8 フナコシニュース 2008 年 3 月 1 日号 ● http://www.funakoshi.co.jp/ 遺伝子工学 遺伝子工学 核酸分離精製 核酸分離精製 アガロースゲルからの DNA 抽出キット 幅広いサイズの PCR 産物精製に! GENECLEAN Kit PCR Product Purification Kit GENECLEAN は,結合,洗浄,溶出の 3 段階のシンプ ルな操作でアガロースから DNA を抽出・精製できます。カ ラム操作やエタノール沈殿は不要で,精製した DNA は様々 なアプリケーションに使用できます。 今回はアガロースの融解にヨウ化ナトリウム(NaI)を用 いるキットをご紹介します。 シリカベースのスピンカラムを使用して,PCR 反応液や 酵素反応液から二本鎖 DNA を精製するキットです。短鎖 DNA から長鎖 DNA まで,幅広い鎖長の DNA に適用でき ます。 特 長 ◆ スピンカラム法により,迅速に精製できます。 特 長 ◆ 40 bp ∼ 10 kb までの DNA を,90%の回収率で精製できます。 ◆ NaI の融点降下作用によるアガロースの融解,GLASSMILK(シリ ◆ 反応液からプライマー(< 35 mer),dNTP,塩,タンパク質を効 カマトリックス)への DNA の吸着,NEW 洗浄液(NaCl/Ethanol/ 率良く除去できます。 Water)による不純物除去の 3 つの作用を組み合わせて,DNA の ◆ カラム1本当たり 30 μg の二本鎖 DNA を精製できます(下図参照)。 抽出を行います。 ◆ 精製した DNA は制限酵素反応,シークエンス反応,PCR,ライゲー ◆ いずれのキットも 200 bp ∼ 20 kb の DNA に適用できます。 ションなどにそのまま使用できます。 ◆ GENECLEAN Kit Ⅲには,より再懸濁しやすい EZ-GLASSMILK が使用されており,ラジオアイソトープ標識 DNA の精製も可能です。 1 2 bp ◆ 別売りの SPIN Module(SPIN filter/Catch tube)を使用すると, 短時間で簡単に,より大きなサイズの DNA(200 bp ∼ 300 kb) が精製できます。 50 40 30 memo 40 bp 以上の二本鎖 DNA の回収 20 20,30,40,50,60,70,80,90,100 bp から成る DNA(lane 1)を本キットにより精製した(lane 2)。 40 bp 以上の DNA が回収されていることがわかる。 NaI は未開封の状態でも,酸化反応によって溶液の色が経時的に 黄色へ変化していきます。pH7.4 を超えるアルカリ性になった場 50 酸バッファーにて中性∼弱酸性に調整して下さい。 使 用 例 ◆ アガロースゲルからの DNA 抽出 ◆ 脱塩 ◆ 酵素反応液からのタンパク質・プライマー・未反応のヌクレオチド の除去 溶出 DNA 量(μg) 合は DNA の回収に影響を及ぼしますので,プロトコルに従って酢 40 二本鎖 DNA の回収率 30 20 10 0 0 20 40 60 試料 DNA 量(μg) 20,30,40,70 μg の二本鎖 DNA を本キットにより精製し, 回収率を測定した。 30 μg までは約 95%,40 μg でも約 90% の回収率であった。 80 図中の点線は回収率 100%を示 す。 ◆ ゲノム DNA からの PCR 産物の抽出 お問い合わせ先 キット内容 キット内容 試薬 商品コード マトリックス Nal 1001-200 GLASSMILK 1001-400 GLASSMILK 1001-600 EZ-GLASSMILK ● ● ● NEW TBE wash modifier ● ● ● ● ● Label block ● Elusion BioFloat/ solution Boil away ● ● ● ● ● Binding buffer ● Elution buffer ● Wash buffer ● Collection tube ● Spin column 品 名 メーカー 商品コード PCR Product Purification Kit (20 reactions) BDL DS350 包装 / 価格(¥) 20 units / 11,500 FAX 03 5 - 684 1 - 775 TEL 03 5 - 684 1 - 620 [メーカー:GEN] 品名 商品コード GENECLEAN Kit 1001-200 GENECLEAN Ⅱ Kit 1001-400 GENECLEAN Ⅲ Kit 1001-600 DNA サイズ prep 数 電気泳動用 価格(¥) 操作時間 バッファー (SPIN Moodule 使用) 包装 200 200 bp ∼ 20 kb 20 分 29,000 TAE (200 bp ∼ 300 kb) 1 kit 300 200 bp ∼ 20 kb TAE, TBE 20 分 36,000 (200 bp ∼ 300 kb) 1 kit 600 200 bp ∼ 20 kb TAE, TBE < 20 分 52,000 (200 bp ∼ 300 kb) 1 kit ※ 上記以外の GENECLEAN Kit と別売品については,当社テクニカル BioDynamics Laboratory 社 製品カタログ 2008 (A4 版,24 ページ) (日本語版) ※ご希望の際は,フナコシホームページ (http://www.funakoshi.co.jp/)の オ ン ラ イ ン 請 求 か,当 社 営 業 担 当(Tel. 03-5684-1615, FAX 03-5684-1634) までお申し込み下さい。 サポート(欄外参照)へお問い合わせ下さい。 080301s_P08_k_n_i.indd 8 2008/02/14 11:50:19
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