変換プログラム（Method Transfer）を用いて、カラムサイズ等をメソッド移行しても同等の分離が得られます。 1 2 3 (A) k4/k3＝1.86 4 1 2 3 4 1 23 4 k4/k3 ＝1.88 (B) k4/k3 ＝1.86 (C) 図1 脂肪酸標準試料のクロマトグラム 1: Myristic acid, 2: Linoleic acid, 3: Palmitic acid, 4: Stearic acid 〒192-8537 東京都八王子市石川町2967-5 http://www.jasco.co.jp No.220058H(2/2) December 2014 図2に脂肪酸8成分を粒子径5µm（Aカラム）と1.9µm（Bカラム）で測定した結果を示します。 1 2 (A) 3 4 12 5 6 7 8 3 4 (B) 5 6 7 8 図2 脂肪酸8成分のクロマトグラム 1: Caprylic acid, 2: Capric acid, 3: Lauric acid, 4: Myristic acid, 5: Linoleic acid, 6: Palmitic acid, 7: Elaidic acid, 8: Stearic acid 〒192-8537 東京都八王子市石川町2967-5 http://www.jasco.co.jp