次は,話題提供 ラットの系統選択と被験物質摂取量 1. SD (Sprague-Dawley/人名-英国の地名) は,系統 を示す.CD (Cesarean delivery/帝王切開分娩 = SPF動物を示す)は,子宮切断による出産を示す. Crjは,チャールズ リバー ジャパン(供給元)を表す. 2. F344は,Fischer(人名)344を示す. 3. SDは,F344に比較して体重および飼料摂取量が 大きく,子育てが上手. 4. SDは,急性(単回投与)毒性および生殖毒性試験 に常用されている. 1 混餌投与による被験物質摂取量 の系統差 SDとF344ラットの違い 小林克己 2009-06-23/前川先生勉強会 試験系の選択理由/登録申請データの記述 1. 反復投与試験に繁用されている動物種の 一つであるラットを選択した. 2. 系統は,背景データの保有量,既知化学物 質に対する感受性,感染性疾患に対する抵 抗性,遺伝的安定性を考慮して選択した. 3. 選択理由を記述した試験報告書は,2受託 機関. 3 混餌投与による供試動物の系統 出 典 日本の化審法 SDラット ○ F344ラット × NTP報告書 × ○ 一般投稿論文 ○ 7試験 ○ 6試験 体重および飼料摂取量: SD>F344 4 計算法の例 (短期反復投与毒性試験) 系統 週 齢 SD 6 飼料中の濃度 (mg/kg = ppm) 被験物質摂取量 (mg/kg/day) 雄 雌 4, 20, 100, 500 0.34, 1.4, 6.6, 44 倍率:飼料中の濃度 /被験物質 12, 14, 15, 11 摂取量 F344 6 1000, 5000, 15000 倍率:飼料中の濃度 /被験物質 摂取量 0.36, 1.7, 8.9, 60 11, 12, 11, 8 61, 303, 917 71, 360, 1068 16, 16, 16 14, 14, 14 5 系統差による 飼料中の濃度 /被験物質摂取量 系統 Wistar & SD F344 飼料中の濃度 (mg / kg ppm) 被験物質摂取量 (mg / kg / day ) 雄 雌 10.0, 10.0, 10.0, 12.5, 13.5, 13.2, 13.3, 11.7, 14.2, 15.1, 11.3, 6.9, 7.0, 7.0, 6.9, 10.0, 11.7, 14.2, 15.1, 11.3, 14.2 (11.3) 10.0, 10.0, 10.0, 12.5, 11.9, 11.8, 11.9, 11.1, 11.7, 11.2, 8.3, 6.9, 7.0, 7.0, 6.9, 10.0, 11.1, 11.7, 11.2, 8.3, 12.3 (10.0) 20.9, 16.3, 16.5, 16.3, 20.1, 14.5, 14.9, 14.9, 15.2, 16.8 (16.6) 17.5, 14.0, 13.8, 14.0, 17.6, 14.5, 11.1, 13.1, 13.2, 15.6 (14.6) 平均値± N 標準偏差 21×2 (sex) 10×2 (sex) 10.7±2.4 15.5±2.3*** 括弧は平均値,***P<0.001 by Student’s t-test with two-side P value. 6 考察 1. 飼料中濃度 (mg/kg = ppm)に占める被験物 質摂取量 (mg/kg/day)の割合は,SD系が 10.7倍に対してF344系が15.5倍であった. 2. この主原因は,SD系がF344系に比較して 添加飼料摂取量が多いことによる. 3. NOELおよびNOAEL値のみを大きく設定し たい場合は,F344系を使用することを推奨 する . 7 調査した試験の概要 1. ラットを用いた109の28日間反復投与毒性試験 /化審法ガイドライン 2. 調査項目: ①行動機能観察 (FOB)②尿検査 ③血液学的検査④血液生化学的検査⑤器官 重量とその体重比/投与28日後の定量値 3. 群構成: ①対照群を含めて4および5群(37試 験)②1群内動物数は,5匹程度③用量の公比 は,3が最も多い④被験物質の投与は,全て胃 ゾンデによる強制経口投与 8 使用された統計解析ツール 1. Bartlettの等分散検定 2. 分散分析(等分散OK = 平均値の検定) Dunnettの多重比較検定,Schefféの多重比 較検定,Duncanの多重範囲検定 3. Kruskal-Wallisの検定(非等分散 = 順位の 検定 = 平均値の検定ではナイ) Dunnett型ノンパラメトリック検定,Scheffé型 ノンパラメトリック検定,Steelの多重比較検 定など 9 有意差(P<0.05)検出数およびその 割合(その1,試験別からの結果) 試験番号 有意差検出数および(%) 項目数 低用量 中用量 高用量 最高用量 1 120 0 (0.0) 2 (1.7) 4 (3.3) 10 (11) 2 104 6 (5.7) 5 (4.8) 4 (3.8) - 108 130 2 (1.5) 4 (3.0) 16 (12) 31 (23) 109 116 1 (0.8) 1 (0.8) 2 (1.7) 9 (7.7) 試験数 109 109 109 109 37 合 計 12167 205 414 1318 731/4074 平均値 111 1.6% 3.4% 10% 17% 最大値 162 8.4% 17% 36% 55% 最小値 54 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 最頻値 - 0.0% - - - 10 有意差(P<0.05)検出数およびその 割合(その2, 測定項目からの結果) 測定項目 有意差検出数および(%) 項目 数 低用量 中用量 高用量 最高用量 FOB 68 1 (1.4) 3 (4.4) 8 (11) 1/10 (10) 尿検査 392 13 (3.3) 30 (7.6) 81 (20) 40/96 (40) 血液学検査 3586 56 (1.5) 106 (2.9) 318 (8.8) 176/1198 (14) 生化学検査 4285 79 (1.8) 163 (3.8) 455 (10) 267/1426 (18) 器官重量 1928 22 (1.1) 44 (2.2) 188 (14) 103/672 (15) 器官重量/BW比 1908 34 (1.7) 68 (3.5) 268 (14) 144/672 (17) 合計 12167 205(1.6) 414 (3.4) 1318(10) 731/4074 (17) 11 まとめ 1. 定期検査・解剖が投与開始後26, 52, 78および104 週で設定されている長期の慢性毒性試験など大 規模試験は,極めて多くの測定値が得られる.こ のため低用量群には,偶発的な統計学的有意差 が検出されやすい. 2. 低用量群に統計学的有意差が認められた場合の 無毒性量 (NOEL)は,毒性学的有意差の有無を検 討し設定したい. 3. 以上の調査結果から,全調査項目中,低用量群に 統計学的有意差が1–2% (<5%)程度認められても 試験が成立したと判断する. 12
© Copyright 2024 ExpyDoc