一般的研究用試薬 in vitro に推奨されます。 DNase I recombinant, grade I 牛膵臓由来 Pichia pastoris 発現 凍結乾燥品 製品番号 4536282 2×10000 ユニット バージョン 1 2004 年 9 月 保存温度 2∼8℃ 製品概要 形状 凍結乾燥品 2×10000 ユニット 保存と安定性 2∼8℃に保存した場合、ラベルに記載の使用期限まで安定です。 製品説明 Pichia pastoris に組み替えられた牛膵臓由来の DNase I は、最大 39 kD の分子量の糖タンパク質です。この組み換え酵素は動物細胞 を使わずに、他の動物由来成分を含まずに製造されます。 DNase I は DNA 特異的ヌクレアーゼです。2 本鎖 DNA と一本鎖 DNA を モノヌクレオチドやオリゴヌクレオチドに分解します。本酵素は最 大の酵素活性を持つために 2 価の陽イオンを必要とします。 反応の特異性は使用する陽イオンに依存します。Mg2+存在下で DNase I は 2 本鎖 DNA の一本鎖にニックを生じさせ、Mn2+存在下で 2 本鎖を 分解します。 アプリケーション DNase I recombinamt, grade I は下記のアプリケーションに使用で きます。 ・タンパク質抽出時の DNA 除去 ・クロマチン構造解析 ・サンプル調製時の DNA 除去 酵素活性 凍結乾燥品は 3000 ユニット/mg 以上です。 ロットごとの値は製品 のラベルに記載しています。Kunitz に沿った 1 ユニットは吸光度 260 nm を 1 分間に 0.001/mim の割合で増加させる酵素活性です。 特異活性 7000 U/mg タンパク以上 品質管理 ロットごとの分析値はラベルに記載 RNase が含まれていないことを確認 MS2 RNA（5μg）を DNase I 2 U と共に 37℃で 2 時間インキュベー ト（バッファーは、25 mM Tris-HCl、5 mM MgCl 2、0.1 mM EDTA, pH 7.2）し、分解されていないことを確認します。 Protease が含まれていないことを確認 Resorufin 標識カゼイン（200 ng）を DNase I 50 U と共に 37℃で 17 時間インキュベート（40 mM Tris-HCl、4 mM CaCl 2, pH 7.8）し ます。トリクロロ酢酸（TCA）にて反応を停止させ、遠心分離します。 上清の pH を 500 mM Tris-HCl で pH 8.8 に調節します。上清の吸光 度を 574 nm で測定し、上清に TCA で沈殿しない Resorufin 標識ペプ チドが含まれているか、確認します。 DNase I は 574 nm で吸光度を測定した場合、シグナルを検出しませ ん。 実験条件 活性容量は、0.1 M 酢酸ナトリウム、5 mM 硫化マグネシウム pH 5.0 中で決定されます。 反応ミックス：牛胸腺 DNA（100 ng）を 20∼50 U の DNase I と 25℃ で混ぜ合わせます。 吸光度の増加は 260 nm で測定します。 ノート：これらの条件は、Kunitz 分析が最適な再現性と感度を得ら れるので、用いられます。しかしながら、一般的な実験でこれらの 方法を用いる場合、インキュベーションバッファーとしてスタンダ ードな文献（Sambrook et.al., Curr. Prot. Mol. Biol., etc）で 紹介されているバッファーの使用を推奨します。 操作方法 Molecular Biology の一般的なプロトコールでは、下記の反応条件 が指示されています。 100μL 反応 50 mM Tris-HCl, pH 7.5 10 mM MgCl2（1 本鎖 DNA ニッキング。2 本鎖 DNA の分解には MnCl2 に置き換えます。） 2μg DNA 50μg/mL BSA 1μL DNase I（アプリケーションにより可変） 37℃で 1∼30 分間（希望する分解量に依存します）インキュベート します。0.5 M EDTA を 5μL 加え、反応を停止させます。ニックト ランスレーションには、DNA Polymerase I を同時に加えます。 溶解酵素の長期保存 一般的な溶媒として水が推奨されます。DNase I を水に再溶解した 場合、4 度で 2 日間、-20℃で 1 ヶ月安定です。最も良い実験結果の ためには、溶解後の酵素は小分け分注し、凍結融解の反復を避けま す。 しかしながら、長期保存には、注意して下記の溶媒に溶解します。 バッファー1 では数週間安定です。バッファー2、3、4 では推奨温度 で 18 ヶ月安定です。 ノート：溶解した酵素はボルテックスしないで下さい。少なくとも 1 mg/ml 以上の濃度になっていることを確認して下さい。 バッファー1 20 mM Tris-HCl, 20 mM MgCl2, 5 mM CaCl2, 0.1 mM dithioerythritol, 0.1 mM EDTA, 50 % (v/v) glycerol, pH 8.0 -20℃で数週間保存出来ます。この溶液はこの温度で凍結しません。 バッファー2 20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 1 mM dithioerythritol, 100 μ g/ml BSA, 50% glycerol (v/v), pH 7.6 -20℃で18ヶ月保存出来ます。この溶液はこの温度で凍結しません。 バッファー3 20 mM Tris-HCl, 1 mM MgCl 2, 50 % (w/v) glycerol, pH 7.5. -20℃で18ヶ月保存出来ます。この溶液はこの温度で凍結しません。 バッファー4 20 mM Tris-HCl, 1 mM MgCl 2, pH 7.5 小分け分注して下さい。ドライアイスですばやく凍結した後、-70℃ で18ヶ月保存出来ます。必要分だけ融解して使用して下さい。融解 後の再凍結は避けて下さい。融解後の余分は廃棄して下さい。 参考 1 Kunitz, M. (1950) J. Gen. Physiol. 33: 349-362 2 Ceni, C. et al. (2003) J. Biol. Chem. 278(42): 40670-40678 3 Angermayr, M. et al. (2002) Nucleic Acids Research 30(19): 4199-4207 4 Foerstemann, K. et al. (2003) Nucleic Acids Research 31(6): 1646-1655 5 Ausubel, F. M., Brent, R., Kingston, R. E., Moore, D. D., Seidmann, J. G., Smith, J. A., Struhl, K. (Eds) Current Protocols in Molecular Biology (2004), Wiley & Sons; Four Volumes 0-471-50338-X-Looseleaf or 0-471-30661-4-CD-Rom. 関連製品 製品名 Protector RNase Inhibitor 包装単位 2000 U 10000 U (5×2000 U) 1 Kit (2×10 Labeling) 10 Labeling/Detection 1 Kit (50 reactions) 1 Kit (100 reactions) 1 Kit (50 reactions) 2000 U (4×500 U)200 reactions 500 U (50 reactions) 250 U (25 reactions) 50 reactions 製品番号 3335399 3335402 250 units 1000 units 1 Kit (50 reactions; 5 control reactions) 20 tablets 3×20 tablets 500 g 642711 642720 1427580 DIG RNA Labeling Kit(SP6/T7) DIG Northern Starter Kit High Pure RNA Isolation Kit High Pure RNA Paraffin Kit High Pure RNA Tissue Kit Transcriptor Reverse Transcriptase Transcriptor 1st Strand cDNA Synthesis Kit DNA Polymerase I, endonuclea se-free RNase Protection Kit Complete Tris -HCl 1175025 2039672 1828665 3270289 2033674 3531287 3531295 3531317 4379012 1697498 1836145 812846 ロシュアプライドサイエンスへのコンタクトは www.roche-applied-science.com 本製品の説明書 www.roche-applied-science.com/pack-insert/04536282001a.pdf 新しくなったオンラインテクニカルサポートサイト www.roche-applied-science.com/support r Roche Diagnostics GmbH Roche Applied Science Nonnenwald 2 82372 Penzberg Germany
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![平成 27 年 5 月 14 日 [神戸大学大学院農学研究科] 李智博准教授が](http://s1.expydoc.com/store/data/006070707_1-3e6fd1585bf925076db6363e411c729d-250x500.png)
