LC Technical Note アミドカラムを使用した食品中のシュウ酸分析 109 GL Sciences Inc. 今回はカルバモイル基結合型シリカゲルカラムであるInertsil Amideを使用したシュウ酸の分析をご紹介します。カルバモイル基結合型シリカゲルは2011年4月に施行された改正第十六日本薬局方にクロマトグラフィー用担体/ 充填剤として追加されました。シュウ酸の分析ではODSカラムを使用して分析する場合がありますが、十分な保持を得られません。そのため、夾雑成分との分離が困難でした。一方、Inertsil Amideはシュウ酸のような高極性化合物を保持することができるのが特長です。シュウ酸は多くの食品に含まれており、多いもので、1 %程度のシュウ酸を含む食品があります。今回は、シュウ酸が比較的多く含まれている生姜漬物（ガリ）をInertsil Amideカラムで分析しました。 (K. Kanno) 標準液測定例 HPLC条件 10 1. Oxalic acid （100 mg/L）カラム : Inertsil Amide (5μm, 4.6 mm I.D. x 250 mm) 溶離液 : A) CH3CN B) 30 mM Na2HPO4 (pH 6.8, H3PO4) A/B = 65/35, v/v 流量 : 1.0 mL/min 8 1 mAU 6 カラム温度 : 50 ℃ 4 検出 : UV 220 nm 注入量 : 5 μL 構造式 2 O HO 0 OH O 1. Oxalic acid 0 2 4 6 Time (min) 8 10 Structures are created using Chemistry 4-D Draw which is provided by ChemInnovation Software, Inc. 2500000 表１．シュウ酸（100 mg/L）の面積値 2000000 2 面積値 R = 0.9999 1500000 1000000 500000 0 0 200 400 600 800 1000 1200 1回目 2回目 3回目 4回目 5回目 RSD% 面積値 228967 228243 228072 227364 227627 0.27% 濃度(mg/L) 図１．シュウ酸の検量線バックナンバーやアプリケーション検索はこちらから・・・ http://www.gls.co.jp/hplc.html GL Sciences　LC　Technical　Note 前処理例（生姜漬物）市販生姜漬物（ガリ）　分析例試料 (10 g) 1. シュウ酸液層残渣２回行う 50 %メタノール (10 mL) 遠心分離(10 min) 液層 mAU 10 粉砕水 (25 mL) ※1 遠心分離 (30 min) 1 残渣アセトニトリルで50 mLにメスアップ 0 0.45 μm フィルター HPLC 0 2 4 6 Time (min) 8 10 ※1　試料中にアスコルビン酸が含まれる場合、シュウ酸の回収率が低下する可能性がありますのでアスコルビン酸除去操作を行ってください。食品衛生検査指針　食品添加物編参照 HPLC装置：GL-7400 シリーズ Amideカラム使用のテクニック① AmideカラムはHILICモードで分析します。HILICモードは有機溶媒比率が高いため、有機溶媒に対して溶解性の高い塩を使用するのがポイントです。＜推奨の塩と濃度＞酢酸アンモニウム、ギ酸アンモニウム　10 mM程度これらの塩はシュウ酸のような酸性化合物やUVの低波長領域で分析では不向きな場合があります。その際は、リン酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩を使用してください。ただし、アセトニトリルに対する溶解性が低いため、塩の析出には十分注意して使用してください。 HPLCカラム： Inertsil Amide　5μm 4.6 mm I.D.×250mm Cat. No. 5020-07836 番号 1 2 3 4 5 品名キャリアリザーバーカラムオーブンポンプ UV検出器オートサンプラー 1 型番 GL-7480 GL-7430 GL-7410 GL-7450 GL-7420 4 2 5 3 ジーエルサイエンスでは、分析ノウハウときめこまやかなフォローもお付けしたシステム提案を行っております。お近くの営業所やカスタマーサポートセンターまでお気軽にお問い合わせください。ホームページはこちらから・・・ http://www.gls.co.jp/hplc.html 〒163-1130　東京都新宿区西新宿6丁目22番1号　新宿スクエアタワー30F TEL.03(5323)6611　FAX.03(5323)6622 TEL.03(5323)6611 TEL.06(6357)5060 TEL.045(985)7900 TEL.024(533)2244 TEL.029(858)3700 TEL.043(248)2441 TEL.048(667)1611 TEL.052(931)1761 TEL.082(233)1101 TEL.092(291)5200 FAX.03(5323)6622 FAX.06(6357)4580 FAX.045(985)7901 FAX.024(536)1518 FAX.029(858)3780 FAX.043(248)2485 FAX.048(667)1656 FAX.052(931)1814 FAX.082(233)1110 FAX.092(291)2552 ｶｽﾀﾏｰｻﾎﾟｰﾄｾﾝﾀｰ T E L . 0 4 ( 2 9 3 4 ) 1 1 0 0 FAX.04(2934)3361 東大横東筑千北名広九京営業阪支浜支北営業波営業葉営業関東営業古屋営業島営業州営業部店店所所所所所所所ジーエルサイエンス LC テクニカルノート