APTIMA HPV Assay op PANTHER toestel

ACTIVITEITENCENTRUM
MOLECULAIRE DIAGNOSTIEK
LABA-AL041-AN52
M03
APTIMA HPV Assay op PANTHER toestel
Kwalitatieve detectie van HPV-mRNA in cervicale stalen
INHOUD







Indicaties
Kostprijs en terugbetalingsmodaliteiten.
Uitvoerfrequentie.
Kwaliteitscontrole
Beproevingsmethode
Interpretatie resultaat
Referenties
INDICATIES



Opsporen van hoogrisico HPV op cervicovaginale afnamen in geval van aangetoonde
aanwezigheid van atypische cellen.
Opsporen van hoogrisico HPV op cervicovaginale afnamen als opvolging bij:
 reeds eerder aangetoonde aanwezigheid van atypische cellen
 de behandeling van hooggradige cervicale intra-epitheliale neoplasie
Opsporen van hoogrisico HPV op cervicovaginale afnamen voor het identificeren van vrouwen
met een verhoogd risico op cervixkanker of vrouwen met een hooggradige premaligne
cervixafwijking.
KOSTPRIJS EN TERUGBETALINGSMODALITEITEN
Zie labogids:



Voorwaarden voor RIZIV terugbetaling
RIZIV Nomenclatuurnummer
‘Extra - per formulier en aanvraag’ (diagnoseregels/prijs)
UITVOERINGSFREQUENTIE
Zie labogids: items ‘uitvoerfrequentie’ en ‘antwoordtijd’
KWALITEITSCONTROLE

HPV test opgenomen in accreditatie scope (218-MED), wijziging methode sinds september
2014.
Bij elke analyse wordt een Interne Controle (IC) meegenomen om de verschillende stappen van de
analyse te controleren (extractie, amplificatie en detectie). Op basis van de ‘Relative Light Units (RLU)’
en ‘signal-to-cutoff (S/CO)’ (zie verder) van deze interne controle en het staal, wordt het staalresultaat al
dan niet aanvaard.
CEMOL/LabA
Toepassingsdatum zie metadata MuzliDoc
1/3
ACTIVITEITENCENTRUM
MOLECULAIRE DIAGNOSTIEK
LABA-AL041-AN52
M03
Bij elke run wordt bovendien een ‘house-made’ eerstelijnscontrole meegenomen.
BEPROEVINGSMETHODE
De APTIMA HPV Assay is een in vitro test voor de kwalitatieve detectie van het E6/E7 virale messenger
RNA van 14 hoog-risico types van humaan papillomavirus (HPV) in cervicale stalen. Deze hoog-risico
HPV-types zijn: 16-18-31-33-35-39-45-51-52-56-58-59-66 en 68. Er wordt geen onderscheid gemaakt
tussen de verschillende types. De APTIMA HPV Assay wordt uitgevoerd op het PANTHER-toestel van
de firma HOLOGIC.
Bepaling op cervicale uitstrijkjes afgenomen in ThinPrep Pap Test vial met PreservCyt Solution.
De APTIMA HPV Assay omvat 3 stappen die plaats vinden in 1 tube:



Extractie (Target capture)
Het staal wordt overgebracht in een tube met ‘specimen transport media (STM)’. Hierdoor worden
de cellen gelyseerd en komt het messenger RNA vrij. Het target messenger RNA (target mRNA)
wordt geïsoleerd door ‘capture oligomers’ (deze bevatten de sequenties complementair aan
specifieke regio’s van het target mRNA). Deze capture oligomers zijn gelinkt aan magnetische
micropartikels. Het voordeel van deze magnetische beads is dat deze magnetisch aangetrokken
kunnen worden naar de rand van de tube zodat overtollig materiaal kan weggewassen worden.
Amplificatie (Target amplification door Transcription-Mediated Amplification (TMA))
HPV mRNA wordt geamplificeerd met behulp van 2 enzymes: een reverse transcriptase en een
RNA-polymerase. Reverse transcriptase zorgt voor de aanmaak van copy-DNA (cDNA) uit het
target mRNA. RNA-polymerase produceert vervolgens multipele RNA amplicons uit het cDNA.
Deze amplicons zorgen voor een herhaling van de hele cyclus. Deze werkwijze zorgt voor een
exponentiele amplificatie (1 miljard copies/uur).
Detectie (Detectie van de amplicons)
Detectie gebeurt met chemiluminescent gelabelde probes die complementair zijn aan het
amplicon. De gelabelde probes binden specifiek aan het amplicon waarna de lichtemissie
gedetecteerd wordt in een luminometer. Dit wordt uitgedrukt in ‘Relative Light Units (RLU)’. Het
uiteindelijke resultaat wordt geïnterpreteerd op basis van ‘signal-to-cutoff (S/CO)’.
INTERPRETATIE RESULTAAT
De test geeft kwantitatieve resultaten (‘Relative Light Units (RLU)’ en ‘signal-to-cutoff (S/CO)’) met een
kwalitatieve interpretatie. Op basis van de RLU en S/CO van de Interne Controle en het staal kan het
testresultaat ‘negatief’, positief’ of ‘invalid’ zijn. Criteria hiervoor zijn de volgende:
CEMOL/LabA
Toepassingsdatum zie metadata MuzliDoc
2/3
ACTIVITEITENCENTRUM
MOLECULAIRE DIAGNOSTIEK
LABA-AL041-AN52
M03


Negatief: Geen HPV E6/E7 mRNA gedetecteerd
Positief: HPV E6/E7 mRNA van één of meerdere hoog-risico HPV-types gedetecteerd.
Volgende hoog-risico HPV-types worden gedetecteerd: 16-18-31-33-35-39-45-51-52-56-58-5966 en 68. Er wordt geen onderscheid gemaakt tussen de verschillende types.

Invalid: Niet interpreteerbaar. Analyse dient herhaald te worden.
REFERENTIES

www.GEN-PROBE.com

APTIMA HPV Assay package insert #502170 Rev. A 2011

Arbyn M et al. The APTIMA HPV assay versus the Hybrid Capture 2 test in triage of women with
ASC-US or LSIL cervical cytology: a meta-analysis of the diagnostic accuracy. Int J Cancer
2013; 132: 101-8.

Clad A et al. Performance of the Aptima high-risk human papillomavirus mRNA assay in a
referral population in comparison with Hybrid Capture 2 and cytology. J Clin Microbiol 2011; 49:
1071-6.

CLEAR trial. Gen-Probe. APTIMA HPV Assay.

Monsonego J et al. Evaluation of oncogenic human papillomavirus RNA and DNA tests with
liquid-based cytology in primary cervical cancer screening: the FASE study. Int J Cancer 2011;
129: 691-701.

Monsonego J et al. Risk assessment and clinical impact of liquid-based cytology, oncogenic
human papillomavirus (HPV) DNA and mRNA testing in primary cervical cancer screening (the
FASE study). Gynecol Oncol 2012; 125: 175-80.

Ratnam S et al. Aptima HPV E6/E7 mRNA test is as sensitive as Hybrid Capture 2 Assay but
more specific at detecting cervical precancer and cancer. J Clin Microbiol 2011; 49: 557-64.

Stoler MH et al. APTIMA HPV assay performance in women with atypical squamous cells of
undetermined significance cytology results. Am J Obstet Gynecol 2013; 208: 144.e1-8.
CEMOL/LabA
Toepassingsdatum zie metadata MuzliDoc
3/3

Download Report