2012/10/29 第一薬科大学 3年生 『分子生物学』後期 第５回 分子生物学研究室 担当：荒牧弘範 (H24.10.2９) 問２６ ラクトースオペロンは、通常、プロモータ ー下流のオペレーターにlac[ ]が結合して おり転写が抑制されている。lac[ ]はラクト ース代謝物が結合することで構造が変化して オペレーターから解離し、転写が可能となる。 [ ]の中に入れるべき字句はどれか。 １ アクチベータ― ２ リプレッサー ○ ３ エンハンサー ４ RNAポリメラーゼ ５ DNAポリメラーゼ 問２７ ラクトースオペロンについて、正しい記 述はどれか。 １ ラクトースの代謝に関する5つの遺伝子から 形成される。 ２ 各遺伝子はそれぞれ異なるオペレーターの 支配を受ける。 ３ lacリプレッサーはオペレーターに結合し転 写を促進する。 ４ lacリプレッサーの構造変化により転写が開 ○ 始される。 ５ アクチベータ―はRNAポリメラーゼに結合し 転写を抑制する。 問２６ ラクトースオペロンは、通常、プロモータ ー下流のオペレーターにlac[ ]が結合して おり転写が抑制されている。lac[ ]はラクト ース代謝物が結合することで構造が変化して オペレーターから解離し、転写が可能となる。 [ ]の中に入れるべき字句はどれか。 １ アクチベータ― ２ リプレッサー ３ エンハンサー ４ RNAポリメラーゼ ５ DNAポリメラーゼ 問２７ ラクトースオペロンについて、正しい記 述はどれか。 １ ラクトースの代謝に関する5つの遺伝子から 形成される。 ２ 各遺伝子はそれぞれ異なるオペレーターの 支配を受ける。 ３ lacリプレッサーはオペレーターに結合し転 写を促進する。 ４ lacリプレッサーの構造変化により転写が開 始される。 ５ アクチベータ―はRNAポリメラーゼに結合し 転写を抑制する。 問２８ 遺伝子の転写の開始部位を決定し、 RNAポリメラーゼや転写因子の結合するDNA 上の特定領域はどれか。 １ エンハンサー ２ サイレンサー ３ プロモーター ４ イントロン ５ エキソン 1 2012/10/29 問２８ 遺伝子の転写の開始部位を決定し、 RNAポリメラーゼや転写因子の結合する DNA上の特定領域はどれか。 １ エンハンサー ２ サイレンサー ３ プロモーター ○ ４ イントロン ５ エキソン 問２９ 真核生物において、転写開始点から離 れた領域に存在し、転写を著しく促進させる DNA上の配列はどれか。 １ エンハンサー ２ サイレンサー ３ オペレーター ４ リプレッサー ５ プロモーター 問２９ 真核生物において、転写開始点から離 れた領域に存在し、転写を著しく促進させる DNA上の配列はどれか。 １ エンハンサー ○ ２ サイレンサー ３ オペレーター ４ リプレッサー ５ プロモーター 転写制御 因子 転写 制御 因子 CAATボッ クス コアクチ ベータ― TBP RNAポリメ ラーゼII TATAAA TATAボッ イニシエータ ー配列 クス mRNA 問３０ 真核生物において、その近傍に位置す る遺伝子の転写を著しく活性化するDNA上 の配列はどれか。 １ エンハンサー ○ ２ サイレンサー ３ オペレーター ４ イントロン ５ エキソン 転写制御 因子 転写 制御 因子 CAATボッ クス コアクチ ベータ― TBP RNAポリメ ラーゼII TATAAA TATAボッ イニシエータ ー配列 クス mRNA 問３０ 真核生物において、その近傍に位置す る遺伝子の転写を著しく活性化するDNA上の 配列はどれか。 １ エンハンサー ２ サイレンサー ３ オペレーター ４ イントロン ５ エキソン 問３１ 真核生物のRNAについて、正しい記述 はどれか。 １ mRNAは細胞内に最も多量に存在するRNA である。 ２ mRNAは3’末端にキャップ構造を有する。 ３ tRNAはリボソームを構成するRNAである。 ４ RNAは多くの修飾塩基を含んでいる。 ５ rRNAはタンパク質のアミノ酸配列をコードし ている。 2 2012/10/29 問３１ 真核生物のRNAについて、正しい記述 はどれか。 １ mRNAは細胞内に最も多量に存在するRNA である。 ２ mRNAは3’末端にキャップ構造を有する。 ３ tRNAはリボソームを構成するRNAである。 ４ RNAは多くの修飾塩基を含んでいる。 ５ rRNAはタンパク質のアミノ酸配列をコードし ている。 ○ 問３２ RNAの働きと種類について、正しい記述は どれか。 １ mRNAはリボソームを構成するRNAである。 ２ tRNAはタンパク質のアミノ酸配列を指定する。 ３ rRNAはmRNAのスプライシングに関与する。 ４ snRNAはアミノ酸の担体として機能する。 ５ いずれのRNAもDNAを鋳型として生合成される。 ○ 問３３ 真核生物mRNAの3’末端に結合するも のはどれか。 １ polyA ○ ２ polyG ３ polyC ４ polyT ５ polyU 問３２ RNAの働きと種類について、正しい記述は どれか。 １ mRNAはリボソームを構成するRNAである。 ２ tRNAはタンパク質のアミノ酸配列を指定する。 ３ rRNAはmRNAのスプライシングに関与する。 ４ snRNAはアミノ酸の担体として機能する。 ５ いずれのRNAもDNAを鋳型として生合成される。 問３３ 真核生物mRNAの3’末端に結合するも のはどれか。 １ polyA ２ polyG ３ polyC ４ polyT ５ polyU 問３４ 原核生物と真核生物のmRNAについて、共 通する記述はどれか。 １ 転写により核内で合成される。 ２ 5’末端にキャップ構造をもつ。 ３ 3’末端にポリ（A）配列をもつ。 ４ スプライシングによりイントロンが除去される。 ５ 3個のヌクレオチド配列が1つのアミノ酸をコー ドする。 3 2012/10/29 問３４ 原核生物と真核生物のmRNAについて、共 通する記述はどれか。 １ 転写により核内で合成される。 ２ 5’末端にキャップ構造をもつ。 ３ 3’末端にポリ（A）配列をもつ。 ４ スプライシングによりイントロンが除去される。 ５ 3個のヌクレオチド配列が1つのアミノ酸をコー ○ ドする。 問３５ 真核細胞におけるmRNAの成熟過程に 起こるプロセシングとして、誤っている記述は どれか。 １ キャップ構造の付加 ２ イントロンの除去 ３ CCA配列の付加 ４ エキソン同士の連結 ５ ポリ（A）の付加 問３５ 真核細胞におけるmRNAの成熟過程に 起こるプロセシングとして、誤っている記述は どれか。 １ キャップ構造の付加 ２ イントロンの除去 ３ CCA配列の付加 ○ ４ エキソン同士の連結 ５ ポリ（A）の付加 朝日新聞 10/25/2012 4 2012/10/29 b. DNAの検出 ` ` ` ` 電気泳動で分離したDNA断片は、ゲルから回収して DNAのサブクローニングに用いることもできる(8章, p140)。 紫外線照射器には、254 nm(短波長)と366 nM(長波長) のものがある。短波長を照射した場合、バンドは鮮明に 見えるがDNAに損傷を与えやすい。 したがって、ゲルからDNA断片を回収する場合には長 波長の紫外線を照射する。 最近では、光源に青色LEDを用いた眼や皮膚へのダメ ージの少ない装置も開発されている。 C 遺伝子操作の基本 - DNAおよびRNAの検出 (p116) ＳＢＯ ` 細胞（組織）における特定のＤＮＡおよびＲＮＡを検出す る方法を説明できる。 ポイント ` 特定のDNAおよびRNAを検出する方法についてそれら の種類・基本原理や感度について理解する。 ①サザンブロット(Southern blot)法 ①サザンブロット(Southern blot)法 特定の遺伝子あるいはDNA断片をニトロセルロースな どのフィルター上で検出する方法であり、1975年にEdwin Southernが考案した。 ` この方法は大きく3つのステップからなる。 ① 制限酵素で断片化した二本鎖DNAをアガロース電気 泳動にて分離する。 ②分画したDNAを変性したのち、ニトロセルロース紙上に 移す(この操作をブロッティングという)。 ③ 放射性同位元素で標識したDNAプローブを②で得られ たニトロセルロースと反応させたのち(この操作をハイブ リダイゼーションという) ① 制限酵素で断片化した 二本鎖DNAをアガロース 電気泳動にて分離する。 ` ①サザンブロット(Southern blot)法 ① 制限酵素で断片化した 二本鎖DNAをアガロース 電気泳動にて分離する。 ②分画したDNAを変性した のち、ニトロセルロース紙 上に移す(この操作をブロ ッティングという)。 5 2012/10/29 ①サザンブロット(Southern blot)法 ①サザンブロット(Southern blot)法 ③放射性同位元素で標識したDNAプローブを②で得られ たニトロセルロースと反応させたのち(この操作をハイブリ ダイゼーションという)、オートラジオグラフィーにて検出す る。 ` 非放射性物質で標識したDNAプローブで行うことが多い。 ` サザンブロット法で目的のDNAが得られたら遺伝子クローニ ングやPCR(p121)で複製して量を増やし塩基配列を決定する (p118)。 ②ノーザンブロット(northern blot)法 ` 上述のサザンブロット法に対してRNAを検出する方法を ノーザンブロット法という。 ②ノーザンブロット(northern blot)法 ` ` ` ノーザンは人名ではない。 サザンブロット法と同様に放射性同位元素や非放射性 同位物質で標識する。 RNA検出法としてノーザンブロット法のほかに検出感度 を向上させたRNaseプロテクション法やRT-PCR法がある 。 ②ノーザンブロット(northern blot)法 ①泳動前にRNAをホルムアルデヒドやグリオキサルなど の変性剤でRNAを変性し、変性条件下でアガロース電気 泳動にて分離する。 ②ノーザンブロット(northern blot)法 ` 検出感度はおおむねRT-PCR法>RNaseプロテクション法 >ノーザンブロット法の順である。 ` RT-PCRでは逆転写酵素を用いる。 ` ＤＮＡ→ ＲＮＡ→ タンパク質？ 6 2012/10/29 ウエスタンブロット法 今日の誕生花 ゲッカビジン（月下美人） デ リ カ シ ー 7
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