生体試料におけるPCB分析 ○上瀧智巳1）、森千里2）、中野武3） 1）㈱エスアールエル、 2）千葉大学大学院医学研究院、 3）兵庫県立健康環境科学研究センターはじめに  ヒトや動物が内分泌攪乱化学物質に暴露されると、生殖系や神経系に悪影響を及ぼすことが心配されている。 PCBsも内分泌攪乱作用を有していると疑われており、ヒトへの蓄積・暴露状況の把握が求められつつあり、血液などの生体試料におけるPCBsの濃度測定を行うことが必要とされている。  そこで、今回HRGC/HRMSを用いて、生体試料における PCBsの分析方法の検討を行ったので、その結果について報告する。また、全血と血漿によるPCBの濃度比較についても併せて報告する。前処理操作試料 5 g クリーンアップスパイク添加 C 1 2 - PCB s 13 アルカリ分解脱水 1 mol/ L KOH/ エタノール　1 5 mL 室温、1 8 時間放置無水硫酸ナトリウム濃縮蒸留水　1 0 mL ヘキサン　1 0 mL×3 5 min 振とうフロリジルカラム処理液々分配有機層活性フロリジル　5g 予備洗浄：ヘキサン 100mL 溶出：ヘキサン 50mL 水層濃縮水洗蒸留水　1 0 mL×3 溶解シリンジスパイク添加 C 12 -PCBs 13 GC/MS HRGC/HRMS分析条件 MS AutoSpec-Ultima(Micromass) Ionization mode EI Electron Energy 38eV Trap current 700μA Accel Voltage 8 ｋV Ion source Temp 280℃ Interface Temp 300℃ Resolution M/ΔM ＞ 10,000（10%Valley） GC Agilent 6890 Plus GC （Agilent Technologies inc） Column HT8-PCB（関東化学）60m x 0.25mmI.D. Injector PTV Injection Volume 5μL Oven Temp 60℃(2.5min)-20℃/min-180℃-2℃/min-260℃-5℃/min-300℃ (4min) Flow He 1mL/min（constant flow） C o m po u n d 操作ブランクと定量下限＜操作ブランク＞試料を用いずに前処理および測定をn=6 で行い算出最大で 0.97pg を検出＜定量下限＞ 1. 装置の定量下限低濃度の標準品をn=6にて測定を行い、測定値の10SDより算出 2. 測定方法の定量下限操作ブランク値の10SDより算出定量下限＝ 0.067～0.31pg/g Mono M 1 C B(# 3 ) Di D2 C B(# 8 ) D2 C B(# 1 5 ) Tri T 3 C B(# 1 8 ) T 3 C B(# 3 1 ) T 3 C B(# 2 8 ) T 3 C B(# 3 3 ) Tetra T 4 C B(# 5 2 ) T 4 C B(# 4 4 ) T 4 C B(# 7 0 ) T 4 C B(# 6 6 ) T 4 C B(# 8 1 ) T 4 C B(# 7 7 ) Pe n t a P5 C B(# 9 5 ) P5 C B(# 1 0 1 ) P5 C B(# 1 1 0 ) P5 C B(# 1 2 3 ) P5 C B(# 1 1 8 ) P5 C B(# 1 1 4 ) P5 C B(# 1 0 5 ) P5 C B(# 1 2 6 ) He xa H6 C B(# 1 4 9 ) H6 C B(# 1 5 3 ) H6 C B(# 1 3 8 ) H6 C B(# 1 6 7 ) H6 C B(# 1 5 6 ) H6 C B(# 1 5 7 ) H6 C B(# 1 6 9 ) He pt a H7 C B(# 1 8 7 ) H7 C B(# 1 7 4 ) H7 C B(# 1 8 0 ) H7 C B(# 1 7 0 ) H7 C B(# 1 8 9 ) Oc t a O8 C B(# 1 9 9 ) O8 C B(# 2 0 3 ) O8 C B(# 1 9 4 ) No n a N9 C B(# 2 0 6 ) De c a D1 0 C B(# 2 0 9 ) Blan k M e an （ pg）試料あたりの濃度に換算した全操作ブランク値（ pg/ gまたはm L）試料あたりの濃度に換算した装置の定量下限値　（ pg/ gまたはm L）試料あたりの濃度に換算した測定方法の定量下限値　（ pg/ gまたはm L） 0.96 0.19 0.034 0.31 0.97 0.52 0.19 0.10 0.14 0.081 0.24 0.13 0.39 0.40 0.66 0.35 0.077 0.080 0.13 0.069 0.018 0.023 0.034 0.032 0.25 0.11 0.17 0.085 0.18 0.15 0.23 0.16 0 0 0.035 0.030 0.046 0.033 0 0 0.033 0.028 0.014 0.015 0.016 0.021 0.068 0.036 0.094 0.084 0 0 0.075 0.11 0.091 0 0.086 0 0.043 0 0.015 0.021 0.018 0 0.017 0 0.0087 0 0.073 0.092 0.035 0.040 0.048 0.055 0.035 0.065 0.080 0.058 0.045 0 0.075 0 0.069 0 0.075 0.099 0.11 0 0.015 0 0 0.015 0.020 0.022 0 0.0030 0 0 0.038 0.027 0.077 0.054 0.040 0.038 0.058 0.023 0.044 0.023 0 0.073 0 0 0 0 0.099 0.12 0 0 0 0.020 0.024 0 0.042 0.038 0.048 0.046 0.046 0 0 0.029 0.079 0 0 0 0.075 0 0 0.015 0.070 0.090 0.057 0 0 0.017 0.087 0.017 0.067 0.0078 0.68 0.14 0.040 0.30 測定再現性プール血液の同時再現性 030430QC_01 030430QC_02 030430QC_03 030430QC_04 030430QC_05 030430QC_06 5.00g 5.01g 5.01g 5.01g 5.01g 5.02g M1CBs 0.411 0.393 0.395 0.355 0.399 0.427 D2CBs 2.078 1.911 1.756 1.866 1.948 1.930 T3CBs 7.632 7.743 7.601 8.042 7.743 7.607 T4CBs 73.309 74.586 74.423 75.025 74.531 74.279 P5CBs 132.604 133.914 135.528 133.456 135.067 133.846 H6CBs 521.245 525.793 522.649 526.252 530.162 529.675 H7CBs 341.067 339.514 345.157 343.692 340.218 334.997 O8CBs 84.598 101.667 84.837 85.983 85.914 84.864 N9CBs 10.681 10.327 10.686 10.545 10.423 10.575 D10CB 4.560 4.491 4.412 4.530 4.485 4.427 Total-PCBs 1178.186 1200.338 1187.445 1189.744 1190.891 1182.626 (pg/g) Average SD 0.397 1.915 7.728 74.359 134.069 525.963 340.774 87.977 10.540 4.484 1188.205 0.024 0.105 0.167 0.572 1.070 3.599 3.552 6.732 0.142 0.057 7.601 C.V. (%) 6.07% 5.51% 2.16% 0.77% 0.80% 0.68% 1.04% 7.65% 1.35% 1.28% 0.64% プール血液の日差再現性 030430QC_01 030522QC_07 030715EX_13 5.00g 5.00g 5.07g M1CBs 0.411 0.422 0.355 D2CBs 2.078 2.273 2.093 T3CBs 7.632 7.686 7.891 T4CBs 73.309 78.581 73.218 P5CBs 132.604 139.815 143.679 H6CBs 521.245 529.608 551.635 H7CBs 341.067 357.223 375.421 O8CBs 84.598 90.583 88.720 N9CBs 10.681 11.659 10.505 D10CB 4.560 4.794 4.473 Total-PCBs 1178.186 1222.645 1257.989 (pg/g) Average 0.396 2.148 7.736 75.036 138.699 534.163 357.904 87.967 10.948 4.609 1219.607 SD 0.036 0.108 0.136 3.070 5.621 15.698 17.187 3.063 0.621 0.166 39.988 C.V. (%) 9.11% 5.05% 1.76% 4.09% 4.05% 2.94% 4.80% 3.48% 5.68% 3.59% 3.28% 同時再現性 C.V.=0.64% 日差再現性 C.V.=3.28% 全血中と血漿中のPCB濃度比較（総PCB） Total-PCBs 1800 1600 全血(pg/g-wet) 1400 y = 0.5162x + 63.256 2 R = 0.9924 1200 1000 800 600 400 200 0 0 200 400 600 800 1000 血漿(pg/g-wet) 1200 1400 1600 1800 血液中におけるPCBの分布の検証総PCB濃度比較 1800 血球中のPCB濃度をゼロと仮定し、 1600 Total-PCB(pg/g-wet) 1400 換算前全血中のPCB濃度をﾍﾏﾄｸﾘｯﾄ値より 1200 1000 血漿全血 800 600 血漿あたりに換算し、比較を行った。（Total-PCBsにて） 400 200 0 Sample-1 Sample-2 Sample-3 Sample-4 Sample-5 Sample-6 総PCB濃度比較 1800 血漿換算 = 全血中濃度 / （1-ﾍﾏﾄｸﾘｯﾄ値） Total-PCBs(pg/g-wet) 血液中のPCBは概ね血漿中に 1600 1400 換算後 1200 1000 血漿全血 800 600 400 200 存在している可能性が示唆された。 0 Sample-1 Sample-2 Sample-3 Sample-4 Sample-5 Sample-6 PCBのマスクロマトグラム（Penta、 Hexa） KC-300,400,500,600 MIX 33.75 30.66 100 36.55 28.42 % 31.14 30.24 28.93 P5CB 32.87 38.93 32.54 34.82 31.99 35.96 37.22 0 100 ★ 2,3’,4,4’,5-P5CB Blood Sample 36.56 (#118) 2,2’,4,4’,5-P5CB(#99) 30.67 0 100 2,3,3’,4,4’ -P5CB (#105) 31.16 % ★ ★ ★ 37.91 35.97 32.51 38.94 40.29 ★ 37.89 KC-300,400,500,600 MIX 35.05 40.28 % 32.35 H6CB 40.08 33.96 37.41 35.93 37.19 0 100 38.79 40.55 39.58 42.70 45.43 46.23 2,2’,4,4’,5,5’-H6CB(#153) 37.91 Blood Sample 2,3,3’,4’,5,6-H6CB(#163) 2,2’,3,4,4’,5’-H6CB(#138) 40.29 2,3,3’,4,4’,5-H6CB(#156) % 40.09 37.21 0 26.00 28.00 30.00 32.00 34.00 36.00 38.00 40.00 ★ ★ 43.44 39.37 42.00 44.00 45.45 ★ 46.00 ★ 48.00 Time 50.00 ★ ：Co-PCB まとめ  血液試料を想定したHRGC/HRMSによるPCBsの分析方法の検討を行った。  最大 0.97 pg の操作ブランクが検出された。  定量下限は 0.067 ～ 0.31 pg/g であった。  同時再現性 C.V.=0.64%、日差再現性 C.V.=3.28% (Total-PCB値として)   全血と血漿でR2=0.99の正の相関が見られた。（Total-PCB値として) 血液中のPCBは概ね血漿中に存在している可能性が示唆された。参考文献（１）松村、他、環境化学 Vol.12, No.4, pp855, 2002 （２）門上、第26回日本環境化学会講演会予稿集, p109,1998 （３）血液中のダイオキシン類測定暫定マニュアル, 2000