哺乳動物IgGのシアル酸分析(NeuAc, NeuGC)

哺乳動物 IgG のシアル酸分析(NeuAc, NeuGc)
GlyScope シアル酸分析キット ABEE Labeling Kit Plus S
シアル酸は、ほとんどの糖タンパク質糖鎖の末端(非還元末端)に結合し、細胞間の接着、分
化や炎症、癌化などに関与する重要な糖として知られています。
今回はシアル酸 2 種(NeuAc と NeuGc)の簡便な分析をご紹介します。
◇実験
GlyScope シアル酸分析キット ABEE Labeling Kit Plus S を用い、さまざまな哺乳動物の IgG から
シアル酸のみを遊離し、ABEE 標識化後 HPLC で分析しました。
*ABEE:Aminobenzoic ethylester (4-アミノ安息香酸エチルエステル)
◇結果
NeuGc
NeuAc
ブタ
ウサギ
ウシ
ヤギ
ヒツジ
カラム
移動相 A
移動相 B
プログラム
Honenpak C18 (4. 6mm×75mm )
0.2M ホウ酸カリウム/アセトニトリル (93/7) pH8.9
0.02% トリフルオロ酢酸/アセトニトリル (50/50)
0→50min. (B Conc.0%)
50→55min. (B Conc.100%)
55→75min. (B Conc.0%)
1mL/min
30℃
Fluorescence (Ex.305nm Em.360nm)
10μL
流速
カラム温度
検出
注入量
ヒト
図
哺乳動物 IgG のシアル酸分析
溶出時間(分)
表
2 種のシアル酸(NeuAc と NeuGc)の有無と文献情報との比較
動物
ブタ
ウサギ
ウシ
ヤギ
ヒツジ
ヒト
分析結果
NeuGc
NeuAc
○あり ×なし
○あり ○あり
○あり ×なし
○あり ×なし
○あり ×なし
×なし ○あり
文献情報**
NeuGc
NeuAc
N.D.
N.D.
○あり ○あり
○あり ×なし
○あり ×なし
○あり ×なし
×なし ○あり
** Raju TS, Briggs JB, Borge SM, Jones AJ., Glycobiology.,
(2000),10, 477
N.D.:No Data
動物種ごとに検出されたシアル酸の種類は異なり、ヒトでは N-アセチルノイラミン酸(NeuAc)
のみ検出されました。
簡単な操作でシアル酸の種類を分析することができます。