その３ HPLCにおける分離と特徴～逆相・順相について～（主に逆相です）逆相・順相とは？分離の場移動相→固定相→移動相カラム固定相（カラム）の極性が移動相の極性より高い分離系を順相クロマトグラフィーという。順相クロマトグラフィーに対して、移動相の極性が固定相の極性より高い分離系を逆相クロマトグラフィーという。極性とは？極性（きょくせい）とは、分子内に存在する電気的な偏りのことで、極性を持った物質の例として水が挙げられる。水分子において、酸素の原子核は水素の電子を引き付けるために酸素は負の電気的な偏りを持ち、逆に水素は正の電気的な偏りを持つことになる。 δ＋ δ－ H O H δ＋電子を引き付ける力一般に周期表の左下に位置する元素ほど小さく、右上ほど大きくなる。電気陰性度（大）電気陰性度極性分子と無極性分子 H2 δ－ H2 O N2 δ＋ δ＋ CO2 NH3 HCl δ－ δ＋ δ＋ δ＋ δ＋ δ－電気陰性度の偏りが大きい CH4 極性の近いもの同士は溶け易い極性は溶解や反応を考える際に重要で、例えば高極性物質は高極性溶媒に溶解しやすいが、低極性溶媒には溶解しにくいという性質がある。高い水極性アルコール例えば身近なところでは・・・水に油を混ぜても分離したまま水にアルコールを混ぜると水割りができる油汚れはアルコールで拭き取れる低い（無）油極性、非極性と疎水性、親水性疎水性とは、水に対する親和性が低い、すなわち水に溶けにくい、あるいは水と混じりにくい物質または分子（の一部分）の性質をいう。疎水性物質は一般に、電気的に中性の非極性物質である。分子内に炭化水素基をもつ物質が代表的である。油や有機溶媒に親和性を示す親油性も同義に用いられることが多い。これらの物質は水と分離して互いに集まる性質をもつので、水から他の疎水性（親油性）物質を除去・回収するのにも用いられる。対義語は親水性である。これは一般に極性または電荷を有することにより、水に溶けやすいまたは混じりやすいという性質を示す。親水性＝極性疎水性＝非極性順相・逆相クロマトグラフィー順相：固定相・・・・・シリカゲルなど移動相・・・・・ヘキサンなど極性：固定相＞移動相逆相：固定相・・・・・ODS（C１８）など移動相・・・・・水、メタノール、アセトニトリル極性：固定相＜移動相固定相（逆相カラム） ODS化シリル化剤：Cl-Si(X)2-C18H37 OH OH Si Si OH Si Si OH Si シリカゲル Si Si Si エンドキャッピング化トリメチルシリル化剤：Cl-Si(CH3)3 OH Si Si Si シリカゲル Si Si Si Si Si Si シリカゲル Si Si Si 例えば・・・逆相クロマトで考えてみると・・・親水性疎水性 C A A B 混合溶液 B C 混合溶液を逆相クロマトグラフィーへかけると・・・移動相はカラムよりも極性高い（親水性）カラム（疎水性） A B C 移動相の極性を以下のように変化させると・・・親水性疎水性濃度アセトニトリル水時間初めは溶媒中の水の割合が多く、移動相の極性が高いので、カラムがA、B、Cの物質を保持する力は強く、物質はカラムに結合したままですが、アセトニトリルの割合が上がり、極性が低下していくと・・・・。カラム CBA B A A 移動相の極性を変化させていくと、A、B、Cの各溶質の極性とつり合ったときに保持されているカラムから溶媒中へ溶離していきます。最も親水性のあるAが、まずカラムから移動相に溶離し、アセトニトリルの割合が増加するにつれ、B、Cが順に溶離していきます。 C A B